李正玲,張 煜,韓留鵬,王永霞,方宇輝,胡 琳,許為鋼
(河南省作物分子育種研究院/河南省小麥生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/河南省麥類種質(zhì)資源創(chuàng)新與改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南 鄭州 450002)
小麥赤霉病是一種由禾谷鐮孢菌(Fusarium graminearumSchw.)引起的世界性病害。至21 世紀(jì)初,小麥赤霉病在我國(guó)常發(fā)于長(zhǎng)江中下游麥區(qū)、黑龍江省春麥區(qū)、黃淮南部麥區(qū)[1?3]。近幾年,受帶菌秸稈還田、灌溉面積擴(kuò)大和氣候變暖等因素影響,小麥赤霉病在黃淮南部麥區(qū)逐步由偶發(fā)病害發(fā)展成為了常發(fā)病害,發(fā)病嚴(yán)重的年份僅河南省發(fā)病面積就達(dá)333.3萬(wàn)hm2[3],嚴(yán)重危害小麥產(chǎn)量、品質(zhì)和食用安全。
我國(guó)長(zhǎng)江中下游麥區(qū)是較早開(kāi)展抗赤霉病小麥育種的區(qū)域,首先建立了小麥赤霉病抗性鑒定方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),篩選和創(chuàng)新出一批世界公認(rèn)并得到廣泛利用的著名赤霉病抗源,建立了完備的抗赤霉病育種技術(shù)體系,相繼選育出高抗和中抗赤霉病的優(yōu)良品種,并在生產(chǎn)上大面積應(yīng)用[4?7]。黃淮南部麥區(qū)抗赤霉病育種最早開(kāi)始于20 世紀(jì)80 年代[8],但由于當(dāng)時(shí)赤霉病的偶發(fā)性,抗赤霉病育種并未被大多數(shù)育種單位重視。進(jìn)入21世紀(jì)后,隨著赤霉病危害面積擴(kuò)大,黃淮南部麥區(qū)許多育種機(jī)構(gòu)將抗赤霉病育種列為主要攻關(guān)目標(biāo),建立了規(guī)?;目剐澡b定平臺(tái),開(kāi)展了大規(guī)模的抗性種質(zhì)資源篩選,設(shè)置了抗赤霉病品種審定綠色渠道,一批抗病新品系進(jìn)入?yún)^(qū)域試驗(yàn)[9?10]。盡管如此,我國(guó)黃淮南部麥區(qū)小麥抗赤霉病育種仍處于起步階段,需進(jìn)一步完善規(guī)?;斯そ臃N技術(shù)以提高接種效率,育種手段需進(jìn)一步融入現(xiàn)代育種技術(shù)以提高育種效率。為此,以在育種過(guò)程中區(qū)分不同抗性后代材料為目的,在已有的小麥赤霉病抗性鑒定評(píng)價(jià)方法基礎(chǔ)上,在黃淮南部麥區(qū)氣候條件下對(duì)抗赤霉病育種中常用的3種人工接種赤霉病方法進(jìn)行優(yōu)化;同時(shí)以提高抗赤霉病育種效率為目的,對(duì)分子標(biāo)記輔助選擇和單倍體育種技術(shù)在黃淮南部麥區(qū)抗赤霉病育種中的規(guī)模化應(yīng)用方法進(jìn)行探索,并對(duì)黃淮南部麥區(qū)抗赤霉病育種技術(shù)要點(diǎn)進(jìn)行總結(jié),旨在為今后黃淮南部麥區(qū)小麥抗赤霉病育種提供參考。
病粒土表接種和孢子懸浮液噴霧接種試驗(yàn)的參試小麥品種有6個(gè),分別為蘇麥3號(hào)、揚(yáng)麥158、安農(nóng)8455、鄭麥9023、鄭麥0943、鄭麥7698;單小花滴注接種試驗(yàn)的參試小麥品種有4 個(gè),分別為蘇麥3號(hào)、鄭麥9023、鄭麥0943 和鄭麥7698。其中,蘇麥3號(hào)、揚(yáng)麥158、安農(nóng)8455 分別是國(guó)家小麥赤霉病抗性鑒定行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中高抗、中抗、中感對(duì)照品種,鄭麥9023、鄭麥0943分別是國(guó)家小麥良種攻關(guān)黃淮南部麥區(qū)小麥赤霉病抗性鑒定的中抗、中感對(duì)照品種,鄭麥7698為本研究的高感對(duì)照品種。
