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(1貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥用動物(昆蟲類)研究中心，貴州 貴陽 550025)

蟬蛻來源于蟬科(Cicadidae)昆蟲黑蚱CryptotympanapustulataFabricius的若蟲羽化時脫落的皮殼。性寒，味甘、咸，歸肺、肝經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、利咽、透疹、明目退翳等功效[1]。藥理實(shí)驗(yàn)證明蟬蛻有鎮(zhèn)咳祛痰平喘、抗炎、鎮(zhèn)靜止痛解痙、抗驚厥、抗凝等作用[2]，其含有的化學(xué)成分主要為甲殼素、氨基酸和微量元素[3-5]，主產(chǎn)于浙江、山東、河南、河北、四川、江蘇、湖北、廣西、貴州等省，是常用的昆蟲類動物藥之一[6]。近年來，蟬蛻的價格上漲，市面上出現(xiàn)以次充好的蟬蛻中藥材，蟬蛻的質(zhì)量控制備受關(guān)注[7]，但是目前2020年版《中國藥典》中缺乏蟬蛻的浸出物、水分、灰分的定性定量指標(biāo)，難以評判蟬蛻藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。因此，本文通過對蟬蛻浸出物、灰分、水分含量測定進(jìn)行研究，為中藥蟬蛻的質(zhì)量控制提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)儀器及試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

分析天平(瑞士梅特公司)、數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、干燥器、蒸發(fā)皿、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊公司)、燒杯、漏斗、錐形瓶、移液管、膠頭滴管、玻璃棒、冷凝管、鐵架臺、量筒、馬弗爐、坩堝、電爐、托盤、扁形稱量瓶。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥材來源

娃哈哈純凈水、無水乙醇(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)。中藥材蟬蛻購于貴州省貴陽市東升藥材市場，產(chǎn)地分別是貴州、四川、廣西、河南。由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鐘可副教授鑒定為蟬科(Cicadidar)昆蟲黑蚱CryptotympanapustulataFabricius的若蟲羽化時脫落的皮殼，粉碎，過二號篩，混合均勻，制成供試品。

2 方法

2.1 浸出物含量測定

2.1.1 水溶性浸出物含量測定

參照2020版《中國藥典》四部(通則2201)[8]。水溶性冷浸法：取中藥材蟬蛻供試品粉末4 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，時時振搖6 h，再靜置 18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴鍋上蒸干后，在105 ℃的烘箱內(nèi)干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。計(jì)算供試品中浸出物的百分含量(%)。水溶性熱浸法：取中藥材蟬蛻供試品粉末4 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，加入水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，錐形瓶連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液 25 mL，于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴鍋上蒸干后，于105 ℃的烘箱內(nèi)干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。計(jì)算供試品中浸出物的百分含量(%)。

2.1.2 醇溶性浸出物含量測定

醇溶性冷浸法：以不同濃度的乙醇(10%、20%、30%、50%、70%、90%、100%)作溶劑，每種濃度的乙醇設(shè)置三組平行，按照 2.1.1的冷浸法實(shí)驗(yàn)步驟操作，計(jì)算供試品中浸出物的百分含量(%)。醇溶性熱浸法：以不同濃度的乙醇(10%、20%、30%、50%、70%、90%、100%)作溶劑，每種濃度的乙醇設(shè)置三組平行，按照 2.1.1的熱浸法實(shí)驗(yàn)步驟操作，計(jì)算供試品中浸出物的百分含量(%)。

2.1.3 不同產(chǎn)地蟬蛻浸出物的含量測定

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，篩選出中藥蟬蛻最佳浸出物含量測定法對不同產(chǎn)地蟬蛻進(jìn)行浸出物含量測定。

2.2 不同產(chǎn)地蟬蛻灰分的測定

照2020版《中國藥典》四部(通則2302)總灰分測定法[8]。蟬蛻供試品粉碎，過二號篩，混合均勻后，取供試品2 g置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準(zhǔn)確至0.01 g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～ 600 ℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量(%)。

2.3 不同產(chǎn)地蟬蛻水分的測定

照2020版《中國藥典》四部(通則0832)水分測定中烘干法[8]。取蟬蛻供試品2 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過10 mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100～105 ℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量(%)。

3 結(jié)果

3.1 浸出物含量測定

3.1.1 水溶性浸出物含量測定

取貴州產(chǎn)蟬蛻粉末作為供試品，照2.1.1項(xiàng)下方法進(jìn)行水溶性浸出物及醇溶性浸出物含量測定，結(jié)果分別見表1-表4。

表1 水溶性浸出物冷浸法含量測定結(jié)果(n=3)Tab.1 Determination results of water-soluble extract by coldleaching method(n=3)

表2 水溶性浸出物熱浸法含量測定結(jié)果(n=3)Tab.2 Determination results of water-soluble extractby hot leaching method(n=3)

表3 醇溶性浸出物冷浸法含量結(jié)果(n=3)Tab.3 Determination results of alcohol-soluble extractby cold leaching method(n=3)

表4 醇溶性浸出物熱浸法含量結(jié)果(n=3)Tab.4 Determination results of alcohol-soluble extractby hot leaching method(n=3)

續(xù)表4

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蟬蛻水溶性冷浸法浸出物含量為2.01%，水溶性熱浸法浸出物含量為4.03% ，表明中藥蟬蛻的水溶性浸出物測定熱浸法優(yōu)于水溶性冷浸法。

