葉青萍，任建敏，丁卉(麗水市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江麗水323000)

長奈瑟菌(Neisseriaelongata)屬于奈瑟菌屬。奈瑟菌屬細(xì)菌主要寄居于人或動(dòng)物的口咽、鼻咽、胃腸道及泌尿生殖道等部位，人源性奈瑟菌除淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌被認(rèn)為是致病菌外[1]，其他大部分奈瑟菌(包括長奈瑟菌)被認(rèn)為是健康人群口咽部的定植菌，通常不致病。由長奈瑟菌引起的感染在國內(nèi)鮮有報(bào)道，僅有的幾例報(bào)道中以引起感染性心內(nèi)膜炎多見[2-3]?，F(xiàn)我院從1例膽道感染患者的血培養(yǎng)中分離到該菌，報(bào)道如下。

1 病例摘要

患者，男，57歲，因“肝癌術(shù)后一年半，發(fā)熱3 d”于2021年6月13日收住麗水市中心醫(yī)院。患者1年余前診斷為肝癌，曾多次入院治療。本次入院3 d前患者無明顯誘因下出現(xiàn)發(fā)熱，自述最高體溫39 ℃，自行使用吲哚美鋅栓退熱治療后體溫好轉(zhuǎn)。1 d前再次發(fā)熱，遂至我院急診就診，床邊心臟超聲示：左室擴(kuò)大，主動(dòng)脈瓣輕-中度關(guān)閉不全，二尖瓣輕度關(guān)閉不全。心肺聽診無殊。血液檢查示：快速超敏C反應(yīng)蛋白100.79 mg/L，白細(xì)胞10.5×109/L，中性粒細(xì)胞比例77.4%，淋巴細(xì)胞比例8.2%，紅細(xì)胞3.07×1012/L，血紅蛋白96 g/L，降鈣素原2.05 ng/mL，凝血酶原時(shí)間13.0 s，國際標(biāo)準(zhǔn)化比率1.20，凝血酶時(shí)間16.8 s，D-二聚體1.07 mg/L，總膽紅素56.9 μmol/L，肌酸激酶<20 U/L，CK同工酶18 U/L，乳酸脫氫酶288 U/L，尿素9.3 mmol/L，擬“膿毒血癥、肝惡性腫瘤”收住入院。6月13日于我院急診送檢血培養(yǎng)，15 h后陸續(xù)有3瓶血培養(yǎng)報(bào)陽，經(jīng)質(zhì)譜鑒定為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)。予氧頭孢烯類拉氧頭孢針靜滴、喹諾酮類莫西沙星口服抗感染,治療后體溫正常，C反應(yīng)蛋白、降鈣素原等感染指標(biāo)較前好轉(zhuǎn),考慮抗感染治療有效。本案例中的患者為惡性腫瘤末期，全身情況欠佳，在體溫控制正常之后，臨床主要予對(duì)癥支持姑息治療，改善癥狀，緩解痛苦。

2 細(xì)菌鑒定

2.1細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定 分別采集患者雙側(cè)2套血培養(yǎng)送檢，血培養(yǎng)采用VIRTUO全自動(dòng)微生物培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行，14 h 22 min后左側(cè)厭氧瓶報(bào)陽，14 h 45 min后右側(cè)厭氧瓶報(bào)陽，17 h后左側(cè)需氧瓶報(bào)陽。取陽性瓶內(nèi)菌懸液直接涂片革蘭染色(珠海貝索公司)，鏡下可見革蘭陰性桿菌，轉(zhuǎn)種于哥倫比亞血瓊脂平板和巧克力瓊脂平板(溫州康泰公司)，置35 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，在血平板和巧克力平板上生長良好，呈1～2 mm、淡黃色、圓形、濕潤、凸起的菌落(見圖1)，純培養(yǎng)物涂片呈陰性球桿菌。觸酶陰性，氧化酶陽性。3瓶陽性報(bào)警瓶轉(zhuǎn)種后的純培養(yǎng)物經(jīng)法國生物梅里埃Vitek MS質(zhì)譜儀鑒定均為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)，置信度均為99.9%。將血平板及巧克力平板繼續(xù)溫育3～4 d后，呈現(xiàn)典型的奈瑟菌屬細(xì)菌的菌落形態(tài)(見圖2)。

圖1 35 ℃、5%CO2培養(yǎng)24 h菌落形態(tài)(左：血平板；右：巧克力平板)

圖2 35 ℃、5%CO2培養(yǎng)4 d菌落形態(tài)(左：血平板；右：巧克力平板)

2.2分子生物學(xué)方法 將細(xì)菌送至杭州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司利用IonPGM個(gè)人化操作基因組測序儀進(jìn)行測序，其方法為檢測16S rDNA V2、V3、V4、V6、V7、V8、V9可變區(qū)，得出的序列號(hào)經(jīng)BLAST比對(duì),顯示相似度最高的為NO.NR_104944.1，百分比為99.66%，第二NO.NR_025893.1為99.33%，第三NO.NR_028900.1為96.63%，前兩名均為Neisseriaelongata。