供試赤霉病菌種為包含有3個(gè)黃淮南部麥區(qū)赤霉病強(qiáng)致病力菌株(Fg18-1、Fg18-2、Fg18-4)和1個(gè)長(zhǎng)江中下游麥區(qū)赤霉病強(qiáng)致病力菌株(Fa301)的混合菌種。其中,黃淮南部麥區(qū)赤霉病強(qiáng)致病力菌株由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥分子育種團(tuán)隊(duì)分離鑒定,長(zhǎng)江中下游麥區(qū)赤霉病強(qiáng)致病力菌株由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院陳懷谷研究員提供。
小麥赤霉病人工接種方法比較試驗(yàn)分別于2017—2018 年度和2018—2019 年度在河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技試驗(yàn)示范基地(新鄉(xiāng)市原陽(yáng)縣,113°42′4″E 、35°0′17″N)進(jìn)行,試驗(yàn)田土壤為砂壤土,中高肥力水平,前茬作物為玉米。試驗(yàn)期間試驗(yàn)點(diǎn)氣溫情況見(jiàn)表1,2018 年3—5 月氣溫較適宜鐮孢菌子囊殼發(fā)育和孢子侵染,利于赤霉病發(fā)生,而2019 年3—5 月的平均氣溫較往年偏低,不利于赤霉病發(fā)生。
表1 2018年和2019年3月16日—5月15日試驗(yàn)點(diǎn)氣溫情況Tab.1 Temperature from March 16 to May 15 in 2018 and 2019 in the test field ℃
試驗(yàn)采用3種接種方法:病粒土表接種、孢子懸浮液噴霧接種、單小花滴注接種。病粒土表接種量設(shè)置2 個(gè)水平,分別為60 kg/hm2和120 kg/hm2。在小麥抽穗前1 個(gè)月分2 次將制備的玉米病粒均勻撒于小麥行間,接種后采用人工彌霧保濕至開(kāi)花后7 d,每天1~2 次,每次10 min。孢子懸浮液噴霧接種量設(shè)置3 個(gè)水平,分生孢子濃度分別為103、104、105個(gè)/mL。在各品種揚(yáng)花初期噴施于小麥穗部,每品種每處理噴施450 mL,接種后人工彌霧保濕7 d,每天3~5 次,每次5 min。單小花滴注接種量設(shè)置4個(gè)水平,分別為10、15、20、25 μL,孢子懸浮液的濃度均為105個(gè)/mL,于各品種揚(yáng)花初期注射于麥穗中部的小穗中,每品種每處理至少接種10 穗,接種后采用套袋保濕的方法保濕5 d。試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),每品種種植3個(gè)重復(fù),每重復(fù)6行,行長(zhǎng)3.3 m,行距0.23 m,株距0.01 m。組間種植6 行其他小麥品種用作隔離。試驗(yàn)田的田間管理措施同當(dāng)?shù)馗弋a(chǎn)田。
在小麥乳熟期調(diào)查各品種赤霉病發(fā)病程度,對(duì)于病粒土表接種和孢子懸浮液噴霧接種的品種,分別調(diào)查病穗率和嚴(yán)重度,并計(jì)算病情指數(shù);對(duì)于單小花滴注的品種,調(diào)查各接種穗的發(fā)病小穗數(shù)和總小穗數(shù),并計(jì)算平均病小穗率。
病情指數(shù)=∑(各級(jí)病穗數(shù)×相應(yīng)病級(jí)數(shù))/(調(diào)查總穗數(shù)×最高病級(jí)數(shù))。
以含有抗赤霉病基因Fhb1(Fusarium head blight 1)和Fhb7的山農(nóng)079-8 為抗性親本,以黃淮南部麥區(qū)高產(chǎn)品種鄭麥1860為輪回親本,進(jìn)行有限回交。自BC1F1開(kāi)始,利用Fhb1和Fhb7檢測(cè)標(biāo)記對(duì)回交后代進(jìn)行分子標(biāo)記檢測(cè),保留同時(shí)含有Fhb1和Fhb7基因的單株。2020 年和2021 年連續(xù)2 a 采用單小花滴注法對(duì)BC3F2和BC3F3所有單株的赤霉病抗性進(jìn)行鑒定,每個(gè)單株接種2穗,乳熟期調(diào)查平均病小穗率。將選擇到的優(yōu)株種成株行,同時(shí)考察后代材料的農(nóng)藝性狀和赤霉病抗性,選擇優(yōu)良新品系。抗赤霉病基因Fhb1和Fhb7的檢測(cè)方法同張煜等[11]的方法。
