張文娓，孟凡佳，宋小雪，閆麗莉，田 明

（黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040）

開心散是國家首批公布的《古代經(jīng)典名方目錄》之一[1]，始載于唐代·孫思邈《備急千金方》卷四十。其功效為安神、補氣、利濕化濁，主要用于治療心氣不足，神志不寧，健忘失眠，心怯怔忡等癥，是治療“好忘”的常用方[2]?，F(xiàn)代臨床常用于治療老年性癡呆，療效較好[3]。

開心散組成為人參、茯苓、遠志、菖蒲，全方按照君臣佐使原則，配伍嚴謹，藥味精煉，方中茯苓補心安神、健脾益氣為君藥，現(xiàn)代藥理研究表明，茯苓有效成分茯苓酸具有增強免疫力、抗腫瘤以及鎮(zhèn)靜、降血糖等作用[4,5]。因此，本研究采用HPLC法建立開心散中茯苓酸含量測定方法，旨在為開心散的質(zhì)量標準后續(xù)研究提供參考。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

Thermo U3000型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司）；Elite Hypersil ODS2色譜柱（150mm×4.6mm，5μm，依利特）；AB204-N型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；KQ-500D型超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）。

茯苓對照藥材（S2FK-1C95中國食品藥品檢定研究院）；甲醇（色譜純 迪馬科技有限公司）；甲醇、乙醚、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、H2SO4、石油醚（60～90℃）、三氯甲烷，均為分析純，天津市永大化學試劑有限公司；開心散（自制），方中四味藥材均為道地藥材。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：采用Elite Hypersil ODS2色譜柱（4.6×150mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（79∶21）；檢測波長：210nm；流速：1.0mL·min-1，柱溫30℃。

1.2.2 對照品溶液的制備 稱取減壓干燥至恒重的茯苓酸適量，置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得含茯苓酸0.13mg·mL-1的對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 取自制開心散2.5g，精密稱定，依次加入甲醇50、20mL，加熱回流兩次，每次各1.5h，合并濾液，水浴蒸干，定容至5mL容量瓶中，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.4 陰性樣品溶液的制備 按照處方工藝，制備不含茯苓藥材的陰性樣品，按照1.2.3項下供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性試驗考察

將對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液分別放入液相色譜儀中，進樣量為10μL，按照1.2.1項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖（圖1～3）。

結(jié)果顯示，供試品溶液與對照品溶液對應峰理論塔板數(shù)大于3000，開心散中其他成分對茯苓酸的測定無干擾。

圖1 對照品溶液色譜圖Fig.1 Chromatography of reference solution

圖2 供試品溶液色譜圖Fig.2 Solution chromatogram of the sample

圖3 陰性樣品溶液色譜圖Fig.3 Negative Solution Chromatography

2.2 線性關系考察

取茯苓酸對照品溶液，按照1.2.1項下色譜條件進樣分析，通過設置不同進樣體積，記錄峰面積，以含量為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程為：y=12.758x-0.0175，R2=1.0000，茯苓酸含量在0.13～1.3μg之間有良好的線性關系。

2.3 精密度試驗

取自制開心散2.5g，精密稱定，按1.2.3項下處理方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，計算色譜峰面積的RSD值為0.68%。表明儀器精密度良好。

2.4 重復性試驗

平行精密稱取6份開心散樣品2.5g，按照1.2.3項下處理方法制備供試品溶液，按照1.2.1項下色譜條件，進行含量測定，計算RSD值為3.20%，表明該方法重復性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

稱取開心散2.5g，精密稱定，按照1.2.3項下處理方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12h進樣，記錄12h內(nèi)峰面積，計算RSD值為1.58%。表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗

精密稱取已知茯苓酸含量的開心散6份，每份約1.25g，分別精密加入0.13mg·mL-1的茯苓酸對照品溶液1.5mL，按照1.2.3項下處理方法制備供試品溶液，按照1.2.1項下色譜條件進樣分析，計算加樣回收率，結(jié)果為100.06%（RSD=1.84%），表明回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果Tab.1 Result of recovery by adding samples

2.7 樣品含量測定

按照1.2.3項下方法制備供試品溶液，按照1.2.1項下色譜條件進樣分析，計算3批開心散中茯苓酸的含量。3批樣品茯苓酸含量分別為0.15、0.12、0.13mg·g-1。由于實驗誤差的存在，上述樣品中茯苓酸含量略有差異，但均在合理波動范圍之內(nèi)。

3 結(jié)論

開心散是經(jīng)典名方制劑，中藥成分復雜，而茯苓是開心散復方中起重要作用的成分，因此，本研究選擇含量較高的茯苓酸作為指標性成分，采用高效液相色譜法進行含量測定。并對實驗方法進行方法學考察，采用該方法對3個平行批次樣品中的茯苓酸含量進行了測定，結(jié)果表明，該測定方法具有專屬性強、靈敏度高、穩(wěn)定可靠的特點，為開心散有效成分測定、質(zhì)量控制及臨床合理應用提供實驗依據(jù)和理論支持。