指狀青霉V-ATP酶H亞基蛋白的功能

閆 等，彭麗桃，李 杰，楊書珍

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，湖北 武漢 430070）

柑橘是世界和我國(guó)第一大類水果，其種植面積和產(chǎn)量均具世界前列，柑橘產(chǎn)業(yè)是南方農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)[1]。但柑橘果實(shí)含水量高，營(yíng)養(yǎng)豐富，在采后貯運(yùn)、加工過(guò)程中極易遭受病原真菌的侵染而腐爛變質(zhì)，其中指狀青霉（Penicillium digitatum）的侵染性最強(qiáng)，對(duì)柑橘的危害最為嚴(yán)重，給生產(chǎn)帶來(lái)巨大的損失[2-4]?；瘜W(xué)殺菌劑處理是目前生產(chǎn)上控制柑橘采后侵染性病害的主要方法，但隨著化學(xué)殺菌劑在生產(chǎn)中長(zhǎng)期、大量使用，指狀青霉對(duì)化學(xué)殺菌劑的抗藥性大幅度提高。由此產(chǎn)生的食品安全、農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染等問(wèn)題嚴(yán)重限制了柑橘產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[5-7]。因此，研究與開發(fā)具有新型、高效、低耐藥性的殺菌劑對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。

分子生物學(xué)的發(fā)展開啟了“靶點(diǎn)-高通量篩選-先導(dǎo)物優(yōu)化”揭示的現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)模式。作用靶點(diǎn)是研發(fā)新型殺菌劑的前提。通過(guò)解析生物體生命代謝通路中關(guān)鍵蛋白和基因的功能，從中篩選有效作用靶點(diǎn)已經(jīng)成為研發(fā)新型多靶點(diǎn)藥物的重要途徑。pH值穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)是維持真菌細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，保證細(xì)胞代謝與生理功能正常的重要前提[8]。pH值穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)的破壞顯著抑制白色念珠菌的生長(zhǎng)[9]，影響球孢白僵菌細(xì)胞骨架的維持[10]；此外，pH值穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)與病原真菌侵染寄主的過(guò)程密切相關(guān)。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)幾乎所有蛋白質(zhì)和各細(xì)胞器功能的行使、物質(zhì)代謝、氧化應(yīng)激、離子穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞分化、內(nèi)吞作用以及侵染寄主等生命過(guò)程均離不開細(xì)胞內(nèi)pH值的精準(zhǔn)調(diào)控，是發(fā)現(xiàn)新型藥物靶點(diǎn)的重要途徑[11]。V-ATP酶是調(diào)控真核細(xì)胞pH值穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵酶，廣泛分布于真菌和其他真核細(xì)胞的液泡、質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜以及高爾基體等內(nèi)膜系統(tǒng)中，負(fù)責(zé)將H＋從細(xì)胞液跨膜運(yùn)輸?shù)礁骷?xì)胞器中，維持細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)pH值穩(wěn)態(tài)[12]。V-ATP酶是一個(gè)由多亞基組成的復(fù)合物，主要由V1和V0兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成。其中，V-ATP酶H亞基蛋白（V-ATPase membrane subunit H，VMAH）主要負(fù)責(zé)調(diào)控復(fù)合體V1和V0的組裝以及通過(guò)水解ATP調(diào)控H＋的跨膜運(yùn)輸[13-14]。釀酒酵母細(xì)胞中VMAH的缺失會(huì)導(dǎo)致菌體出現(xiàn)致死現(xiàn)象[15]。在球孢白僵菌中VMAH功能缺失會(huì)導(dǎo)致菌體細(xì)胞pH值穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)和Ca2＋穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)的破壞[10]。前期研究也發(fā)現(xiàn)，VMAH是指狀青霉V-ATP酶的關(guān)鍵亞基蛋白，在病原菌生長(zhǎng)和侵染過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。此外，VMAH亞基蛋白的蛋白結(jié)構(gòu)和氨基酸序列真菌特異性強(qiáng)，作為新型殺菌劑作用靶點(diǎn)具有潛在的研究前景[16]，因此，在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步利用RNA干擾技術(shù)和基因過(guò)表達(dá)技術(shù)，研究VMAH在指狀青霉生長(zhǎng)過(guò)程中的生理功能以及作為抑制柑橘綠霉病的藥物作用靶點(diǎn)的可行性，為研發(fā)適合柑橘采后防腐保鮮的殺菌劑提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野生型指狀青霉菌株WT（菌株編號(hào)：DSM62840）德國(guó)微生物菌種保藏中心；VMAH沉默和過(guò)表達(dá)指狀青霉突變株si14和oe12，實(shí)驗(yàn)室分別利用RNA干擾技術(shù)和過(guò)表達(dá)技術(shù)獲得。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，加入1 L蒸餾水，煮沸后取濾液加入蔗糖10 g，瓊脂20 g，121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min；馬鈴薯葡萄糖液體（potato dextrose broth，PDB）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，加入1 L蒸餾水，煮沸后取濾液加入蔗糖10 g，121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min。

