紅景天苷對3T3-L1脂肪細(xì)胞分化及糖代謝的影響

黃億元?尹海鷹?盧孟密?鄧玉風(fēng)?石文文?周漢京

摘要：目的探究紅景天苷對3T3-L1脂肪細(xì)胞分化及糖代謝的影響，對改善糖代謝的可能機(jī)制進(jìn)行分析。方法1）采取比色法分析脂細(xì)胞分化程度;2）檢測紅景天苷干預(yù)的脂肪細(xì)胞對3H-葡萄糖的攝取情況;3）RT-PCR檢測PPAR-γ與C/EBG-αmRNA的表達(dá)。結(jié)果1）OD值：紅景天苷組（0.44±0.12）<對照組（0.54±0.14）<羅格列酮組（0.73±0.13）（P<0.05）。2）3H-葡萄糖攝取率：對照組（101.69%）<紅景天苷組（112.35%）<羅格列酮組（185.86%）（P<0.05）。3）PPAR-γ表達(dá)：紅景天苷組（0.27±0.07）<對照組（0.43±0.09）<羅格列酮組（0.71±0.12）;C/EBP-αmRNA表達(dá)：紅景天苷組（0.38±0.10）<對照組（0.67±0.16）<羅格列酮組（1.09±0.23）（P<0.05）。結(jié)論紅景天苷能抑制脂肪細(xì)胞分化和相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)3H-葡萄糖的攝取。

關(guān)鍵詞：紅景天苷;3T3細(xì)胞;細(xì)胞分化;糖代謝

【中圖分類號(hào)】R587.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）09--01

Abstract：Objective To explore the effect of salidroside on the differentiation and glucose metabolism of adipocytes，and to analyze the possible mechanisms of improving glucose metabolism.Methods 1）Lipocell differentiation was used to analyze by the colorimetric method;2）3H-glucose uptake of adipocytes affected by salidroside;3）The expression of PPAR-and C/EBG-αmRNA was determined by RT-PCR.Results 1）OD：salidroside group（0.44±0.12）

Key words：Salidroside;3T3 cells;Cell differentiation;Sugar metabolism

糖尿病的發(fā)生發(fā)展與糖脂代謝紊亂有關(guān)，10%-20%肥胖易出現(xiàn)糖尿病[1]，60%糖尿病者超重，50%被定義為肥胖[2]。因此，肥胖是能量代謝紊亂的必然結(jié)果。紅景天苷具有抗氧化作用、保護(hù)心腦血管等作用，參與成熟脂肪細(xì)胞與環(huán)境間的物質(zhì)交換[3]，具有調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的能力，但其機(jī)制尚未闡明。本文探究紅景天苷對脂肪細(xì)胞分化和糖脂代謝的作用。

1資料與方法

1.1材料

3T3-L1細(xì)胞株（American Type Culture Collection）、紅景天苷（復(fù)旦大學(xué)藥理研究室）、馬來酸羅格列酮（浙江萬馬醫(yī)藥化工有限公司）、3H-葡萄糖（北京原子高科核技術(shù)應(yīng)用股份有限公司）、DMEM（Gibco）、牛血清白蛋白（BSA;Gibco）、油紅O（Sigma）、AMV第一鏈cDNA合成試劑盒（Bio Basic）和PCR擴(kuò)增試劑盒（上海生工公司）。

1.2方法

（1）3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)及分化依照文獻(xiàn)資料[4]進(jìn)行3T3-L1前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化。將分化成熟的脂肪細(xì)胞用含0.2%的BSA的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)12h后，分別給予1mg/L紅景天苷、5μmol/L羅格列酮進(jìn)行干預(yù)，對照組未作任何干預(yù)。

（2）檢測3T3-LI脂肪細(xì)胞3H-葡萄糖攝取干預(yù)24h后，根據(jù)試劑盒說明書檢測3H-葡萄糖攝取率。葡萄糖攝取率=各組/正常對照%。

（3）油紅O染色分析3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化情況干預(yù)第8天，行油紅O染色：異丙醇處理，吸光度（CD）值：570nm波長檢測，以定量分析分化程度。

