李 軍

(呂梁學(xué)院 生命科學(xué)系，山西 離石 033001)

近年來，溫室中病蟲害發(fā)生日益嚴(yán)重，化學(xué)農(nóng)藥的使用也越來越多，化學(xué)農(nóng)藥所產(chǎn)生的負(fù)面效應(yīng)也越來越嚴(yán)重[1].黃瓜是溫室中種植比較廣泛的一種蔬菜，病蟲害發(fā)生也非常嚴(yán)重，已有報(bào)道大量使用化學(xué)農(nóng)藥會(huì)對(duì)植物造成階段性傷害，使植物的抗性減弱[2].玫煙色棒束孢(Isariafumosorosea)又稱玫煙色擬青霉，是農(nóng)業(yè)害蟲防治中常用且分布廣泛的昆蟲致病真菌[3].玫煙色棒束孢可用來防治溫室黃瓜上的煙粉虱等害蟲，但在使用過程中是否會(huì)像化學(xué)農(nóng)藥一樣對(duì)寄主植物產(chǎn)生影響就不得而知.因此本文研究了不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗生長及生理特性的影響，進(jìn)而推測出玫煙色棒束孢在防治害蟲時(shí)對(duì)寄主植物無影響，為該菌株的廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 不同濃度玫煙色棒束孢孢子懸浮液的配制

本實(shí)驗(yàn)所需的玫煙色棒束孢IF-1106菌株原存于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生物防治實(shí)驗(yàn)室.PDA培養(yǎng)基準(zhǔn)備好后，將試管斜面上保存的玫煙色棒束孢IF-1106菌株在無菌的超凈工作臺(tái)上接種到PDA培養(yǎng)基上，然后放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d.菌絲長滿培養(yǎng)皿后，加含吐溫-80的無菌水，然后用接種針輕刮菌絲及孢子，并將其連同菌液倒入燒杯中，再用磁力攪拌器將其打散，過濾，即可獲得玫煙色棒束孢孢子懸浮液[4].用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，先將孢子懸浮液稀釋到1.0×108cfu/mL，再分別稀釋為1.0×107cfu/mL，1.0×106cfu/mL，1.0×105cfu/mL，1.0×104cfu/mL備用.

1.2 黃瓜幼苗的培育及處理

幼苗培育采用穴盤育苗法[5].采用5×10的育苗盤，規(guī)格為每穴孔徑為5 cm×5 cm，深度5.5 cm，穴底通水孔直徑約1 cm.將育土先填滿育苗盤的每個(gè)穴位，然后在育苗盤的每個(gè)帶孔方格填土并在其深度的三分之二處挖開一個(gè)小孔放入1到2顆種子，最后將孔洞輕拍壓緊.每間隔1-2 d對(duì)其噴灑清水以保持土壤濕潤，待黃瓜幼苗發(fā)芽出土后，長出兩片真葉時(shí)，從中選擇18株生長狀態(tài)相近且良好的黃瓜幼苗，均分為6大組，移栽到6個(gè)育苗盆，并編號(hào).

1.3 供試儀器及試劑

電子天平(BSA224S)：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；手提式壓力蒸汽滅菌器(YX-24LDJ)：江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；超凈工作臺(tái)(ZHJH-C1112B)：上海智城分析儀器制造有限公司；數(shù)顯電子恒溫水浴鍋(723N)：常州郎越儀器制造有限公司；可見分光光度計(jì)(DZKW-D-1)：上海菁華儀器制造有限公司；高速離心機(jī)(TG16G)：天津廠豐科技發(fā)展有限公司；生化培養(yǎng)箱(SPX-250：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司.分析純脯氨酸、牛血清白蛋白、磺基水楊酸、茚三酮、考馬斯亮藍(lán)G250等.

1.4 試驗(yàn)方法

六組黃瓜幼苗盆栽一段時(shí)間，生長情況穩(wěn)定后即可進(jìn)行試驗(yàn)；將A組黃瓜幼苗設(shè)為空白對(duì)照，以一定量的清水噴灑植株，B、C、D、E、F五組黃瓜幼苗分別用配制好的5種不同濃度的玫煙色棒束孢孢子懸浮液進(jìn)行等量噴灑，做好標(biāo)記；重復(fù)3次；黃瓜幼苗接受孢子懸浮液噴灑繼續(xù)生長20 d后，對(duì)六組黃瓜幼苗的生長狀況即6個(gè)代表性的指標(biāo)分別進(jìn)行測定并記錄數(shù)據(jù).

