黃敏敏，陳美珍，陳 堅(jiān)，鄭偉文*

(1. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所 / 福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350003； 2. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所, 福建 福州 350003)

水生植物滿江紅(Azolla，俗稱紅萍)是蕨類和固氮藍(lán)藻(Nostoc azollae)的共生體，廣泛分布于熱帶和亞熱帶的淡水生態(tài)系統(tǒng)[1—2]。二十世紀(jì)七十年代能源危機(jī)期間，為減少對(duì)化石能源的依賴，我國(guó)和東南亞曾一度掀起利用滿江紅作為稻田綠肥和畜禽飼料的熱潮。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)滿江紅體內(nèi)除共生藍(lán)藻外，還有多種細(xì)菌[3—5]。進(jìn)入21世紀(jì)后，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，滿江紅作為共生固氮的模式植物也日益受到關(guān)注，固氮藍(lán)藻及其宿主滿江紅的基因組全序列測(cè)定也先后完成[6—7]。2019年，陳堅(jiān)等[8]通過(guò)高通量測(cè)序，發(fā)現(xiàn)小葉滿江紅(Azolla microphylla)體內(nèi)含有多種可產(chǎn)生抗菌、抗腫瘤、富集重金屬等活性物質(zhì)的真菌。這意味著，挖掘繁殖快速且取材容易的滿江紅體內(nèi)的真菌資源有可能開(kāi)發(fā)出有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的產(chǎn)品。通過(guò)體外培養(yǎng)，進(jìn)一步鑒定滿江紅體內(nèi)真菌的遺傳背景及其潛在功能，成為開(kāi)發(fā)滿江紅體內(nèi)獨(dú)具特色的真菌資源的重要前提。真菌活性物質(zhì)一般通過(guò)發(fā)酵過(guò)程取得，作為發(fā)酵懸浮液重要組分的分生孢子其發(fā)育狀態(tài)直接關(guān)系到代謝產(chǎn)物的品質(zhì)與得率。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)取得一種真菌的純培養(yǎng)物，對(duì)其進(jìn)行分子鑒定，并用電子顯微鏡揭示其分生孢子發(fā)育和衰亡進(jìn)程的結(jié)構(gòu)特征，為進(jìn)一步驗(yàn)證滿江紅內(nèi)生真菌的遺傳背景及其開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 真菌材料

材料為小葉滿江紅(Azolla microphylla)，1982年從國(guó)際水稻研究所(International Rice Research Institute)引進(jìn)，編號(hào)為IRRI 4018。為了排除外源真菌等微生物的干擾，參照白克智等[9—10]的莖尖培養(yǎng)法，取得表面無(wú)菌的滿江紅純培養(yǎng)物，在IRRI培育基正常繁殖多代。

1.1.2 培養(yǎng)基

真菌培養(yǎng)基為沙氏(Sabouraud’s)培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，麥芽糖 40 g，瓊脂20 g，水1000 mL，pH 7.0。

1.2 內(nèi)生真菌分離培養(yǎng)

取健康的萍體20 g研磨成勻漿，用接種環(huán)挑取勻漿在沙氏培養(yǎng)基平板上劃線，以上操作均在蘇凈SW-CJ-2F型潔凈工作臺(tái)無(wú)菌條件下完成。25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。待菌落長(zhǎng)出后，挑取單菌落進(jìn)一步純化培養(yǎng)，直至長(zhǎng)成致密的絨毛狀暗藍(lán)綠色菌落。

1.3 內(nèi)生真菌培養(yǎng)物分子鑒定

用Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒(上海生工)提取兩株培養(yǎng)物總 DNA，序列擴(kuò)增用通用引物 ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′) 、ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)。PCR 反應(yīng)體系：ITS1 (10 μmol·L–1)、ITS4 (10 μmol·L–1)及 DNA模板各 1 μL，Taq Plus DNA Polymerase(5 U·μL–1)，dNTP (each 10 m mol·L–1)和 10 X PCR Buffer 共12.5 μL，加無(wú)菌雙蒸水 9.5 μL，整個(gè)反應(yīng)體系共25 μL。PCR 反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，共 30 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物使用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，擴(kuò)增產(chǎn)物送上海生工用 3730XL測(cè)序儀進(jìn)行一代雙末端測(cè)序，獲得 abi測(cè)序峰圖文件，通過(guò)軟件組裝后，與NT庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，獲得近源物種信息。

1.4 掃描電鏡樣品制備與觀察

切取上述真菌培養(yǎng)物用 2.5%戊二醛溶液(0.1 mol·L–1磷酸緩沖液，pH 7.2)在室溫下固定 4 h，用相同磷酸緩沖液洗滌3次后，用2%鋨酸在4 ℃下固定2 h，又經(jīng)磷酸緩沖液充分洗滌后，用乙醇逐級(jí)脫水，并經(jīng)環(huán)氧丙烷替換兩次。試樣用Hitachi HCP-2型臨界點(diǎn)干燥器干燥，經(jīng)干燥的樣品粘附于銅臺(tái)上，在高倍解剖鏡下用細(xì)針將菌落中部分菌絲體剝離，減少菌絲遮蓋，使孢子梗得以充分暴露，再用EIKO IB-5型離子濺射儀噴鍍金鈀。用JEOL JSM-6380lV型掃描電子顯微鏡觀察并拍片。加速電壓15 kV。

