QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)魚肉中19種氯酚類化合物

穆應(yīng)花, 邢家溧, 沈 堅(jiān), 應(yīng) 璐, 毛玲燕, 徐曉蓉, 婁永江, 吳 希

(1. 寧波大學(xué)食品與藥品學(xué)院, 浙江 寧波 315211; 2. 寧波市產(chǎn)品食品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院(寧波市纖維所), 浙江 寧波 315048)

氯酚類化合物(chlorophenols, CPs)是苯環(huán)上活性位點(diǎn)的氫原子被氯原子取代后的產(chǎn)物,根據(jù)所取代的氯原子數(shù)不同可分為單氯酚(chlorophenol, CP)、二氯酚(dichlorophenol, DCP)、三氯酚(trichlorophenol, TrCP)、四氯酚(tetrachlorophenol, TeCP)和五氯酚(pentachlorophenol, PCP)共19種同分異構(gòu)體[1],其中單氯酚和四氯酚共有3種同分異構(gòu)體,二氯酚和三氯酚共有6種同分異構(gòu)體。CPs是木材、紡織品、皮革制品及紙制品的防霉防腐劑,是果樹、蔬菜及其他農(nóng)作物和水產(chǎn)品的殺蟲劑和殺菌劑,以及農(nóng)作物的除草劑[2]。大量研究表明,CPs具有致畸、致癌和致突變作用,且其毒性隨著氯原子數(shù)目的增多而增強(qiáng),間位氯取代基的毒性明顯高于鄰位氯取代基[3-5]。CPs種類多、危害大、不易降解,低濃度的CPs便可帶來嚴(yán)重的水質(zhì)污染,并可通過生物富集在魚體內(nèi)達(dá)到很高的濃度,進(jìn)而給人類帶來安全隱患,已成為重點(diǎn)監(jiān)控的環(huán)境污染物之一,現(xiàn)已被許多國家禁止使用。如美國環(huán)境保護(hù)署(environmental protection agency, EPA)與人類環(huán)境健康評(píng)估組根據(jù)對(duì)2,4,5-三氯酚可能的致腫瘤效應(yīng)的研究將其歸為D等級(jí)致癌物[6]。此外,2-氯酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚和五氯酚已經(jīng)被EPA列為優(yōu)先控制污染物[7]。因而有必要對(duì)水環(huán)境和其中的生物體進(jìn)行監(jiān)測(cè)。但目前對(duì)生物體中氯酚的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)僅見于五氯酚或五氯酚鈉鹽的測(cè)定[8-10],國內(nèi)外尚無水生生物體中涵蓋19種CPs同時(shí)檢測(cè)的方法標(biāo)準(zhǔn)和限量標(biāo)準(zhǔn)。

現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的CPs的測(cè)定方法多為色譜法,主要有氣相色譜法(GC)[11,12]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[13-15]、液相色譜法(LC)[16]、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)等[17-19]。LC和LC-MS不需要衍生化處理且檢測(cè)較快,但其定性能力和靈敏度較低,對(duì)溶劑要求較高,分析成本和日常維護(hù)費(fèi)用較高。GC和GC-MS都需將CPs進(jìn)行衍生化處理再進(jìn)行分析,但GC-MS靈敏度更高,定性更可靠,相比于LC-MS檢測(cè)成本更低,被廣泛應(yīng)用于CPs的測(cè)定。目前對(duì)于環(huán)境樣品、紡織品以及皮革制品和紙制品中多種CPs同時(shí)測(cè)定的方法已有文獻(xiàn)報(bào)道,如王成云等[20]建立了GC-MS測(cè)定紙和紙制品中19種CPs的方法,各組分的定量限均為2 μg/kg。莫賢科等[21]建立了GC-MS測(cè)定皮革中19種CPs的方法,前處理方法較為復(fù)雜,但也能滿足皮革中CPs的日常檢測(cè)。

