hnRNP A2/B1對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的作用機制研究

艾紅艷?黃彥

摘要：目的：探究hnRNP A2/B1對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的作用機制。方法：將2020年1月-2021年1月接診的100例乳腺癌分為空白對照組（未轉(zhuǎn)染）、陰性對照組（轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒）和hnRNP A2/B1下調(diào)組（轉(zhuǎn)染shRNA-hnRNP A2/B1干擾質(zhì)粒）。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，觀察綠色熒光蛋白的表達，以鑒定轉(zhuǎn)染效果。MTT法和FCM法分別檢測各組細(xì)胞的增殖活力、周期分布和早期凋亡率，Transwell細(xì)胞遷移與侵襲實驗。實時熒光定量PCR檢測各組細(xì)胞hnRNP A2/B1、p-PI3K、p-AKT mRNA表達，Western Blot法檢測各組細(xì)胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表達。結(jié)果：細(xì)胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表達結(jié)果表明，shRNA-hnRNPA2/B1質(zhì)粒下調(diào)組低于陰性對照組與空白對照組，P<0.05。結(jié)論：hnRNP A2/B1對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響在于p-PI3K、p-AKT 蛋白。

關(guān)鍵詞：hnRNP A2/B1;乳腺癌細(xì)胞;生物學(xué)行為;影響;作用機制

【中圖分類號】R737.9 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）09--01

近期研究表明，乳腺癌的發(fā)展以及其對治療的反應(yīng)與大量特殊的剪切癌基因以及腫瘤抑制因子等相關(guān)。選擇性剪切的過程在癌癥中可產(chǎn)生明顯的錯誤調(diào)控，并且有研究顯示其對癌細(xì)胞亞型的轉(zhuǎn)變具有明顯作用。甚至，在許多癌癥中一些剪接體突變的元件也被預(yù)測可以導(dǎo)致驅(qū)動突變，這為剪接因子在癌癥發(fā)展過程中的重要作用提供了有力的依據(jù)。本文探究hnRNP A2/B1對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的作用機制。以細(xì)胞培養(yǎng)、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、MTT法檢測細(xì)胞活力、FCM法檢測細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡情況、Transwell細(xì)胞遷移與侵襲實驗、實時熒光定量PCR檢測各組細(xì)胞hnRNP A2/B1、p-PI3K、p-AKT mRNA表達、Western Blot法檢測各組細(xì)胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表達為目標(biāo)開展相應(yīng)的研究。

1 資料與方法

1.1研究對象

選取本院2020年1月-2021年1月接診的100例乳腺癌患者為研究對象，依照細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)與動存結(jié)果劃分內(nèi)未轉(zhuǎn)染空白對照組、轉(zhuǎn)染陰性質(zhì)粒的陰性對照組、轉(zhuǎn)染shRNA-hnRNPA2/B1質(zhì)粒的下調(diào)組。

實驗細(xì)胞、試劑：人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞株購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫，胎牛血清、MEM培養(yǎng)液、青霉素和鏈霉素均購自美國HyClone公司，RNA提取液、RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、引物合成和DNA聚合酶均購自日本TaKaRa公司，兔抗人hnRNP A2/B1、p-Akt和p-PI3K單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔和山羊抗小鼠二抗均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，RIPA蛋自裂解液、蛋自質(zhì)印跡法配膠試劑盒和ECL液均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.2研究方法

MTT法檢測細(xì)胞活力、FCM法檢測細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡情況、實時熒光定量PCR檢測各組細(xì)胞hnRNP A2/B1、p-PI3K、p-AKT mRNA表達、Western Blot法檢測各組細(xì)胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表達。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組細(xì)胞p-PI3K、p-AKT 蛋白表達情況

2.2 細(xì)胞遷移與侵襲實驗

3 討論

hnRNPA2B1是四跨膜蛋白超家族（ Tetraspanin， TM4SF）中的重要組成成員。TM4SF 是存在于真核細(xì)胞生物胞膜上的糖蛋白家族， 至少含有 33 個成員。編碼的蛋白含有 200-350 個氨基酸，相對分子量為 21～28kd。該家族蛋白通常由 4個高度疏水的保守跨膜結(jié)構(gòu)域（transmemberane domain， TM）、 1 個小胞外環(huán)、 1個大胞外環(huán)和 1 條胞內(nèi)短氨基酸序列組成。小胞外環(huán)稱作 EC1，由 13～31 個殘基組成，大胞外環(huán)稱作 EC2，其長度和氨基酸序列具有多樣性。胞外區(qū)帶有保守的氨基酸模體以及半胱氨酸殘基，半胱氨酸殘基對于 TM4SF 與整合素等結(jié)合形成的二硫鍵十分重要。TM4SF 區(qū)別于其他四次跨膜蛋白最顯著的特征是 4 個 TM包含一些高度保守的氨基酸殘基。在細(xì)胞上 TM4SF 蛋白以同型和異型二聚體共價 連 接 的 方 式 存 在 ， 并 以 此 為 基 礎(chǔ) 形 成 跨 膜 四 超 分 子 富 集 區(qū) 域（tetraspanin-enriched membrane microdomains TEMs），招募伴侶蛋白形成不同功能的復(fù)合物，該家族蛋白可以與整合素，生長因子受體等在細(xì)胞表面相互鏈接，形成龐大的四次跨膜蛋白網(wǎng)絡(luò)，在信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。 hnRNPA2B1是四次跨膜蛋白網(wǎng)絡(luò)的核心分子。

綜上所述，hnRNP A2/B1與眾多疾病都存在一定的相關(guān)性，且對其作用機制在于蛋白質(zhì)上。

參考文獻：

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