1.5 透射電鏡樣品制備與觀察

將上述經(jīng)環(huán)氧丙烷置換的部分樣品包埋于Epon-812環(huán)氧樹(shù)脂，后用Leica EM UC7型切片機(jī)切成0.05 μm薄片，醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色；用Hitachi HT7700型透射電鏡觀察并拍片。加速電壓80 kV。

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)生真菌體外培養(yǎng)與鑒定

經(jīng)培養(yǎng)純化，共取得2株純培養(yǎng)的真菌，7 d直徑約20 mm，12 d直徑約35 mm，質(zhì)地為絨毛狀至致密；顏色呈灰藍(lán)色至暗藍(lán)色，初期稍淡，老后漸深，近于暗藍(lán)灰綠色(圖 1A)。2株內(nèi)生真菌的體外培養(yǎng)物ITS-PCR產(chǎn)物分子量約600 bp (圖1B)。

圖1 內(nèi)生真菌分離物的菌落形態(tài)及其培養(yǎng)物ITS-PCR產(chǎn)物電泳圖譜Fig. 1 Colony morphology and Profile of ITS-PCR products of the endo-fungal isolates

用 3730XL測(cè)序儀進(jìn)行一代雙末端測(cè)序，通過(guò)軟件組裝后，獲得如下545 bp的ITS序列：

CCTGCGGAAGGATCATTACTGAGTGCGGG CTGCCTCCGGGCGCCCAACCTCCCACCCGTGA ATACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAGCTCC CTCGGGGGCGAGCCGCCGGGGACTACTGAACT TCATGCCTGAGAGTGATGCAGTCTGAGTCTGAA TATAAAATCAGTCAAAACTTTCAACAATGGATC TCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCG AACTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCA GTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGC CCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGA GCGTCATTGCTGCCCATCAAGCCCGGCTTGTGT GTTGGGTCGTCGTCCCCCCCGGGGGACGGGCC CGAAAGGCAGCGGCGGCACCGTGTCCGGTCCT CGAGCGTATGGGGCTTTATCACCCGCTCGACTA GGGCCGGCCGGGCGCCAGCCGACGTCTCCAAC CATTTTTCTTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAG GGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA

經(jīng)NT庫(kù)比對(duì)，兩株真菌分離物與100株曲霉屬(Aspergillus)真菌的相似度達(dá)99.45%以上，其中58株為聚多曲霉(Aspergillus sydowii)。相似度達(dá)100%的聚多曲霉有30株，為此推測(cè)兩株分離物均為子囊菌門(Ascomycota)聚多曲霉(Aspergillus sydowii)(表1)。將測(cè)得的ITS與多株具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤活性的聚多曲霉菌株的 ITS序列在GenBank進(jìn)行比對(duì)(Blastn)，相似度均在98%以上(表 1)[11—15]。

表1 滿江紅內(nèi)生真菌分離物ITS序列比對(duì)結(jié)果Table 1 Comparison of ITS sequence of the endofungal isolates from Azolla

2.2 內(nèi)生真菌分離物分生孢子形態(tài)發(fā)生

該內(nèi)生真菌分離物分生孢子的發(fā)育模式為雙層方式：從菌絲頂端膨大，形成喇叭形頂囊(高3.4 μm × 直徑 5.7 μm)(圖 2A)，由此長(zhǎng)出分生孢子梗，包括?；?4.2～5.6 μm × 2.2～3.3 μm)和瓶梗(3.8～5.2 μm × 2.4～3.6 μm) (圖 2B)；隨后從輻射狀的分生孢子梗頂端長(zhǎng)出成串圓球形(或橢球形)的分生孢子鏈，數(shù)量可達(dá)數(shù)十至數(shù)千之多，分生孢子直徑2～3.5 μm，表面粗糙，多有細(xì)小的突起(圖 2C)。

圖2 內(nèi)生真菌分離物分生孢子形態(tài)發(fā)生Fig. 2 Conidial morphgenesis of the endo-fungal isolates

2.3 內(nèi)生真菌分離物分生孢子發(fā)育和衰亡進(jìn)程的超微結(jié)構(gòu)

目前對(duì)于分生孢子的發(fā)育階段(即未成熟或成熟)及至衰老死亡在細(xì)胞結(jié)構(gòu)水平上尚無(wú)明確的定義。以下所稱的成熟、健康的分生孢子是指：(1)細(xì)胞膜系(細(xì)胞壁和質(zhì)膜)完整或無(wú)明顯內(nèi)陷、斷裂；(2)細(xì)胞器如線粒體、高爾基體和溶酶體等完整、內(nèi)膜無(wú)缺損；(3)細(xì)胞電子密度較高，有豐富的核糖體，以及微絲、微管或小泡囊等。不健康的分生孢子指細(xì)胞電子密度低、細(xì)胞器或細(xì)胞膜系統(tǒng)殘缺或扭曲變形。未成熟的分生孢子指細(xì)胞電子密度較高，細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚未分化或尚在分化。后成熟期的分生孢子指雖有細(xì)胞結(jié)構(gòu)但電子密度很低。