3 討論

本例患者為中老年男性，肝癌術(shù)后1年半，期間進(jìn)行了多次手術(shù)及術(shù)后化療等診療措施?；颊哂?021年4月15日曾行“膽管支架植入術(shù)”，術(shù)前、術(shù)后反復(fù)發(fā)熱，血培養(yǎng)曾提示陰溝腸桿菌感染，診斷“膽道感染，敗血癥”，此次因發(fā)熱入院，在急診室就診時(shí)予以雙側(cè)雙瓶送檢血培養(yǎng)，在4瓶中出現(xiàn)3瓶陽性，鑒定結(jié)果均為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)，同時(shí)血液中降鈣素原、CRP等感染指標(biāo)均提示升高，可以排除污染可能。

關(guān)于長奈瑟菌引起的感染國內(nèi)報(bào)道極少，同時(shí)奈瑟菌屬一般被認(rèn)為是健康人群口咽部及鼻咽部的正常菌群，很少引起感染，主要見于牙科手術(shù)及介入性心血管操作后[2]。本例患者在發(fā)病前并未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)的介入性操作，其感染途徑及機(jī)制尚不明確?？赡芘c床邊心臟超聲中提示的主動(dòng)脈瓣及二尖瓣關(guān)閉不全有關(guān)，已知心臟瓣膜病是感染性心內(nèi)膜炎的主要發(fā)病因素之一，且該患者為肝癌術(shù)后，多次接受化療，免疫功能低下。

奈瑟菌屬細(xì)菌鏡下形態(tài)大多為直徑不超過2 μm的球菌，單個(gè)或成雙排列。但長奈瑟菌為短桿狀[4]，本例患者血培養(yǎng)直接涂片表現(xiàn)為革蘭陰性桿菌，在血平板及巧克力平板上生長良好，轉(zhuǎn)種后純培養(yǎng)物涂片呈陰性球桿菌。直接通過Vitek MS質(zhì)譜儀鑒定為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)，由于其形態(tài)與屬內(nèi)其他菌種相差較大，筆者再次通過質(zhì)譜儀進(jìn)行復(fù)查，結(jié)果與首次一致，置信度均為99.9%。觸酶陰性，氧化酶陽性，這與參考資料描述一致[1]。最終利用16S rRNA分子生物學(xué)方法鑒定，結(jié)果亦為長奈瑟菌(Neisseriaelongata)。奈瑟菌屬細(xì)菌一般為專性需氧菌，而該患者首先陽性報(bào)警的是厭氧瓶，經(jīng)分析可能有以下幾點(diǎn)原因。首先，本實(shí)驗(yàn)室采用的是生物梅里埃公司提供的普通型厭氧瓶，達(dá)不到完全的厭氧環(huán)境，但是其營養(yǎng)成分要比需氧瓶更好一些，通過查閱本實(shí)驗(yàn)室過去2年間報(bào)陽的其他專性需氧菌(如銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌)的生長情況，也一樣存在厭氧瓶先報(bào)陽的情況；其次，該患者首先報(bào)陽的厭氧瓶血量充足，而4瓶里最終沒有報(bào)陽的那瓶血量只有1 mL，筆者認(rèn)為這也是需要考慮的一部分原因，同時(shí)也應(yīng)該引起采血人員的注意，在平時(shí)的工作中要注意足量規(guī)范采血。

本案例報(bào)道的長奈瑟菌引起敗血癥，基本可以明確，關(guān)于是否引起感染性心內(nèi)膜炎尚沒有明確的臨床證據(jù)證明，但是也應(yīng)該引起注意。由于該細(xì)菌比較少見，使用一般的生化反應(yīng)鑒定容易誤檢為其他細(xì)菌，若是臨床送檢為單套血培養(yǎng)，極易被當(dāng)成污染菌而漏檢，由于本院已經(jīng)施行雙側(cè)雙瓶送檢，并且引進(jìn)了Vitek MS質(zhì)譜儀，才最終得以正確的鑒定。由于長奈瑟菌引起感染的病例報(bào)道較少，對(duì)該菌的認(rèn)識(shí)尚淺，也沒有相關(guān)的藥敏試驗(yàn)方法推薦?；颊呷朐汉笈R床予氧頭孢烯類拉氧頭孢針2 g q12 h靜滴、喹諾酮類莫西沙星0.4 g qd口服抗感染，抗感染治療后體溫恢復(fù)正常，考慮抗感染治療有效，故在收到實(shí)驗(yàn)室陽性結(jié)果后仍考慮繼續(xù)當(dāng)前治療。

綜上所述，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)該對(duì)長奈瑟菌引起一定的重視，提高該菌的鑒定準(zhǔn)確性，并進(jìn)一步研究完善其相關(guān)資料，為以后的預(yù)防、診治提供依據(jù)。同時(shí)應(yīng)該提倡臨床及時(shí)規(guī)范送檢血培養(yǎng)，按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行足量采血，做到雙側(cè)雙瓶送檢，而微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員也應(yīng)該加強(qiáng)與臨床的及時(shí)有效溝通，在遇到一些少見的細(xì)菌時(shí)更應(yīng)如此。本病例中長奈瑟菌的及時(shí)準(zhǔn)確鑒定依賴于質(zhì)譜技術(shù)的引進(jìn)，表明質(zhì)譜技術(shù)的普及對(duì)臨床疑難菌和少見菌的快速鑒定有重大意義，可為臨床及時(shí)診治提供可靠的依據(jù)。