（4）RT-CRP檢測PPAR-γ、C/EBP-αmRNA表達(dá)干預(yù)第8天，抽提RNA。cDNA：AMV第一鏈cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄?；谛∈驪PAR-γ、C/EBP-α、β-action序列（Genebank公布），設(shè)計(jì)上下游引物（表1），PCR擴(kuò)增后，2%瓊脂糖凝膠電泳，經(jīng)Synegen圖像分析系統(tǒng)掃描，利用Gene Tool軟件進(jìn)行定量分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS24.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用方差進(jìn)行檢驗(yàn);計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn);α=0.05，P<0.05說明存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。

2結(jié)果

2.1紅景天苷對3T3-L1脂肪細(xì)胞3H-葡萄糖攝取的影響

3T3-L1脂肪細(xì)胞3H-葡萄糖攝取率：空白對照組101.69%<紅景天苷組112.35%<羅格列酮對照組185.86%（P<0.05;表2），提示紅景天苷能提高3T3-L1脂肪細(xì)胞3H-葡萄糖攝取情況。

2.2紅景天苷對細(xì)胞分化的影響

OD值：紅景天苷組（0.44±0.12）<空白對照組（0.54±0.14）<羅格列酮對照組（0.73±0.13）（P<0.05;表3），提示紅景天苷能阻滯細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚，抑制前脂肪細(xì)胞向成熟細(xì)胞分化，而羅格列酮能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化。

2.3紅景天苷對脂肪細(xì)胞PPAR-γ和C/EBP-αmRNA表達(dá)的影響

紅景天苷對PPAR-γ、C/EBP-αmRNA表達(dá)無明顯的促進(jìn)作用，而羅格列酮具有明顯的促進(jìn)作用（P<0.05;表4）。

3討論

人體中，脂肪組織屬能量貯備系統(tǒng)，具有維持機(jī)體能量代謝穩(wěn)定的作用。若脂肪組織堆積如分化異常，進(jìn)而誘發(fā)肥胖、胰島素抵抗等發(fā)生。藥物可影響脂肪細(xì)胞分化，對糖尿病、高血壓等與肥胖、胰島素抵抗相關(guān)疾病和（或）代謝性疾病的防治具有重要的臨床意義[5]。

羅格列酮為噻唑烷二酮類藥物，具有促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化、PPAR-γ表達(dá)的作用，常用于胰島素抵抗疾病的治療。與前脂肪細(xì)胞相比，成熟脂肪細(xì)胞的表面廣泛分布胰島素受體，能表達(dá)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體Glut-4，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，提高外周組織胰島素的穩(wěn)定性[6]。但是羅格列酮易加重脂肪積聚，進(jìn)而增重，引起肥胖。然而，肥胖與胰島素抵抗相矛盾。因此，探討具能改善胰島素功能且不增加體重的防治代謝性疾病的藥物具有重要意義。

脂肪細(xì)胞分化是一個(gè)復(fù)雜的過程，其中有分化轉(zhuǎn)錄因子的作用[7]。PPARs、C/EBPs是調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的主要轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)與肥胖、糖尿病等疾病的發(fā)生發(fā)展具有重要的作用[8]。PPARs由3個(gè)亞型（不同基因編碼）組成，分別是PPAR-α、PPAR-δ和PPAR-γ。C/EBPs包括C/EBP-α、C/EBP-γ等，其中EBP-α是促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子，促進(jìn)PPAR-γ高水平表達(dá)，維持分化細(xì)胞的表型。

紅景天具有抗炎、強(qiáng)心、抗過氧化、降血糖等作用，促進(jìn)脂肪細(xì)胞葡萄糖的攝取和利用，對糖尿病、腦缺血再灌注時(shí)自由基損傷等疾病具有顯著的治療效果。本研究顯示紅景天苷能抑制脂肪細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚，遏制脂肪細(xì)胞分化，促進(jìn)葡萄糖攝取。這可能是脂肪細(xì)胞通過抑制RRAR-γ和C/EBP-αmRNA的表達(dá)，從而抑制脂肪細(xì)胞分化，促進(jìn)Glut-4轉(zhuǎn)運(yùn)，增強(qiáng)糖代謝。

綜上所述，紅景天苷既能提高3T3-L1細(xì)胞葡萄糖攝取，又能維持體重穩(wěn)定，適用于肥胖、胰島素抵抗等相關(guān)疾病的治療。

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基金項(xiàng)目：2018年度廣西高校中青年教師基礎(chǔ)能力提升項(xiàng)目（2018KY0441）