目前對(duì)魚肉中氯酚的檢測(cè)多見于三氯酚、四氯酚、五氯酚或五氯酚鈉鹽的測(cè)定[22],而19種CPs同時(shí)檢測(cè)的方法報(bào)道較少。鐘惠英等[23]建立了GC-MS法測(cè)定大黃魚和草魚中的19種CPs,前處理采用硫酸消解后的液液萃取,較為復(fù)雜,且消耗大量有機(jī)溶劑。近年來發(fā)展較快的QuEChERS簡(jiǎn)化了樣品處理過程,且對(duì)環(huán)境污染較小,具有高效、經(jīng)濟(jì)、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于有機(jī)污染物殘留檢測(cè)的前處理中[24,25]。如Padilla-Sanchez等[26]采用QuEChERS前處理結(jié)合氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法對(duì)農(nóng)用土壤中的2-氯酚、4-氯酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4,5-三氯酚和五氯酚進(jìn)行了檢測(cè),實(shí)現(xiàn)了樣品的快速前處理,節(jié)省了檢測(cè)時(shí)間。王連珠等[27]建立了QuEChERS結(jié)合UPLC-MS/MS測(cè)定動(dòng)物源食品(豬肉、豬肝、雞肉、魚肉、牛奶、雞蛋)中痕量五氯酚。黃建芳[28]采用QuEChERS結(jié)合HPLC-MS/MS測(cè)定大黃魚中五氯酚的含量,檢出限為0.1 μg/kg,但該方法只對(duì)五氯酚進(jìn)行檢測(cè),未對(duì)其他氯酚類化合物的同分異構(gòu)體進(jìn)行分析。

鑒于當(dāng)前魚中19種CPs同時(shí)檢測(cè)的方法較少,現(xiàn)有的研究存在前處理復(fù)雜或僅能檢測(cè)少數(shù)幾種CPs的現(xiàn)狀,因此本研究開發(fā)了基于改良的QuEChERS前處理提取凈化方法,結(jié)合GC-MS技術(shù)對(duì)魚中19種CPs同時(shí)測(cè)定,通過化合物的色譜保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量分析,并通過實(shí)際樣品進(jìn)行了方法的驗(yàn)證。建立的方法能夠減少分析時(shí)間和溶劑消耗、降低環(huán)境污染、提高檢測(cè)效率,可適用于魚肉中19種CPs的快速檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

TSQ 8000 Evo氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫科技有限公司); DB-5MS毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);分析天平(中國北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);高速離心機(jī)(美國Thermo Fisher Scientific公司); Vortex 3自動(dòng)漩渦混合器(德國IKA公司);一次性無菌注射器(中國上海金塔醫(yī)用器材有限公司); Milli-Q Academic超純水儀(美國Millipore公司); KQ-500E超聲波清洗儀(中國寧波海曙科盛超聲設(shè)備有限公司);多功能渦旋混合器(德國IKA公司);多功能全自動(dòng)氮吹濃縮儀(瑞典Biotage公司);移液槍(法國GILSON公司); 0.22 μm濾膜(美國Waters公司)。

實(shí)驗(yàn)用的魚類(帶魚、鯽魚、鱸魚、鰱魚、鯉魚、草魚等)購于寧波路林市場(chǎng)。乙腈、丙酮(色譜純),購自德國Merck公司;正己烷、乙酸乙酯(色譜純),購自中國天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司;二氯甲烷、環(huán)己烷(色譜純),購自中國江蘇永華化學(xué)科技有限公司;無水硫酸鎂、氯化鈉(分析純),購自中國國藥化學(xué)試劑有限公司;十八烷基鍵合硅膠(octadecylsilane chemically bonded silica, C18)、中性氧化鋁(alumina-N, AL-N)、石墨化炭黑(graphitized carbon black, GCB)、乙二胺-N-丙基硅烷(primary secondary amine, PSA),硅烷化衍生試劑:N,O-雙(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide, BSTFA),購自中國上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

氯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:一氯酚(2-CP、3-CP、4-CP),二氯酚(2,3-DCP、2,4-DCP、2,5-DCP、2,6-DCP、3,4-DCP、3,5-DCP),三氯酚(2,3,4-TrCP、2,3,5-TrCP、2,3,6-TrCP、2,4,5-TrCP、2,4,6-TrCP、3,4,5-TrCP),四氯酚(2,3,4,5-TeCP、2,3,4,6-TeCP、2,3,5,6-TeCP),五氯酚(PCP)(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司),質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL,使用時(shí)用正己烷稀釋至所需濃度。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