3.1.2 醇溶性浸出物含量

由表4可知：70%醇溶性熱浸法得到蟬蛻的浸出物含量為7.18%，水溶性熱浸法浸出物含量為4.03%，水溶性冷浸法浸出物含量為2.01%，50%醇溶性冷浸法的浸出物含量為1.92%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：70%醇溶性熱浸法的浸出物含量最高，為蟬蛻藥材浸出物最佳測定法。

3.1.3 不同產(chǎn)地蟬蛻浸出物含量的測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地蟬蛻的浸出物含量在5.90% ～7.68%之間，其中河南產(chǎn)浸出物含量最高，為7.68%；最低為四川產(chǎn)蟬蛻，浸出物含量為5.90%。見表5。

表5 不同產(chǎn)地蟬蛻浸出物含量測定結(jié)果(n=3)Tab.5 Determination results of extract content of cicada sloughfrom different producing areas(n=3)

3.2 不同產(chǎn)地蟬蛻灰分含量的測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表6)，不同產(chǎn)地蟬蛻的灰分含量在11.74% ～ 22.78%之間，其中四川產(chǎn)灰分含量為22.78%，廣西產(chǎn)灰分含量為18.64%，貴州產(chǎn)灰分含量為12.92%，河南產(chǎn)灰分含量為11.74%。平均值為16.52%。

表6 不同產(chǎn)地蟬蛻灰分含量測定結(jié)果(n=3)Tab.6 Determination results of ash content of cicada sloughfrom different producing areas(n=3)

3.3 不同產(chǎn)地蟬蛻水分含量的測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表7)，不同產(chǎn)地蟬蛻的水分含量在7.63% ～ 9.31%之間，其中貴州產(chǎn)的水分含量為9.31%，四川產(chǎn)的水分含量為8.95%，廣西產(chǎn)的水分含量為8.75%，河南產(chǎn)的水分含量為7.63%。

表7 不同產(chǎn)地蟬蛻水分含量測定結(jié)果(n=3)Tab.7 Determination results of moisture content of cicadaslough from different producing areas(n=3)

4 結(jié)果與討論

中藥蟬蛻浸出物含量測定結(jié)果表明：蟬蛻的水溶性熱浸法浸出物含量最高，為4.03%；蟬蛻的醇溶性冷浸法是以50%乙醇浸出物含量最高，為1.92%；蟬蛻的醇溶性熱浸法以70%乙醇浸出物含量最高，為7.18%。因此蟬蛻的浸出物含量測定以70%乙醇熱浸法提取最佳。不同產(chǎn)地的蟬蛻浸出物含量在5.90%～7.68%之間，河南(7.68%)，廣西(7.49%)，貴州(7.33%)，四川(5.90%)。整體來看，蟬蛻浸出物含量不高，但是在蟬蛻藥材活性成分或指標(biāo)成分不清或含量低的情況下，浸出物可作為其質(zhì)量控制指標(biāo)之一，然而目前還未規(guī)定蟬蛻浸出物含量測定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)通過測定蟬蛻浸出物的含量，確定了最佳的蟬蛻浸出物提取方法，以70%乙醇熱浸法提取率最高，建議按醇溶性浸出物熱浸法測定，乙醇浸出物不得少于5.0%。

中藥蟬蛻灰分含量測定結(jié)果表明：蟬蛻灰分含量在11.74%～22.78%之間，四川(22.78%)、廣西(18.64%)、貴州(12.92%)、河南(11.74%)?；曳值暮肯鄬碚f較高，根據(jù)以上結(jié)果分析，蟬蛻灰分含量偏高可能是由于蟬生活習(xí)性、收集、加工、運(yùn)輸、儲存等環(huán)節(jié)有其他無機(jī)物污染或摻雜。因蟬的若蟲在地下度過兩三年才破土而出；采收時蟬蛻掉落在泥土上，加工環(huán)節(jié)、儲存環(huán)境等也可能導(dǎo)致蟬蛻攜帶上雜質(zhì)，讓殼衣混入泥沙和其他雜質(zhì)[9]。為保證蟬蛻藥材的質(zhì)量，灰分不應(yīng)過高；應(yīng)盡可能在晴朗天氣采收，避免沾染更多泥土；采收加工過程中應(yīng)盡可能避免更多泥土等雜質(zhì)混入，儲存環(huán)境保持干燥與潔凈。目前《中國藥典》還未限定蟬蛻灰分的含量，為保證蟬蛻藥材質(zhì)量，以平均值的±20%為限度制定限量范圍，建議質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加蟬蛻灰分含量限定項(xiàng)，不得超過20.0%。

蟬蛻水分含量在7.63%～9.31%之間，貴州(9.31%)、四川(8.95%)、廣西(8.75%)、河南(7.63%)，其中河南產(chǎn)地水分含量最少，整體來看，水分的含量較低，低于10%以下。目前還未規(guī)定蟬蛻水分含量測定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，若藥材含水量過大，則容易發(fā)霉變質(zhì)。降低蟬蛻藥材含水量可在凈制后將其及時曬干或烘干，儲存時考慮環(huán)境是否通風(fēng)干燥等，建議蟬蛻的水分含量不得超過10.0%。