以西農(nóng)511/西農(nóng)519//鄭麥0943、西農(nóng)519/徐農(nóng)029//鄭麥6687、周麥32/蘇麥3號(hào)、中麥895/蘇麥3號(hào)等4 個(gè)雜交組合的F1植株為材料,采用玉米花粉誘導(dǎo)單倍體技術(shù)創(chuàng)制雙單倍體后代材料。將后代材料種成株行,株距6.67 cm,采用單小花滴注接種方法(每行接種不少于10 穗)對(duì)后代進(jìn)行赤霉病抗性檢測(cè),以株高不大于85 cm、分蘗數(shù)不少于8個(gè)、小穗數(shù)不少于18 個(gè)、平均病小穗數(shù)不多于50%為標(biāo)準(zhǔn),選擇優(yōu)良抗赤霉病品系。前2個(gè)組合的單倍體育種后代材料由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院顧堅(jiān)團(tuán)隊(duì)創(chuàng)制,后2個(gè)組合的單倍體育種后代材料由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥分子育種團(tuán)隊(duì)創(chuàng)制,方法均同顧堅(jiān)等[12?13]的方法。
采用Excel 2010 和SPSS 19.0 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較,多重比較采用LSD法(Least significant difference)。
2.1.1 病粒土表接種量 2018 年,氣候條件較適宜小麥赤霉病發(fā)生,在2 種病粒土表接種量下,6 個(gè)小麥品種均充分發(fā)病,總體上不同抗性品種的病情指數(shù)在同一接種量下差異顯著(表2)。2019 年,平均氣溫較往年偏低,6 個(gè)小麥品種的發(fā)病程度輕于上一年度,在60 kg/hm2接種量條件下,高感品種和中感品種之間的病情指數(shù)差異未達(dá)到顯著水平,同時(shí)中抗品種揚(yáng)麥158的病穗率低于國(guó)家農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)鑒定試驗(yàn)有效的判定標(biāo)準(zhǔn)(中抗對(duì)照品種病穗率達(dá)到25%以上),且病情指數(shù)與高抗品種差異不顯著;在120 kg/hm2接種量條件下,總體上不同抗性品種的病情指數(shù)差異顯著。以上試驗(yàn)結(jié)果表明,病粒土表接種采用120 kg/hm2的接種量更能穩(wěn)定區(qū)分出不同抗性品種。因此,在當(dāng)前黃淮南部麥區(qū)氣候條件下采用人工病粒土表接種小麥赤霉病適宜選用120 kg/hm2的接種量。
表2 供試小麥品種在不同病粒接種量條件下的病害發(fā)生情況Tab.2 Disease occurrence of the wheat cultivars with different inoculation amounts for soil surface inoculation method
2.1.2 孢子懸浮液噴霧接種量 2018 年,6 個(gè)小麥品種在3個(gè)孢子懸浮液噴霧接種量條件下均充分發(fā)病,發(fā)病程度隨著孢子懸浮液濃度增加而增加,在孢子懸浮液濃度為103個(gè)/mL和104個(gè)/mL條件下可以很好地區(qū)別不同抗性品種之間的差異,而在濃度為105個(gè)/mL 條件下,中感和高感品種的病情指數(shù)差異不顯著,中感品種發(fā)病過(guò)于嚴(yán)重(表3)。2019年,再次比較6個(gè)小麥品種在孢子懸浮液濃度為103個(gè)/mL和104個(gè)/mL 條件下的赤霉病發(fā)生情況,發(fā)現(xiàn)參試品種的發(fā)病程度輕于2018 年;在孢子懸浮液濃度為103個(gè)/mL 條件下,中抗品種揚(yáng)麥158 和鄭麥9023 的病穗率均低于25%,不能滿足中抗品種病穗率在25%以上的要求;而在孢子懸浮液濃度104個(gè)/mL
表3 供試小麥品種在不同孢子懸浮液噴霧接種量下的病害發(fā)生情況Tab.3 Disease occurrence of the wheat cultivars with different inoculation concentration for spray inoculation method
條件下,不同抗性品種的病情指數(shù)仍可以表現(xiàn)出顯著差異。以上試驗(yàn)結(jié)果表明,孢子懸浮液濃度采用104個(gè)/mL 更能穩(wěn)定區(qū)分出不同抗性品種。因此,在當(dāng)前黃淮南部麥區(qū)氣候條件下采用人工孢子懸浮液噴霧接種小麥赤霉病適宜選用的孢子懸浮液濃度為104個(gè)/mL。