氯酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制:原混合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL,溶于二氯甲烷,使用時(shí)用正己烷配制。準(zhǔn)確量取100 μL原混合標(biāo)準(zhǔn)溶液液于10 mL的容量瓶中,用正己烷定容至刻度線,搖勻,配制成10 μg/mL的儲(chǔ)備液,置于4 ℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列梯度的配制:吸取10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10 μL于1 mL的進(jìn)樣瓶中,用正己烷定容至刻度線,搖勻,配制成100 μg/L的中間液,依次取100 μg/L的中間液10、20、40、60、80、100 μL于6個(gè)2 mL的進(jìn)樣瓶中,分別用正己烷定容至1 mL,密封、搖勻。再取10 μg/L的溶液40、80 μL用正己烷定容至1 mL,密封、搖勻。得到標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,質(zhì)量濃度依次為0.4、0.8、1、2、4、6、8、10 μg/L。

1.3 樣品的制備及其前處理

提取:選取魚樣的肌肉組織絞碎均質(zhì),置于-18 ℃的冰箱中保存,準(zhǔn)確稱取5.00 g魚肉樣品于50 mL的聚乙烯塑料離心管中,加入5 mL超純水和10 mL乙酸乙酯,渦旋分散30 s,然后向管中加入3 g氯化鈉和5 g無水硫酸鎂,渦旋振蕩1 min,隨后40 ℃超聲15 min,再以4 500 r/min離心5 min。

凈化:收集離心好的上清液至裝有500 mg的C18和100 mg無水硫酸鎂的15 mL聚乙烯塑料離心管中,渦旋振蕩30 min,超聲15 min,高速離心后取5 mL上清液于另一15 mL試管中,在45 ℃水浴中氮吹濃縮至小于1 mL,再用乙酸乙酯定容至1 mL,然后過0.22 μm的有機(jī)濾膜后再加入50 μL衍生試劑,在45 ℃衍生30 min,最后搖勻、冷卻至室溫,用GC-MS進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。

1.4 儀器分析條件

GC條件:DB-5MS毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進(jìn)樣口溫度為:260 ℃;載氣為高純He(純度≥99%);流速為1.0 mL/min。程序升溫條件:初始溫度70 ℃,維持1 min;然后以8 ℃/min升至160 ℃;再以3 ℃/min升至200 ℃;最后以40 ℃/min升至300 ℃,保持3 min。不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣量為1 μL。

MS條件:離子源溫度260 ℃,傳輸線溫度280 ℃, EI離子源,電子能量:70 eV,溶劑延遲10 min,數(shù)據(jù)采集采用全掃模式定性,選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)模式定量,19種CPs的監(jiān)測(cè)離子詳見表1。

表 1 19種CPs的保留時(shí)間、定量、定性離子

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1色譜條件的優(yōu)化

CPs含羥基,使分子的極性增強(qiáng),不利于直接色譜分離[29]。因此,需要衍生化,變成極性弱的物質(zhì),提高其揮發(fā)性,減少色譜分離過程中的峰拖尾,便于在色譜柱上分離。國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18414.2-2006《紡織品含氯苯酚的測(cè)定》中采用了DB-17MS具有中等極性的色譜柱[30],但該色譜柱只對(duì)TeCP和PCP這兩類酚有很好的分離效果,對(duì)TrCP分離效果不好,因此本實(shí)驗(yàn)參照ISO 17070∶2015(E)《皮革化學(xué)測(cè)試測(cè)定含氯苯酚的含量》[31],采用DB-5MS毛細(xì)管色譜柱對(duì)19種CPs的衍生化產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),各同分異構(gòu)體的出峰順序及保留時(shí)間分別見圖1和表1。

如圖1所示,DB-5MS色譜柱除了無法分離2,6-DCP和3,5-DCP外,對(duì)其他17種氯酚均能完全分開且峰形較好。這進(jìn)一步說明了2,6-DCP和3,5-DCP性質(zhì)相似,因而難以將兩者分離。所以應(yīng)用本方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)2,6-DCP和3,5-DCP只能測(cè)定其二者的總量。

