楚利濤 李興華 朱梁豫 辛?xí)粤?魏 瑄 駱曉飛

骨肉瘤是骨組織最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，其惡性程度較高，并常見于青少年。目前關(guān)于骨肉瘤發(fā)生機(jī)制研究常處于探索中，與青春期骨生長(zhǎng)過(guò)快和遺傳等因子有關(guān)[1]。骨肉瘤主要發(fā)生在膝關(guān)節(jié)周圍，可能和青春期股骨遠(yuǎn)端和脛骨近端的骨骺快速生長(zhǎng)關(guān)密切[2]，且女性患者發(fā)病高峰稍早于男性。有數(shù)據(jù)報(bào)道[3]，手術(shù)聯(lián)合化療治療后5年生存率為55%～65%，常見于肺部轉(zhuǎn)移，且2年生存率不到25%。最近幾年關(guān)于基因在骨肉瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的作用越來(lái)越多，認(rèn)為基因治療是一種有效途徑[4]。MicroRNA(miRNA)可以特異性識(shí)別靶基因的3'短非翻譯區(qū)而對(duì)其表達(dá)起到負(fù)性調(diào)節(jié)作用。miR參與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和治療及預(yù)后等。miR-34a和miR-449a表達(dá)水平影像腫瘤發(fā)生和發(fā)展。本文選擇醫(yī)院2019年1月至2020年1月診治的骨肉瘤患者，給與新新輔助化療前檢測(cè)血清中miR-34a、miR-449a表達(dá)水平，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇醫(yī)院2019年1月至2020年1月診治的骨肉瘤83例，將其納入研究組。研究組納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理確診；②知情同意患者；③首次確診和治療的患者；④新輔助化療患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者；②復(fù)發(fā)患者；③免疫系統(tǒng)紊亂患者；④活動(dòng)性出血患者；⑤妊娠期、哺乳期患者。另選取同期體檢健康受試者83例，將其納入對(duì)照組。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：① 8～28歲受試者；②知情同意；③自愿參加。研究組，年齡6～17歲，平均(11.06±1.29)歲，男性43例，女性40例。對(duì)照組，年齡5～27歲，平均(20.07±1.28)歲，男性44例，女性39例。兩組患者一般資料差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

血清miR-34a、miR-449a檢查：抽取兩組受試者空腹血液3 ml，低速離心(20 min)處理后留下血清，將上層血清轉(zhuǎn)移到新試管中，儲(chǔ)備。按照血清RNA提取試劑盒指令提取，采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)式反應(yīng)檢測(cè)血清miR-34a、miR-449a水平。臨床病理特征：使用問卷調(diào)查法收集患者臨床病理特征，包括年齡、性別、腫瘤位置、分期。

新輔助化療方案：第一周期大劑量MTX方案:MTX 200 mg/kg或8～12 g/m2；第二周期IFO方案:2～3 g/m2，連用5天;第三周期AP方案:用法ADM 60 mg/m2，DDP 120 mg/m2，每一周期間隔12天左右，3個(gè)周期為一個(gè)療程。

化療反應(yīng)：根據(jù)化療結(jié)果將其分成無(wú)效化療組和有效化療組，分別為31例和52例。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

比較兩組患者血清miR-34a、miR-449a水平，分析血清miR-34a、miR-449a水平與骨肉瘤患者臨床病理特征的關(guān)系，對(duì)比化療有效和無(wú)效患者治療前后血清miR-34a、miR-449a水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者血清miR-34a、miR-449a水平比較

研究組患者血清miR-34a水平(6.47±1.28)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，miR-449a水平(29.47±1.23)低于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組受試者血清miR-34a、miR-449a水平比較

2.2 血清miR-34a、miR-449a水平與骨肉瘤病理特征的關(guān)系

不同年齡、性別、腫瘤部位患者血清miR-34a、miR-449a水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。不同腫瘤大小、分期患者的血清miR-34a、miR-449a水平比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 血清miR-34a、miR-449a水平與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清miR-34a、miR-449a表達(dá)水平及與新輔助化療耐藥關(guān)系分析

化療有效組血清miR-34a表達(dá)水平(7.09±1.09)明顯低于無(wú)效組(P<0.05)，miR-449a表達(dá)水平(33.74±2.06)明顯高于化療無(wú)效組(P<0.05)，見表3。