2.1.3 單小花滴注接種量 隨著單小花滴注接種量的增加,參試小麥品種的病害發(fā)生程度逐漸增加,在15 μL、20 μL 和25 μL 接種量條件下,參試小麥品種均充分發(fā)病,且可以很好地區(qū)別不同抗性品種之間的差異;在10 μL接種量條件下,中抗品種和中感品種平均病小穗率的差異未達(dá)到顯著水平(表4)。在實(shí)際操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn),采用單小花滴注接種蘇麥3 號(hào)等小穗較細(xì)長(zhǎng)的品種時(shí),使用25 μL接種量容易使接種液溢出到鄰近小穗或穗軸上,造成多個(gè)侵染點(diǎn),干擾最終結(jié)果。因此,采用人工單小花滴注接種小麥赤霉病適宜選用15~20 μL 的接種量。
表4 供試小麥品種在不同單小花滴注接種量下的平均病小穗率Tab.4 Mean diseased spike rate of the wheat cultivars with different inoculation amount for single spikelet inoculation method %
續(xù)表4 供試小麥品種在不同單小花滴注接種量下的平均病小穗率Tab.4(Continued) Mean diseased spike rate of the wheat cultivars with different inoculation amount for single spikelet inoculation method %
2.2.1 有限回交結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇育種技術(shù)
對(duì)不同基因型的小麥BC3F2和BC3F3單株的赤霉病抗性進(jìn)行接種鑒定,結(jié)果顯示,雖然不同基因型平均病小穗率的標(biāo)準(zhǔn)差普遍偏大,但2 a 間平均病小穗率的變化趨勢(shì)一致,含有Fhb1和Fhb7基因植株的平均病小穗率最小,不含F(xiàn)hb1和Fhb7基因植株的平均病小穗率最大,含有Fhb1或Fhb7基因植株的平均病小穗率介于兩者之間(表5)。以上結(jié)果說(shuō)明,將Fhb1和Fhb7基因?qū)朦S淮南部麥區(qū)高產(chǎn)品種鄭麥1860中可以提高其赤霉病抗性,但由于同一基因型的不同單株病小穗率變幅較大,在育種選擇時(shí),應(yīng)在分子標(biāo)記檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)一步通過(guò)抗性表型鑒定來(lái)確定最終中選單株。結(jié)合大田表型鑒定和農(nóng)藝性狀選擇,選育出以鄭麥1860為背景的抗赤霉病新品系2019BC3-4700-3(圖1A)和2019BC3-4700-8(圖1B)。
表5 不同基因型小麥單株的平均病小穗率Tab.5 Mean diseased spikelet rate of each wheat plant with different genotypes
圖1 抗赤霉病品系2019BC3-4700-3(A左)、2019BC3-4700-8(B左)與周麥18(A右、B右)接種后對(duì)比Fig.1 Comparison of disease occurrence between the resistance lines 2019BC3-4700-3(left in figure A),2019BC3-4700-8(left in figure B)and Zhoumai 18(right in figures A and B)after single spikelet inoculation