為進(jìn)一步優(yōu)化方法,獲得更好的檢測(cè)效率,在上述色譜柱的條件下進(jìn)行載氣流速的優(yōu)化,選擇不同流速0.8、1.0、1.2 mL/min,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著載氣流速的降低,2,6/3,5-DCP峰未見很好的分離,但載氣流速過慢導(dǎo)致拖尾峰以及分析時(shí)間大幅增加。因此,在保證分離度的基礎(chǔ)上,綜合評(píng)估,選取1.0 mL/min的載氣流速。

2.1.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

先對(duì)19種CPs單標(biāo)準(zhǔn)溶液采用全掃描模式進(jìn)樣,初步確定其對(duì)應(yīng)的特征定量離子及其保留時(shí)間,分別找出豐度最高的離子碎片,如表1所示。進(jìn)一步采用SIM模式,只對(duì)待測(cè)組分物質(zhì)離子信號(hào)進(jìn)行定性定量采集,很大程度上提高了對(duì)目標(biāo)化合物的檢測(cè)靈敏度,減少了雜質(zhì)的干擾,從而使試驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

圖 1 19種CPs的總離子流色譜圖Fig. 1 Total ion chromatogram of the 19 CPs 1. 2-CP; 2. 3-CP; 3. 4-CP; 4. 2,5-DCP; 5-6. 2,6-DCP+3,5-DCP; 7. 2,4-DCP; 8. 2,3-DCP; 9. 3,4-DCP; 10. 2,4,6-TrCP; 11. 2,3,5-TrCP; 12. 2,4,5-TrCP; 13. 2,3,6-TrCP; 14. 3,4,5-TrCP; 15. 2,3,4-TrCP; 16. 2,3,5,6-TeCP; 17. 2,3,4,6-TeCP; 18. 2,3,4,5-TeCP; 19. PCP.

2.2 前處理方法的優(yōu)化

2.2.1提取溶劑種類及用量的優(yōu)化

不同的提取劑對(duì)CPs的提取效果不同,且產(chǎn)生的雜質(zhì)干擾也不同。為了確定合適的提取溶劑,本實(shí)驗(yàn)選擇正己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯進(jìn)行考察,結(jié)果如圖2所示。二氯甲烷和乙酸乙酯的回收率相當(dāng)(64.0%～113.0%和67.0%～116.0%,p>0.05),高于弱極性的環(huán)己烷和正己烷的回收率(43.8%～85.0%和51.0%～92.0%)?？紤]到二氯甲烷沸點(diǎn)較低,在實(shí)驗(yàn)操作過程中易揮發(fā),且二氯甲烷易帶來雜質(zhì)峰,不利于大批量樣本的測(cè)定,因此選取強(qiáng)極性的乙酸乙酯作為提取劑。

圖 2 不同提取劑對(duì)19種CPs回收率的影響(n=6)Fig. 2 Effect of different extraction agents on the recoveries of the 19 CPs (n=6)

同時(shí),本實(shí)驗(yàn)還考察了提取劑用量(6、8、10、12 mL)的影響。結(jié)果顯示,10 mL乙酸乙酯足以完全提取基質(zhì)中的目標(biāo)化合物,19種CPs的平均加標(biāo)回收率達(dá)到最佳,在78.0%～112.0%之間;提取溶劑過多不僅會(huì)造成試劑浪費(fèi),還會(huì)導(dǎo)致基質(zhì)中共萃取干擾物不斷增多,從而導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)不斷加強(qiáng);與黃武等[32]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致(5 g樣品選擇10 mL提取劑時(shí)提取酚類化合物的回收率最高)。因此,本實(shí)驗(yàn)最終選擇提取劑用量為10 mL。

2.2.2凈化劑種類及用量的優(yōu)化

魚肉中含有脂肪、蛋白質(zhì)、色素等物質(zhì),這些物質(zhì)會(huì)干擾19種CPs的離子化,影響其檢測(cè)分析[33]。所以本實(shí)驗(yàn)選擇C18、AL-N、PSA和GCB這4種凈化劑,考察凈化效果。