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1 黃瓜幼苗生長指標(biāo)的測定

用卷尺，直尺，細(xì)線，游標(biāo)卡尺等工具分別測定各組黃瓜幼苗的株高(莖基部至生長點(diǎn)處)、莖粗(距根莖以上1 cm處)、根長(莖基部以下至根尖伸展處)并及時(shí)記錄[6].

1.5.2 黃瓜幼苗生理指標(biāo)的測定

生理指標(biāo)的測定參考相關(guān)文獻(xiàn)，脯氨酸含量測定采用磺基水楊酸法[7]，糖含量測定采用蒽酮比色法[8]，蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)G-250法[9].

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗生長特性的影響

2.1.1 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗株高的影響

黃瓜幼苗株高隨著孢子懸浮液濃度的增加整體呈上升趨勢(如表1所示)，但是與對(duì)照組比差異不顯著(P=0.112).以對(duì)照組為參照，可發(fā)現(xiàn)濃度為1.0×107cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液對(duì)黃瓜幼苗的株高生長有一定的促進(jìn)作用；其余濃度對(duì)黃瓜幼苗作用不明顯.

表1 不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗株高的影響

2.1.2 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗根長的影響

不同濃度的孢子懸浮液處理后黃瓜幼苗根長有不同的變化(如表2所示)，但整體上看實(shí)驗(yàn)組處理過的黃瓜幼苗的根長是在對(duì)照組黃瓜幼苗的根長周圍上下波動(dòng)，差異不顯著(P=0.185).以對(duì)照組為參照，可以發(fā)現(xiàn)1.0×106cfu/mL、1.0×107cfu/mL、1.0×108cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理后，黃瓜幼苗的根長有所增加；1.0×104cfu/mL、1.0×105cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理后的黃瓜幼苗的根長與對(duì)照組相比有微小的下降.但總體而言，玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理后的黃瓜幼苗根長與對(duì)照組無顯著差異.

表2 不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗根長的影響

2.1.3 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗莖粗的影響

黃瓜幼苗莖粗變化的趨勢同株高的變化趨勢類似，莖粗隨著孢子懸浮液濃度的增加整體上呈上升趨勢(如表3所示)，1.0×108cfu/mL的玫煙色棒束孢孢子懸浮液處理對(duì)黃瓜幼苗莖粗的影響最大，但是與對(duì)照相比，差異不顯著(P=0.121).

表3 不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗

2.2 玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗生理特性的影響

2.2.1 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗脯氨酸含量的影響

黃瓜幼苗脯氨酸含量隨著孢子懸浮液濃度的增加有所增加(如表4所示)，但與對(duì)照組比差異不顯著(P=0.358).1.0×108cfu/mL的孢子懸浮液處理下的脯氨酸含量最高.

表4 不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗中

2.2.2 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗可溶性糖含量的影響

隨著孢子懸浮液濃度濃度的升高，黃瓜幼苗可溶性糖大體上呈升高趨勢(如表5所示)，但與對(duì)照組比差異不顯著(P=0.114).

表5 不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗中

2.2.3 不同濃度玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗可溶性蛋白含量的影響

隨著玫煙色棒束孢孢子懸浮液濃度的升高，黃瓜幼苗中的可溶性蛋白含量增加(如表6所示)，但與對(duì)照組比，差異不顯著(P=0.088).

表6 不同濃度的玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗中

3 結(jié)論與討論

株高是植物形態(tài)學(xué)最基本的指標(biāo)之一，通過株高的大小可以直觀地看出黃瓜的長勢.根是植物的營養(yǎng)器官，根長的大小顯示了植物吸收水分能力的強(qiáng)弱.莖是植物的支柱和運(yùn)輸線.本實(shí)驗(yàn)選擇了株高、根長、莖粗三個(gè)有代表性的生長指標(biāo)進(jìn)行測量，通過測定不同濃度的玫煙色棒束孢孢子懸浮液對(duì)黃瓜幼苗生理特性的影響，可以發(fā)現(xiàn)玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗生理指標(biāo)雖然有影響，但都是極其輕微的，與其作為生物農(nóng)藥防治害蟲的功效相比，其影響可以忽略不計(jì)；還可以發(fā)現(xiàn)適宜的較高濃度的玫煙色棒束孢孢子懸浮液在一定程度上促進(jìn)了黃瓜幼苗的生長.本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與前人研究也基本符合[10].蟲生真菌玫煙色棒束孢對(duì)黃瓜幼苗基本無影響，可作為生物農(nóng)藥廣泛使用，是一種性價(jià)比比較好的生物農(nóng)藥.