2.2.2 單倍體育種技術(shù) 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥分子育種團(tuán)隊(duì)配制的4 個(gè)小麥雜交組合可以分為2類,第1 類是在黃淮南部麥區(qū)中抗/中感品種間組配雜交組合(西農(nóng)511/西農(nóng)519//鄭麥0943、西農(nóng)519/徐農(nóng)029//鄭麥6687),第2類是以黃淮南部麥區(qū)豐產(chǎn)性品種與豐產(chǎn)性較差但高抗赤霉病品種蘇麥3號(hào)為親本組配雜交組合(周麥32/蘇麥3號(hào)、中麥895/蘇麥3 號(hào)),采用玉米花粉誘導(dǎo)單倍體技術(shù)創(chuàng)制4個(gè)小麥雜交組合的雙單倍體后代株系共1 405個(gè),通過(guò)赤霉病抗性鑒定和農(nóng)藝性狀選擇,篩選到抗赤霉病且農(nóng)藝性狀優(yōu)良的株系9 個(gè)(表6)。對(duì)2 類雜交組合雙單倍體后代株系的赤霉病抗性和農(nóng)藝性狀進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)第2 類組合單倍體后代株系的平均赤霉病抗性優(yōu)于第1 類組合,但第2 類組合的平均株高較高、平均分蘗數(shù)和小穗數(shù)較少,豐產(chǎn)性較差。對(duì)2類雜交組合雙單倍體后代的中選株系進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)第1 類組合選到8 個(gè)優(yōu)良株系,中選率0.87%;第2 類組合選到1 個(gè)優(yōu)良株系,中選率0.21%,且第2類組合的優(yōu)良株系的赤霉病抗性與第1 類組合優(yōu)良株系差異不大。以上結(jié)果說(shuō)明,單倍體育種技術(shù)可以用于抗赤霉病育種以加速育種進(jìn)程,在黃淮南部麥區(qū)開(kāi)展抗赤霉病單倍體育種以黃淮南部麥區(qū)中抗/中感品種為親本更適宜。通過(guò)多環(huán)境下赤霉病抗性鑒定和農(nóng)藝性狀選擇,選育出抗赤霉病雙單倍體育種新品系D18CH196-540(圖2)。
表6 不同小麥雜交組合雙單倍體后代的表現(xiàn)情況Tab.6 Comparison of field performance of double haploid plants from different cross combinations
圖2 抗赤霉病品系D18CH196-540(左)與感赤霉病品系D18CH248-116(右)田間抗性比較Fig.2 Comparison of disease occurrence between the resistance line D18CH196-540(left)and the susceptible line D18CH248-116(right)in the field
小麥赤霉病的發(fā)生易受氣候條件和病原真菌量等因素影響,在黃淮南部麥區(qū)開(kāi)展小麥赤霉病抗性育種應(yīng)采取人工接種和人工保濕的方法,以確保為育種后代材料提供穩(wěn)定的病害選擇壓。本研究在黃淮南部麥區(qū)氣候條件下對(duì)小麥赤霉病3種常用人工接種方法的不同接種量進(jìn)行比較,結(jié)果表明,病粒土表接種適宜采用的接種量為120 kg/hm2,在小麥抽穗前1 個(gè)月分2 次均勻撒于小麥行間;孢子懸浮液噴霧接種適宜選擇孢子懸浮液濃度為104個(gè)/mL,在小麥揚(yáng)花初期以100 mL/m2的噴施量噴于小麥穗部;單小花滴注接種適宜使用15~20 μL濃度為105個(gè)/mL 的孢子懸浮液,于小麥揚(yáng)花初期注射到麥穗中部的小穗中。本研究結(jié)果中除病粒土表接種量較前人已建立的接種技術(shù)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有所提高外,其他接種方法的接種量與前人[14]研究結(jié)果一致。
Fhb1和Fhb7基因是目前已知的抗赤霉病基因中效應(yīng)較大的2 個(gè)基因,這2 個(gè)基因均已被克隆[15?17],且開(kāi)發(fā)出了相應(yīng)的功能標(biāo)記和緊密連鎖標(biāo)記[18?19]。本研究將有限回交和分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)相結(jié)合,將Fhb1和Fhb7基因?qū)朦S淮南部麥區(qū)具有大面積應(yīng)用潛勢(shì)的小麥品種鄭麥1860中,創(chuàng)制出較鄭麥1860 赤霉病抗性明顯提高的抗赤霉病小麥新品系,該結(jié)果說(shuō)明分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)應(yīng)用于小麥赤霉病抗性改良是有效的。本研究結(jié)果表明,同一基因型單株的病小穗率變幅較大,推測(cè)可能與其他微效抗病位點(diǎn)有關(guān)。因此,在利用分子標(biāo)記輔助選擇抗赤霉病品種時(shí),應(yīng)在分子標(biāo)記檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)一步結(jié)合植株田間抗性表現(xiàn)來(lái)進(jìn)行選擇。
