程 鵬，張靜博，趙龍妹，曹平華，馬彥博，李 旺

（河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院，河南洛陽 471023）

肉雞是養(yǎng)殖業(yè)的重要組成部分，雞肉也是人們?nèi)馐称返闹匾獊碓?。近年來研究發(fā)現(xiàn)，益生菌能有效調(diào)節(jié)家禽胃腸道的微生態(tài)平衡，增強(qiáng)機(jī)體的免疫和抗病能力，提高生產(chǎn)性能。乳酸菌作為應(yīng)用最早、最廣泛的益生菌，可大量定植于消化道黏膜表面，不僅可以調(diào)控腸道內(nèi)環(huán)境、促進(jìn)腸黏膜發(fā)育、提高機(jī)體免疫力，而且能促進(jìn)動物健康生長、防止疾病發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌不僅可以提高肉雞生產(chǎn)性能，還能穩(wěn)定腸道微生態(tài)，通過促進(jìn)有益菌的繁殖、生產(chǎn)抑菌生物素，抑制致病菌的增殖，降低肉雛雞的死亡率，同時發(fā)揮更好的環(huán)保效應(yīng)。給肉仔雞飼喂乳酸菌能夠提高消化道免疫系統(tǒng)的功能，有效提高抗體的表達(dá)量，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性。

目前，在生產(chǎn)中乳酸菌大多以固體制劑拌料方式飼喂肉雞，由于大多數(shù)乳酸菌不耐熱，干燥工藝多為真空冷凍干燥，成本過高，在動物養(yǎng)殖上使用不經(jīng)濟(jì)。使用乳酸菌菌液直接飼喂動物，則避免了干燥的環(huán)節(jié)，可降低使用成本。如何在肉雞的飼養(yǎng)中使用乳酸菌液，不同飼喂方式是否影響肉雞飼養(yǎng)，尚未有報道。本試驗自制乳酸菌菌液，研究不同乳酸菌飼喂方式對肉雞飼養(yǎng)效果的影響，為乳酸菌液體制劑在肉雞規(guī)模化生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 植物乳桿菌（）為本實驗室從苜蓿青貯中篩選、鑒定并保存菌株，試驗前優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)，活菌數(shù)為4×10CFU/mL。試驗飼料購自洛陽某飼料廠，日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 試驗設(shè)計 選用192 只1 日齡、體況相近的愛拔益加（AA）肉仔雞（公母各半）。采用分籠飼養(yǎng)，將試驗肉仔雞，隨機(jī)分為4 組，每組6 個重復(fù)，每個重復(fù)8只雞。采用14L:10D 的光照機(jī)制。試驗雞自由采食和飲水。用加熱管進(jìn)行采暖，隨時觀察雞舍溫度與濕度，維持肉雞適宜生長環(huán)境。試驗期為42 d，全程無免疫。

對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，拌料組在飼料中添加乳酸菌菌液，灌服組口腔灌服乳酸菌菌液，飲水組飲水中添加乳酸菌菌液，為保證本試驗不同飼喂方式下肉雞日采食乳酸菌活菌數(shù)相等（日均攝入量為8×10CFU）。根據(jù)《商品肉雞生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》（GB/T 19664-2005）及類似試驗參考值確定AA 肉雞平均日采食量（1～21日齡平均采食量48 g，22～42 日齡平均采食量156 g）及肉雞在飼養(yǎng)過程中飲水為采食量3 倍的原則，通過計算確定1～21 日齡及22～42 日齡不同飼喂方式乳酸菌添加量，如表2 所示。

表2 試驗設(shè)計及乳酸菌菌液添加量

1.3 指標(biāo)及測定方法

1.3.1 生產(chǎn)性能 試驗期間每日檢查雞只的健康及精神狀況；以每個重復(fù)為單位，每周記錄每個重復(fù)投料量和剩料量并計算平均日采食量和耗料增重比；分別于第21 和42 日齡08:00 飼喂前（斷食12 h 后），以重復(fù)為單位對雞只進(jìn)行空腹稱重記錄，計算平均日增重。

1.3.2 免疫器官指數(shù) 在第21、42 日齡每個重復(fù)組中隨機(jī)抓取1 只精神狀態(tài)良好、健康的肉雞空腹稱重后進(jìn)行屠宰采樣，分別摘取兩側(cè)胸腺、脾臟和法氏囊，剔除附著的脂肪及組織后，用電子天平稱重，計算免疫器官指數(shù)。

脾臟指數(shù)=脾臟重（g）/活體重（kg）

法氏囊指數(shù)=法氏囊重（g）/活體重（kg）

胸腺指數(shù)=胸腺重（g）/活體重（kg）

1.3.3 血清免疫指標(biāo) 對第21、42 日齡試驗雞進(jìn)行翅靜脈采血。采血前，斷食不斷水12 h。血樣存于采血管中靜置至血清析出，經(jīng)離心后抽取全部血清于離心管中，存放于-20℃冰箱中冷凍保存，隨后用ELISA 試劑盒（上海鈺博生物有限公司）測定血清中腫瘤壞死因子（TNF-）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、白細(xì)胞介素1（IL-1）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、免疫因子含量。