質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑聯(lián)苯芐唑、酮康唑、奧美拉唑、泰妥拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、巴佛洛霉素A1、依布硒、克霉唑（除克霉唑純度大于99%外，其他純度均大于98%） 上海麥克林生化科技有限公司；NaCl、KCl、CaCl2、CuCl2、FeSO4、MgSO4、H2O2（均為分析純）國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SPX-150BIII生化培養(yǎng)箱 北京鑫潤(rùn)科諾儀器儀表有限公司；EX20Thermo Fisher顯微鏡 寧波舜宇儀器有限公司；SHZ-82A氣浴恒溫振蕩器 江蘇省金壇市宏華儀器廠；LGJ-10冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司。

1.3 方法

1.3.1 正常生長(zhǎng)環(huán)境下指狀青霉菌絲生長(zhǎng)特性評(píng)價(jià)

參考菌餅法[17]稍作修改，取在PDA培養(yǎng)基上26 ℃培養(yǎng)3 d的野生、沉默、過(guò)表達(dá)指狀青霉孢子，制成1×106spores/mL孢子菌懸液，吸取200 μL孢子懸浮液均勻涂布于PDA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至產(chǎn)生白色菌絲后，用7 mm打孔器打取菌餅，將菌餅反貼于PDA培養(yǎng)基，于（26±2）℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔24 h采用十字交叉法測(cè)定病原菌的菌落直徑。

1.3.2 不同酸堿環(huán)境下指狀青霉生長(zhǎng)特性評(píng)價(jià)

取在PDA培養(yǎng)基上26 ℃培養(yǎng)3 d的野生、沉默、過(guò)表達(dá)指狀青霉孢子，制成1×106spores/mL孢子菌懸液，取100 μL孢子懸浮液接種于含50 mL pH值分別為2、4、6、8、10的PDB培養(yǎng)基中，透氣膜封口并搖勻，置于恒溫?fù)u床中（26±2）℃、120 r/min培養(yǎng)48 h。拍照觀察菌絲形態(tài)；然后用紗布過(guò)濾取菌絲，用蒸餾水沖洗2 次，濾紙吸干表面水分后冷凍干燥機(jī)上干燥48 h，分析天平記錄菌絲干質(zhì)量，菌絲干質(zhì)量表示菌體生物量。

1.3.3 不同離子脅迫環(huán)境下指狀青霉生長(zhǎng)特性評(píng)價(jià)