表3 血清miR-34a、miR-449a表達(dá)水平及與新輔助化療耐藥的關(guān)系

3 討論

骨肉瘤也稱為成骨肉瘤，是骨的原發(fā)性惡性腫瘤，在原發(fā)性骨腫瘤中骨肉瘤發(fā)生率僅次于漿細(xì)胞骨髓瘤。目前認(rèn)為，骨肉瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)為20%，常見肺部轉(zhuǎn)移或全身彌漫性轉(zhuǎn)移后死亡。最近幾年隨著化療技術(shù)發(fā)展，骨肉瘤患者生存率得到明顯提升，生存時(shí)間延長(zhǎng)。但化療伴有嚴(yán)重毒副作用，且化療耐藥影響化療效果。多藥耐藥是指腫瘤細(xì)胞被一種藥物誘發(fā)耐藥后，同時(shí)對(duì)其他多種結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制完全不同的藥物產(chǎn)生交叉耐藥的一種現(xiàn)象?；煻嗨幠退幨且粋€(gè)多基因參與的復(fù)雜過(guò)程[5]。以往研究結(jié)果顯示[6]，癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性決定了抗癌小幅。因此，迫切需要尋找理想的腫瘤標(biāo)志物，以提升化療效果。MiRNA的前身是初級(jí)轉(zhuǎn)錄RNA，初級(jí)轉(zhuǎn)錄RNA在細(xì)胞核內(nèi)被一類多蛋白復(fù)合體切除miRNA前體[7-9]。在特異性酶作用下解旋呈單鏈狀態(tài)后具有了生物活性，能與靶mRNA上的miRNA依賴性基因沉默復(fù)合物結(jié)合，通過(guò)識(shí)別并與非翻譯區(qū)結(jié)合，從而抑制mRNA的翻譯。miR-34家族成員較多，其中miR-34a備受關(guān)注[10]。目前已研究證實(shí)[11-12]，腫瘤細(xì)胞中的染色體雜合性缺失和啟動(dòng)子區(qū)域的GpG島甲基化導(dǎo)致了miR-34a表達(dá)量的異常，而其通過(guò)多種下游靶分子參與了調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征[13]，包括腫瘤增殖與凋亡等。miR-449a是最近幾年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種miRNA，能通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的方式來(lái)調(diào)控多種基因表達(dá)，直接或間接參與某些疾病的發(fā)生和發(fā)展[14]。miR-449a能上調(diào)p53的表達(dá)，間接激活p21基因，在PARP與其他細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白參與下，最終有道細(xì)胞程序性凋亡，其表達(dá)上調(diào)能進(jìn)一步抑制癌細(xì)胞政增殖和促進(jìn)癌細(xì)胞程序性死亡[15]。

由于循環(huán)miRNA可以在血液中穩(wěn)定表達(dá)，并具有無(wú)損傷，可以多次反復(fù)取材檢查的優(yōu)點(diǎn)，因而現(xiàn)已廣泛用于各種癌癥的檢查和判斷預(yù)后[16]。在指導(dǎo)臨床診治上，miRNA具有很廣闊的前景[17-19]。本文納入分析了83例骨肉瘤患者和83例體檢健康的受試者，對(duì)其血清miR-34a、miR-449a表達(dá)水平進(jìn)行比較，結(jié)果顯示骨肉瘤研究組患者miR-34a高表達(dá)，而miR-449a低表達(dá)。說(shuō)明，骨肉瘤患者血清miR-34a、miR-449a表達(dá)情況異于同齡健康人群。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，不同腫瘤大小、分期患者的血清miR-34a、miR-449a水平存在差異，其中>19歲、腫瘤直徑>10cm和Ⅲ期分期患者的血清miR-34a水平最高，而miR-449a水平最低。提示，骨肉瘤患者年齡、腫瘤直徑、分期影響血清miR-34a、miR-449a表達(dá)?；颊呓?jīng)新輔助化療治療后，出現(xiàn)63.56%(52/83)的化療無(wú)效現(xiàn)象，說(shuō)明存在一定程度的化療耐藥情況[20]?；熡行ЫM患者血清miR-34a表達(dá)水平明顯低于無(wú)效組，miR-449a表達(dá)水平明顯高于化療無(wú)效組。提示miR-34a高表達(dá)和miR-449a低表達(dá)可能影響骨肉瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，高表達(dá)miR-34a和低表達(dá)miR-449會(huì)增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物產(chǎn)生耐受，進(jìn)而降低細(xì)胞對(duì)化療的敏感性。

綜上所述，骨肉瘤患者血清miR-34a高表達(dá)，miR-449a低表達(dá)，并協(xié)同參與影響新輔助化療耐藥。