由表2可以看出,使用AL-N和GCB時(shí)都有3種氯酚的平均回收率低于60.0%,分別是2,4,6-TrCP、2,3,5-TrCP、PCP和2,4,6-TrCP、2,4,5-TrCP、PCP。PSA和C18的回收率范圍分別是60.5%～103.0%和69.8%～108.0%,但使用PSA時(shí)2,4,6-TrCP、2,3,4-TrCP和PCP的回收率較低(64.3%、68.9%和60.5%),使用C18時(shí)只有PCP的回收率較低(69.8%),其余18種CPs大多集中在82.0%～108.0%之間?？赡艿脑蚴?C18可以很好地除去疏水性共提物,如脂肪、有機(jī)酸等,還能有效除去非極性雜質(zhì),而CPs是極性的,所以除雜效果更好,與黃建芳[28]的研究結(jié)果一致。因此,選擇C18作為19種CPs的凈化劑。

表 2 不同凈化劑對(duì)19種CPs回收率的影響(n=6)

本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察了不同C18用量(100、300、500、700 mg)對(duì)19種CPs回收率的影響。由圖3可以看出,C18為500 mg時(shí),目標(biāo)化合物的回收率相對(duì)較高,為76.0%～114.0%,且絕大多數(shù)目標(biāo)物的回收率都集中在89.2%～114.0%之間,因此選為所用。

圖 3 不同C18用量對(duì)19種CPs回收率的影響(n=6)Fig. 3 Effect of different dosages of C18 on the recoveries of the 19 CPs (n=6)

2.2.3衍生條件的優(yōu)化

硅烷化衍生具有熱穩(wěn)定性好、揮發(fā)性強(qiáng)、易于制備以及色譜性能好等優(yōu)點(diǎn)[34]。CPs極性強(qiáng),揮發(fā)性和穩(wěn)定性都較低,不適于直接進(jìn)樣。為獲得良好的峰形,需對(duì)提取物進(jìn)行衍生化處理,因此本實(shí)驗(yàn)選用BSTFA進(jìn)行硅烷化衍生。考察了不同衍生劑體積對(duì)19種CPs回收率的影響(見表3)。CPs的回收率隨著衍生劑添加量的增加而增加,當(dāng)達(dá)到50 μL時(shí),衍生劑與目標(biāo)物的反應(yīng)達(dá)到飽和,回收率達(dá)到最佳,其回收率范圍為68.9%～115.0%;當(dāng)衍生劑添加量為60 μL時(shí),回收率基本保持不變;到70 μL時(shí)略有下降,回收率范圍為67.6%～109.0%。因此本實(shí)驗(yàn)選擇衍生劑的量為50 μL。

表 3 不同衍生劑體積對(duì)19種CPs回收率的影響(n=6)

隨后對(duì)衍生溫度(35、40、45、50 ℃)進(jìn)行了優(yōu)化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著衍生溫度的上升,回收率逐漸呈上升趨勢(shì),達(dá)到45 ℃時(shí)趨于平緩。在45 ℃時(shí)平均回收率達(dá)到最佳,為94.6%,所以本實(shí)驗(yàn)選用衍生溫度為45 ℃。

在45 ℃下,加入50 μL衍生劑,分別衍生20、30、40、50 min。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在20 min時(shí)衍生化反應(yīng)不完全,目標(biāo)物的回收率在49.0%～110.0%之間;在30 min時(shí)衍生化反應(yīng)完全,19種CPs的回收率在74.0%～112.0%之間;在40 min和50 min時(shí),其回收率效果差異不大。所以本實(shí)驗(yàn)選擇衍生30 min以提高衍生效率。

2.3 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.3.1線性范圍與方法的檢出限

以空白基質(zhì)提取液為溶劑,配制19種CPs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,在優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)。以氯酚化合物的質(zhì)量濃度(x, μg/L)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo),繪制校準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。結(jié)果如表4所示,19種CPs的相關(guān)系數(shù)R2均大于0.998,在0.4～10 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。同時(shí),在最低添加水平下,以3倍信噪比結(jié)合濃度外推法確定方法的檢出限(limit of detection, LOD),以10倍信噪比確定方法的定量限(limit of quantification, LOQ)。

表 4 19種CPs的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

2.3.2回收率與精密度

以空白魚樣為基質(zhì),分別添加低、中、高3個(gè)不同加標(biāo)水平(0.16、0.32、1.6 μg/kg)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后按優(yōu)化的樣品前處理方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率和測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6次,評(píng)估該方法的準(zhǔn)確性和精密度,結(jié)果詳見表5。各組分的平均加標(biāo)回收率為70.6%～115.0%,精密度(RSD)為2.6%～10.5%(n=6)。