參考1.3.1節(jié)采用菌落反貼的方法研究VMAH沉默對(duì)指狀青霉離子脅迫環(huán)境適應(yīng)性的影響。將生長(zhǎng)狀態(tài)一致的野生型、沉默和過(guò)表達(dá)指狀青霉的7 mm菌落，分別反貼至含有不同濃度的NaCl、KCl、CaCl2、CuCl2、FeSO4、MgSO4的PDA培養(yǎng)基中，置于26 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)并定期觀察。以正常PDA培養(yǎng)為空白對(duì)照。每個(gè)菌株設(shè)置3 個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)7 d，采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑。按下式計(jì)算不同脅迫條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的相對(duì)抑制率：

1.3.4 活性氧脅迫環(huán)境下指狀青霉生長(zhǎng)特性的評(píng)價(jià)

將生長(zhǎng)狀態(tài)一致的野生型、沉默和過(guò)表達(dá)指狀青霉的7 mm菌落，分別反貼至含有不同濃度H2O2的PDA培養(yǎng)基中，置于26 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)并定期觀察。以正常PDA培養(yǎng)為空白對(duì)照。每個(gè)菌株設(shè)置3 個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)7 d，采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑。計(jì)算其不同脅迫條件對(duì)菌落生長(zhǎng)的相對(duì)抑制率。

1.3.5 指狀青霉對(duì)質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑的敏感性評(píng)價(jià)

利用孢子萌發(fā)法[18]研究VMAH基因沉默對(duì)指狀青霉質(zhì)子泵抑制劑敏感性的影響。用二甲亞砜分別配制不同質(zhì)子泵抑制劑的母液，通過(guò)二倍稀釋法將藥物稀釋成不同系列濃度，取10 μL各藥液與5 mL 0.5%的PDA培養(yǎng)基混勻后，均勻鋪在載玻片上，培養(yǎng)基凝固后，分別吸取40 μL濃度為1×106spores/mL野生、沉默、過(guò)表達(dá)指狀青霉孢子懸液滴在載玻片的培養(yǎng)基上，（26±2）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h左右，觀察孢子萌發(fā)的情況，統(tǒng)計(jì)孢子萌發(fā)數(shù)量，計(jì)算孢子萌發(fā)率和抑制率，以藥物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，孢子萌發(fā)抑制率為縱坐標(biāo)，根據(jù)藥物毒力回歸方程計(jì)算藥物抑菌的半最大效應(yīng)濃度（the median effective concentration，EC50）[19]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖，所有數(shù)據(jù)均為3 次重復(fù)所得，分析采用SPSS 23軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，應(yīng)用最小顯著差數(shù)法檢驗(yàn)差異顯著性（P＜0.05，差異顯著）。

2 結(jié)果與分析

2.1 VMAH沉默和過(guò)表達(dá)對(duì)正常條件下指狀青霉菌絲生長(zhǎng)特性的影響

由圖1A可知，與同時(shí)期的野生株相比，基因沉默株的生長(zhǎng)勢(shì)明顯變?nèi)?，產(chǎn)孢量顯著降低；而過(guò)表達(dá)株的生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)于野生株，菌落直徑和產(chǎn)孢量均大于野生株。進(jìn)一步測(cè)定菌絲體的生長(zhǎng)曲線（圖1B）發(fā)現(xiàn)，在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，基因沉默株si14的菌落直徑始終小于野生株；而過(guò)表達(dá)株oe12的菌落直徑大于野生株。因此，沉默VMAH抑制了指狀青霉的生長(zhǎng)，而過(guò)表達(dá)VMAH促進(jìn)了指狀青霉的生長(zhǎng)。

圖1 VMAH基因?qū)χ笭钋嗝咕z生長(zhǎng)的影響Fig. 1 Effect of VMAH gene on the growth of P. digitatum hyphae

2.2 VMAH沉默和過(guò)表達(dá)對(duì)不同pH值環(huán)境下指狀青霉生長(zhǎng)特性的影響

圖2 VMAH基因?qū)χ笭钋嗝筽H值適應(yīng)性的影響Fig. 2 Effect of VMAH gene on pH adaptability of P. digitatum