1.4 統(tǒng)計分析 利用SPSS 20.0 軟件的一般線性模型對生長性能、免疫器官指數(shù)、血清免疫指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析（ANOVA）和多重比較（Duncan's），結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞生長能的影響 由表3可知，在1～21 日齡，飲水組平均日采食量低于對照組（＜0.05）；不同飼喂方式之間平均日采食量、平均日增重?zé)o顯著差異；拌料組、飲水組耗料增重比低于對照組、灌服組（＜0.05）。在22～42 日齡，不同處理間平均日采食量無顯著差異；不同乳酸菌飼喂方式均能提高平均日增重（＜0.05），降低耗料增重比（＜0.05），但試驗組間無顯著差異。

表3 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞生長性能的影響

2.2 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞免疫器官的影響 由表4 可知，在1～21 日齡，拌料組、飲水組胸腺指數(shù)高于對照組及灌服組（＜0.05）；各處理間脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)無顯著差異；但不同乳酸菌飼喂方式下肉雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)均較對照組有不同增加（＞0.05）。在22～42 日齡時，灌服組胸腺指數(shù)高于對照組及拌料組（＜0.05），與飲水組胸腺指數(shù)無顯著差異；各試驗組脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)較對照組均有增加（＞0.05），但不同處理組間無顯著差異。

表4 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞免疫器官的影響 g/kg

2.3 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響由表5 可知，在1～21 日齡時，飲水組IgA 含量高于其他處理組（＜0.05），灌服組IgA 含量高于對照組（＜0.05），與拌料組無顯著差異。拌料組IgG 含量高于對照組（＜0.05），二者與灌服組、飲水組均無顯著差異。試驗組IL-6 含量均高于對照組（＜0.05），但不同乳酸菌飼喂方式間無顯著差異。不同飼喂方式下TNF-、IgM、IL-1、IL-2 含量較對照組均有不同程度提高（＞0.05）。

表5 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

在22～42 日齡，飲水組IgA 含量高于其他試驗組（＜0.05），灌服組IgA 含量高于對照組（＜0.05），但與拌料組無顯著差異。灌服組與飲水組IL-1 含量高于對照組（＜0.05），但不同飼喂方式間IL-1 含量無顯著差異。灌服組IL-2 含量高于對照組（＜0.05），不同飼喂方式間無顯著差異。試驗組TNF-、IgG、IgM、IL-6 含量較對照組均有不同程度提高（＞0.05）。

3 討 論

3.1 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞生長性能的影響 平均日增重、耗料增重比等是衡量肉雞的生長性能的主要指標(biāo)。乳酸菌對腸道內(nèi)有害菌具有拮抗作用，乳酸菌定植于腸道中能夠產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)，可以抑制或減少有害菌的繁殖，以達(dá)到替代抗生素、提高動物的生長性能和改善飼養(yǎng)環(huán)境的目的；還能降解大部分抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高飼料的消化率和利用率，促進(jìn)骨骼發(fā)育，有效降低耗料增重比。本試驗驗證了這一結(jié)論，且發(fā)現(xiàn)1～21 日齡時以拌料與飲水方式飼喂乳酸菌，耗料增重比顯著低于口腔灌服的飼喂方式。

大多數(shù)研究認(rèn)為，乳酸菌可以有效提高肉雞平均日增重及平均采食量，降低耗料增重比。但也有研究發(fā)現(xiàn)，通過灌喂乳酸菌可以顯著降低肉雞采食量，提高日增重。結(jié)果不一致的原因可能是不同菌種對日糧養(yǎng)分利用率產(chǎn)生影響不同。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌不同菌株在腸道的繁殖能力強(qiáng)弱、能否產(chǎn)生活性物質(zhì)、有機(jī)酸等特性均會對營養(yǎng)物質(zhì)在動物體內(nèi)的消化產(chǎn)生影響。而養(yǎng)分利用率的提高可以降低肉雞采食量。但不同飼喂方式是否會對平均日采食量產(chǎn)生影響未有報道。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，乳酸菌菌液以飲水的方式飼喂肉雞會降低肉雞平均采食量，但不同飼喂方式間無顯著差異。徐子涵等研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌液體制劑組肉仔雞的1～14 日齡生長性能顯著高于抗生素組和乳酸菌固體制劑組，表明飼喂乳酸菌液體制劑更適合運用于生產(chǎn)中。且與固體制劑相比，菌液價格低廉，經(jīng)濟(jì)效益更高，應(yīng)用潛力巨大。本試驗雖未與固體制劑相比較，但證實了飼喂乳酸菌液可顯著改善肉雞生長性能，且以飲水、拌料方式飼喂乳酸菌菌液可顯著降低耗料增重比，提高肉雞生長性能，可為乳酸菌菌液在生產(chǎn)中進(jìn)一步應(yīng)用提供依據(jù)。