2.3.3基質(zhì)效應(yīng)

本實(shí)驗(yàn)通過比較帶魚、鯉魚、黃花魚空白基質(zhì)溶液配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與正己烷配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的斜率來評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect, ME)。

計(jì)算公式為:ME=[(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率)-1]×100%。ME為負(fù)值表示存在基質(zhì)抑制效應(yīng),正值表示存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。以其絕對(duì)值為判斷依據(jù),絕對(duì)值越大則基質(zhì)效應(yīng)越強(qiáng)[35-37]。當(dāng)|ME|<20%,為弱基質(zhì)效應(yīng),可忽略;當(dāng)20%≤|ME|≤50%,為中等強(qiáng)度基質(zhì)效應(yīng);當(dāng)|ME|>50%,為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)[38,39]。結(jié)果如表6所示,帶魚中除2,5-DCP表現(xiàn)為強(qiáng)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),其他化合物均為弱或中等強(qiáng)度基質(zhì)效應(yīng);黃花魚中除2,3-DCP、2,3,5,6-TeCP和2,3,4,6-TeCP表現(xiàn)為強(qiáng)基質(zhì)抑制效應(yīng),其他均為弱或中等強(qiáng)度基質(zhì)效應(yīng);鯉魚均表現(xiàn)為弱基質(zhì)效應(yīng)或中等基質(zhì)效應(yīng)。因此,本方法采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正,以消除基質(zhì)帶來的影響,改善回收率。

表 6 不同魚類樣品中19種CPs的基質(zhì)效應(yīng)

2.3.4與其他方法的比較

將本研究與近幾年文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)CPs的前處理方法進(jìn)行了簡(jiǎn)單對(duì)比(見表7)。本方法與符昌雨等[22]的超聲萃取(ultrasonic extraction, UE)結(jié)合GC-MS檢測(cè)水產(chǎn)品中10種CPs的方法相比,可以實(shí)現(xiàn)19種CPs的同時(shí)檢測(cè)。UE雖操作簡(jiǎn)單,但凈化不完全,導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度降低,如黃姣等[40]和陳秋凱等[41]的方法檢出限為20 μg/kg。與鐘惠英等[23]、莫賢科等[21]的液液萃取(liquid-liquid extraction, LLE)結(jié)合GC-MS方法相比,具有前處理簡(jiǎn)便、消耗溶劑少、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)。固相萃取(solid phase extraction, SPE)具有凈化效果好、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn),但處理步驟較復(fù)雜,本文的QuEChERS方法較為簡(jiǎn)單,避免了SPE方法繁瑣的活化、上樣、淋洗和洗脫過程,樣品提取凈化成本低。結(jié)合GC-MS進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)一步提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和靈敏度。

2.3.5實(shí)際樣品的檢測(cè)

應(yīng)用本方法分別對(duì)帶魚、巴沙魚、鯉魚和黃花魚等15個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果如表8所示,在7個(gè)樣品中同時(shí)檢測(cè)出2,4-DCP、3,4-DCP、2,3,4-TrCP、2,3,4,5-TeCP,其中最小檢出值為0.04 μg/kg,最大檢出值為4.8 μg/kg。15個(gè)魚樣中黃花魚檢出的CPs總量最大,為8.74 μg/kg,其次為鯽魚7.59 μg/kg,米魚的檢出量最少,為1.59 μg/kg。

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定魚肉樣品中19種CPs含量的方法。通過優(yōu)化前處理?xiàng)l件以及衍生條件,該方法在0.4～10 μg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,線性相關(guān)系數(shù)均大于0.998,方法檢出限為0.01～0.05 μg/kg。應(yīng)用本方法進(jìn)行實(shí)際樣品檢測(cè),不同魚肉樣品中均有不同程度的氯酚類污染物檢出。其中,黃花魚和鯽魚污染最嚴(yán)重,石斑魚和大黃魚次之,米魚污染程度最輕。所建立的方法簡(jiǎn)化了樣品的前處理步驟,操作簡(jiǎn)單,方法靈敏度高、重復(fù)性好,可滿足魚肉中19種CPs的高通量檢測(cè)要求,顯著提高CPs的檢測(cè)效率。