如圖2所示，WT、si14和oe12的菌絲對(duì)偏酸和偏堿條件比較敏感，在pH 10的培養(yǎng)基中，菌絲均不生長(zhǎng)。在pH 2的培養(yǎng)基中，過(guò)表達(dá)和野生菌株都有少量的菌絲生長(zhǎng)，無(wú)明顯成球的菌絲體，沉默菌株的菌絲量相對(duì)更少，菌絲分散。在pH 8的培養(yǎng)基中，WT、si14和oe12都可以看到球狀菌絲，而沉默菌絲球體積較小，呈米粒狀，整體密度不大，分散比較明顯；野生型相對(duì)于沉默菌株，其菌絲球體積偏大，在培養(yǎng)基中分布也比較均勻，密度適中；過(guò)表達(dá)相對(duì)于前者，其菌絲球體積最大，而且菌絲球致密且規(guī)則。同時(shí)，在不同pH值環(huán)境下，沉默菌株的生物量顯著低于野生株，在pH 2和pH 8時(shí)差異更為顯著；而過(guò)表達(dá)株的生物量顯著高于野生株，在pH 6時(shí)差異最為顯著。

2.3 VMAH沉默和過(guò)表達(dá)對(duì)不同離子脅迫條件下指狀青霉生長(zhǎng)特性的影響

圖3 VMAH基因?qū)χ笭钋嗝闺x子脅迫環(huán)境適應(yīng)性的影響Fig. 3 Effect of VMAH gene on environmental adaptability of P. digitatum to ion stress

如圖3所示，在6 種金屬離子的脅迫環(huán)境下，沉默突變株si14對(duì)高濃度的Ca2＋、Fe2＋、Cu2＋比較敏感，對(duì)Na＋、K＋、Mg2＋不敏感，其中，沉默突變株對(duì)高濃度Ca2＋敏感度最高，當(dāng)Ca2＋達(dá)到1 mol/L時(shí)，其菌絲的相對(duì)抑制率可達(dá)90%左右，而且抑制率顯著高于野生型和過(guò)表達(dá)菌株。過(guò)表達(dá)菌株對(duì)高濃度的Cu2＋比較敏感，對(duì)其他5 種金屬離子不敏感。其中，低濃度的Ca2＋對(duì)過(guò)表達(dá)菌株起輕微促進(jìn)作用。

2.4 VMAH沉默和過(guò)表達(dá)對(duì)指狀青霉H2O2脅迫環(huán)境的影響

圖4 VMAH基因?qū)χ笭钋嗝笻2O2脅迫環(huán)境的影響Fig. 4 Effect of VMAH gene on the response of P. digitatum to H2O2 stress

如圖4所示，用不同濃度的H2O2處理后，其生長(zhǎng)狀況受到不同程度的抑制，菌落直徑隨著H2O2濃度的增大不斷減小，并且菌絲的產(chǎn)孢量也不斷下降，菌落形態(tài)沒(méi)有發(fā)生明顯變化。從菌絲生長(zhǎng)的相對(duì)抑制率可以看出低濃度H2O2對(duì)野生菌株和沉默菌株的抑制作用較小，無(wú)顯著差異，而對(duì)過(guò)表達(dá)菌株的相對(duì)抑制率較高。隨著H2O2濃度的增大，菌絲生長(zhǎng)的相對(duì)抑制率不斷增大，當(dāng)其濃度為40 mmol/L時(shí)，沉默菌株對(duì)H2O2更為敏感，其菌絲生長(zhǎng)的相對(duì)抑制率顯著大于野生株，而過(guò)表達(dá)菌株的相對(duì)抑制率明顯小于野生菌株和沉默菌株。

2.5 VMAH沉默和過(guò)表達(dá)對(duì)指狀青霉質(zhì)子泵抑制劑敏感性的影響

表1 VMAH基因?qū)χ笭钋嗝官|(zhì)子泵抑制劑抑菌EC50的影響Table 1 Effect of VMAH gene on the median effective concentration(EC50) of proton pump inhibitors against P. digitatum