單倍體育種可以快速獲得遺傳背景穩(wěn)定的育種后代品系,但對(duì)群體大小要求很高。通過(guò)比較不同類型親本的單倍體育種后代,發(fā)現(xiàn)在黃淮南部麥區(qū)開(kāi)展抗赤霉病單倍體育種應(yīng)以黃淮南部麥區(qū)豐產(chǎn)性和抗病性兼顧的材料為親本,如果以豐產(chǎn)性較差的材料為親本或2 個(gè)親本后代分離較大,建議經(jīng)過(guò)F2的選擇后再利用優(yōu)株創(chuàng)制單倍體育種后代,這樣可以提高培育出抗赤霉病品種的概率。
當(dāng)前,黃淮南部麥區(qū)抗赤霉病育種的主要難點(diǎn)不是無(wú)法選擇到抗性好的品種,而是難以將豐產(chǎn)性與抗病性良好結(jié)合,只有在一定豐產(chǎn)性基礎(chǔ)上提高抗病性,才能培育出在生產(chǎn)上大面積應(yīng)用的抗赤霉病品種,而這與親本選擇有密切關(guān)系。目前,用于黃淮南部麥區(qū)抗赤霉病育種的親本大體分為2 類,第1 類是抗病性突出但豐產(chǎn)性差的材料,第2 類是豐產(chǎn)性較好、抗病性中等的材料。在育種實(shí)踐中以第1類材料作為親本較難直接選育出可用于大面積生產(chǎn)應(yīng)用的抗赤霉病品種,反而是以第2 類材料為親本較易選育出豐產(chǎn)和抗病良好結(jié)合的抗赤霉病品種。但第1 類材料聚合有多個(gè)主效和微效基因,對(duì)選育高抗品種更具潛力。因此,2 類材料都應(yīng)該在抗赤霉病育種中得到應(yīng)用,僅需在育種目標(biāo)和選擇標(biāo)準(zhǔn)上有所區(qū)別。以第1 類材料為親本的組合,應(yīng)以創(chuàng)制抗病性突出的育種材料為目標(biāo),以抗病性選擇為主,綜合農(nóng)藝性狀較抗病親本有明顯改良即可;以第2類材料為親本的組合,以直接選育抗赤霉病品種為目標(biāo),兼顧抗病性和豐產(chǎn)性的選擇,抗病性以中抗為選擇指標(biāo),綜合農(nóng)藝性狀較親本要有所提高。
基于本研究結(jié)果和抗赤霉病育種實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),對(duì)黃淮南部麥區(qū)小麥抗赤霉病育種技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。對(duì)抗赤霉病育種雜交組合的單交F1進(jìn)行赤霉病接種,宜采用孢子懸浮液噴霧接種,接種后彌霧保濕7 d;對(duì)于復(fù)交F1、F2、F3低世代分離群體,可采用以病粒土表接種為主、孢子懸浮液噴霧接種作為補(bǔ)充的接種方法,接種后彌霧保濕至開(kāi)花后7 d;對(duì)于F4及以上世代,宜采用單小花滴注接種,接種后彌霧保濕或套袋保濕3~5 d。在后代選擇時(shí),單交F1只淘汰特別感病的組合;低世代分離群體應(yīng)適當(dāng)放寬農(nóng)藝性狀選擇標(biāo)準(zhǔn),重點(diǎn)選擇豐抗結(jié)合的單株;對(duì)于F4及以上世代的選擇,可在較好抗病性的基礎(chǔ)上逐步提高綜合農(nóng)藝性狀選擇標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)采用多點(diǎn)試驗(yàn)的方法在多個(gè)環(huán)境下對(duì)表現(xiàn)優(yōu)異的株系進(jìn)行豐產(chǎn)性和抗病性鑒定。在品種選育過(guò)程中還應(yīng)注意以下幾點(diǎn):抗病害擴(kuò)展能力應(yīng)作為抗病性選擇的主要依據(jù),故在選擇時(shí)要注重穗軸的發(fā)病情況;所有世代都要對(duì)籽粒進(jìn)行篩選,即使外表抗病,但病粒多也要淘汰;對(duì)于重點(diǎn)組合,可以采用單倍體育種技術(shù)創(chuàng)制穩(wěn)定后代品系,如親本含有Fhb1、Fhb7等抗赤霉病基因,可以自F3起開(kāi)展分子標(biāo)記輔助選擇育種。