3.2 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞免疫器官的影響 胸腺、脾臟和法氏囊是家禽體液免疫的主要場所，免疫器官相對重量提高，一定程度上表明機(jī)體免疫系統(tǒng)成熟和免疫功能增強(qiáng)。付麗等研究發(fā)現(xiàn)，將適量的的乳酸菌培養(yǎng)物與基礎(chǔ)日糧混合飼喂給肉雞，可一定程度提高肉雞飼料利用率、促進(jìn)免疫器官的生長發(fā)育，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。石峰等研究發(fā)現(xiàn)，飲水中添加乳酸菌組胸腺指數(shù)顯著高于照組，表明乳酸菌可以通過提高免疫器官指數(shù)從而增強(qiáng)外周和體液的免疫。本研究發(fā)現(xiàn)，拌料組能顯著提高1～21 日齡肉雞胸腺指數(shù)，灌服組能提高22～42 日齡肉雞胸腺指數(shù)，且與飲水組無顯著差異。產(chǎn)生以上差異推測可能是試驗前期雛雞較為敏感，每日口腔灌服會導(dǎo)致肉雞應(yīng)激，對肉雞生長性能及免疫機(jī)能造成影響；試驗后期肉雞適應(yīng)口腔灌服后，由于口腔灌服可減少菌液浪費，更能充分發(fā)揮乳酸菌菌液效果，但每日灌服人工消耗大，不適宜大規(guī)模養(yǎng)殖，而在水中加入乳酸菌菌液飼喂肉雞，可使菌液混合均勻，保證肉雞每日攝取菌液量恒定，減少浪費，節(jié)約成本，整個飼養(yǎng)過程可更穩(wěn)定，通過在動物機(jī)體內(nèi)定植產(chǎn)生益生作用，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收效率進(jìn)而促進(jìn)免疫器官的發(fā)育。

3.3 不同乳酸菌飼喂方式對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響TNF-、IgA、IgG、IgM、IL-1、IL-2 和IL-6 是機(jī)體抗感染的重要物質(zhì)，其含量升高，則免疫增強(qiáng)，它們是構(gòu)成機(jī)體體液免疫的主要物質(zhì)，免疫因子隨著血液循環(huán)傳遞擴(kuò)散并發(fā)揮不同的免疫作用，這些物質(zhì)大量儲存在血液、淋巴液、組織液以及黏膜分泌物中，其含量高低可以直接反映機(jī)體免疫力。

張彩鳳等將乳酸菌通過拌料形式飼喂給肉雞可顯著提高其血清免疫因子含量。尹艷軍等研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加1%、2% 的乳酸凍干菌能不同程度促進(jìn)肉雞生長及免疫器官的生長發(fā)育，提高機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫。本試驗各免疫因子均高于或顯著高于對照組，與陳西風(fēng)等研究基本一致。關(guān)于乳酸菌對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)機(jī)制至今仍未有明確的報道，但因乳酸菌菌株不同引起的免疫反應(yīng)會有所差異。本研究發(fā)現(xiàn)，與其他飼喂方式相比，飲水組可顯著提升IgA 含量，表明不同飼喂方式也可引起免疫反應(yīng)的差異。本研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌液由于保留了活菌和代謝活性物質(zhì)，不同乳酸菌飼喂方式較對照組均提升了IgG、IL-6、IL-1、IL-2 含量，但不同飼喂方式間無顯著差異，而飲水飼喂可顯著提高IgA 含量。IgA 對于保護(hù)腸道、呼吸道、泌尿生殖道和眼睛抵抗微生物入侵具有重要作用，在免疫應(yīng)答過程中起核心作用，進(jìn)一步證明飲水飼喂乳酸菌可以通過促進(jìn)腸道SIgA 的正常分泌和T 細(xì)胞的增殖，進(jìn)而提高血清中IgA 含量，進(jìn)而增強(qiáng)動物機(jī)體的免疫功能。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，日糧添加乳酸菌菌液可提高肉雞生產(chǎn)性能及免疫機(jī)能，但不同乳酸菌飼喂方式間存在差異，其中拌料方式可提高1～21 日齡胸腺指數(shù)并降低耗料增重比，灌服方式可提高22～42 日齡胸腺指數(shù)，飲水飼喂乳酸菌可降低耗料增重比并穩(wěn)定提高胸腺指數(shù)及IgA 含量。建議在肉雞生產(chǎn)中以飲水方式飼喂乳酸菌菌液。