通過(guò)孢子萌發(fā)法研究VMAH基因沉默后指狀青霉對(duì)質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑的敏感性。本研究選取了包括唑類在內(nèi)的9 種質(zhì)子泵抑制劑，由表1可見(jiàn)，相比于野生株，沉默菌株對(duì)于除依布硒之外，其他7 種質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑的敏感性都顯著提高；其中沉默菌株對(duì)V-ATP酶的專一抑制劑巴佛洛霉素A1的敏感性提高最為顯著，其EC50為10.44 μg/mL，僅為野生株EC50（80.11 μg/mL）的13%。過(guò)表達(dá)菌株對(duì)質(zhì)子泵抑制劑的敏感性顯著降低，其中巴佛洛霉素A1的敏感性下降最為顯著，其EC50值為172.08 μg/mL，是野生株的2 倍。因此，沉默VMAH基因顯著提高了指狀青霉質(zhì)子泵類抑制劑的敏感性，尤其是對(duì)巴佛洛霉素A1的敏感增加最多；而過(guò)表達(dá)VMAH基因顯著降低了指狀青霉對(duì)質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑的敏感性。

3 討論與結(jié)論

V-ATP酶在真菌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Keenan等[15]在釀酒酵母突變菌株中發(fā)現(xiàn)，V-ATP酶中游離V1復(fù)合體H亞基的缺失會(huì)出現(xiàn)致死現(xiàn)象。絲狀真菌Ashbya gossypii Vma1基因缺失突變株的生長(zhǎng)速率下降，并且無(wú)法形成生殖孢子[20]。白色念珠菌的Vma5亞基缺失突變株也出現(xiàn)菌絲發(fā)育缺陷、生長(zhǎng)抑制以及毒力減弱等表征[21]。Lin Meng等[22]發(fā)現(xiàn)VMAH功能缺失會(huì)影響釀酒酵母液泡內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的貯存和穩(wěn)定，進(jìn)而影響酵母絲狀體的形成，導(dǎo)致其生長(zhǎng)速率慢于野生型。球孢白僵菌中也有類似發(fā)現(xiàn)，VMAH基因缺失的突變株，產(chǎn)孢量下降，產(chǎn)孢時(shí)間延長(zhǎng)，同時(shí)出現(xiàn)相當(dāng)程度的生長(zhǎng)缺陷及致病力的減弱[23]。本研究發(fā)現(xiàn)，VMAH基因沉默的轉(zhuǎn)化子，菌絲生長(zhǎng)速率明顯下降，產(chǎn)孢量也顯著減少。因此，VMAH在指狀青霉生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

V-ATP酶參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的pH值應(yīng)答，在維持細(xì)胞內(nèi)外pH值平衡中發(fā)揮著重要的作用。VMAH基因敲除后會(huì)導(dǎo)致球孢白僵菌液泡pH值顯著升高，菌絲生長(zhǎng)環(huán)境酸化加快，胞內(nèi)外pH值失衡[23]。光滑念珠菌的VMAHVPH2基因缺失突變株的液泡pH值穩(wěn)態(tài)受損，對(duì)堿性條件較為敏感[24]。Martinez-Munoz等[25]研究發(fā)現(xiàn)VMAH基因突變會(huì)導(dǎo)致酵母菌液泡pH值的顯著增加，pH值穩(wěn)態(tài)遭到破壞。白念珠菌V-ATP酶亞基Vma7p缺失后，菌體液泡酸化度降低，在堿性條件下生長(zhǎng)有一定缺陷[26]。而本研究發(fā)現(xiàn)，VMAH基因沉默突變顯著降低了指狀青霉在極酸（pH 2）和偏堿（pH 8）條件下的生長(zhǎng)力，菌絲生長(zhǎng)量顯著減少。因此，VMAH通過(guò)調(diào)控V-ATP酶活性，在指狀青霉pH值脅迫條件下pH值穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮重要作用。

V-ATP酶在維持真核生物的離子穩(wěn)態(tài)和氧化應(yīng)激方面也發(fā)揮著一定作用[27-28]。釀酒酵母中V-ATP酶缺失突變株對(duì)金屬離子和H2O2比較敏感，與胞質(zhì)高度酸化和活性氧增加有關(guān)[29]。Jia Chang等[30]研究發(fā)現(xiàn)白色念珠菌V-ATP酶亞基Tfpl缺失突變株對(duì)重金屬離子和高濃度的Ca2＋高度敏感，突變株細(xì)胞內(nèi)活性氧水平升高。光滑念珠菌中V-ATP酶組裝相關(guān)基因VPH2缺失的突變株對(duì)胞外高濃度Ca2＋、Na＋等離子和氧化劑H2O2的敏感性增加[31]。Zhang Kai等[21]研究也發(fā)現(xiàn)，白色念珠菌的Vma5亞基缺失，不僅影響菌絲的形成和降解酶的分泌，還導(dǎo)致鈣穩(wěn)態(tài)紊亂，Ca2＋相關(guān)的氧化應(yīng)激反應(yīng)受到抑制。通過(guò)研究指狀青霉VMAH基因沉默突變株對(duì)于金屬離子和氧化劑H2O2脅迫的敏感性發(fā)現(xiàn)，VMAH沉默突變株對(duì)胞外高濃度的Ca2＋、Fe2＋、Cu2＋和氧化劑H2O2的敏感性較高，尤其是高濃度的Ca2＋對(duì)突變株抑制作用較顯著。推測(cè)突變體對(duì)金屬離子的高度敏感性與維持離子穩(wěn)態(tài)的缺陷有關(guān)，這些金屬離子穩(wěn)態(tài)失衡可能進(jìn)一步引起內(nèi)源氧化應(yīng)激，從而對(duì)氧化劑H2O2比較敏感，表明VMAH通過(guò)調(diào)控V-ATP酶活性在維持細(xì)胞離子穩(wěn)態(tài)、活性氧水平和氧化應(yīng)激方面起重要的作用。

研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境pH值影響病原菌對(duì)抗生素的敏感性[32]。編碼光滑念珠菌V-ATP酶組裝的VPH2基因的缺失，會(huì)增強(qiáng)對(duì)抗真菌劑（唑類和兩性霉素B）的敏感性[24]。Zhang Yongqiang等[33]發(fā)現(xiàn)抗真菌藥物的唑類化合物通過(guò)抑制細(xì)胞膜脂組分甾醇的合成和V-ATP酶的活性進(jìn)而引起菌體細(xì)胞的死亡。位于細(xì)胞膜的P-ATP酶亞基Spfl的缺失會(huì)提高菌體對(duì)氟康唑、衣霉素和潮霉素B敏感性[34]。酵母菌V-ATP酶亞基a的突變體對(duì)巴佛洛霉素具有抗性[35]。本研究發(fā)現(xiàn)VMAH基因沉默對(duì)導(dǎo)致菌體對(duì)質(zhì)子泵抑制劑類殺菌劑尤其是V-ATP酶的專一性抑制劑巴佛洛霉素A1的敏感性提高，而過(guò)表達(dá)突變株對(duì)質(zhì)子泵抑制劑的敏感性降低。因此，VMAH與質(zhì)子泵類殺菌劑具有協(xié)同殺菌作用，是多靶點(diǎn)殺菌劑研發(fā)的潛在藥物靶點(diǎn)。

綜上所述，VMAH在指狀青霉的生長(zhǎng)、pH值和離子穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)的維持、活性氧水平和氧化應(yīng)激方面發(fā)揮著重要作用，作為控制柑橘采后綠霉病殺菌劑的作用靶點(diǎn)值得進(jìn)一步深入研究。