圖3A為一正脫離其母體(瓶梗)的分生孢子斜切面觀，該瓶梗的頂部膨大，預(yù)示另一個(gè)分生孢子也將被釋放出。圖3B是圖3A右上角方框的放大圖，這一發(fā)育初期的分生孢子其組成物質(zhì)來(lái)自母體，電子密度高說(shuō)明代謝旺盛，但尚無(wú)細(xì)胞器和膜系統(tǒng)等結(jié)構(gòu)分化。圖3C為發(fā)育中期的分生孢子，胞內(nèi)已有線粒體和高爾基體的分化(圖3D)，并有多個(gè)具雙層單位膜的囊泡(直徑40～550 nm)和多條微管，尚未形成完整的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁。圖3E是兩個(gè)正在成熟的分生孢子，它們具有真核生物典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，即細(xì)胞壁、質(zhì)膜、細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和液泡以及核糖體等細(xì)胞器。

圖3 內(nèi)生真菌分離物不同發(fā)育期分生孢子的超微結(jié)構(gòu)Fig. 3 Ultrastructure of the conidia of the endofungal isolate at different developmental stages

圖 4A為一后成熟期的分生孢子，其細(xì)胞壁、質(zhì)膜、細(xì)胞器基本完整，但電子密度低，并有局部缺損，屬于不健康的細(xì)胞。圖4B的分生孢子細(xì)胞壁基本完整但明顯變形，質(zhì)膜和細(xì)胞器也嚴(yán)重缺損，趨向液泡化。圖4C則是一分生孢子殘?bào)w，細(xì)胞壁、質(zhì)膜消失，除脂滴外，細(xì)胞器多已裂解。這些屬于不健康的分生孢子。

圖4 不健康的分生孢子結(jié)構(gòu)Fig. 4 Structure of unhealthy conidia

從培養(yǎng)6 d的培養(yǎng)物中隨機(jī)抽取200個(gè)分生孢子，處于分化早、中期的未成熟分生孢子占28.5%，處于成熟期的分生孢子為63%，不健康的占5%，出現(xiàn)類似自噬特征的占3.5%。檢查6 d培養(yǎng)物中100個(gè)成熟、健康的分生孢子，細(xì)胞器出現(xiàn)頻率最高的是線粒體(54%)、脂滴(38%)和被兩層單位膜包被的泡囊(大小為20～100 nm)。統(tǒng)計(jì)12 d的培養(yǎng)物中200個(gè)分生孢子，3%為早中期分生孢子，55%為成熟分生孢子，不健康的占 11.5%，顯現(xiàn)自噬性死亡特征的占 30.5%。說(shuō)明約三分之一的分生孢子以自噬的形式死亡。

呈現(xiàn)自噬性死亡特征的分生孢子顯然是不健康的。由于其占比高，為此作為重點(diǎn)，從超微結(jié)構(gòu)水平進(jìn)行較詳細(xì)觀察，并將衰亡進(jìn)程分成如下幾個(gè)階段：(1)自噬啟動(dòng)，由單位膜包裹的圓形液泡/溶酶體內(nèi)有一被吞噬并裂解的線粒體結(jié)構(gòu)和多個(gè)細(xì)小的囊泡(圖 5a)，這種自噬性液泡又稱自噬泡或自噬體(autophagosome)；(2)質(zhì)膜內(nèi)陷，分生孢子質(zhì)膜明顯內(nèi)陷，細(xì)胞壁和質(zhì)膜之間的距離達(dá)其半徑的二分之一，兩者間的電子透明區(qū)域幾乎占據(jù)一半以上的空間，并充滿形狀多樣的泡囊或碎片，自噬泡內(nèi)可見(jiàn)部分質(zhì)膜和胞質(zhì)被包裹并降解(圖5b)；(3)胞質(zhì)裂解，此時(shí)分生孢子質(zhì)膜內(nèi)陷超過(guò)半徑的三分之二，盡管質(zhì)膜基本完整，但線粒體、脂滴等細(xì)胞器多被裂解，原來(lái)濃密的細(xì)胞質(zhì)和核糖體、微絲等內(nèi)含物消失，電子密度顯著下降，細(xì)胞器多被自噬泡或小囊泡所取代(圖 5c)；(4)質(zhì)膜斷裂，且大部分被降解，胞質(zhì)中線粒體、脂滴、高爾基體以及核糖體等細(xì)胞器、內(nèi)含物已基本消失，多個(gè)自噬泡中多為囊泡或細(xì)胞內(nèi)含物的殘?bào)w，表明該分生孢子已瀕臨死亡(圖5d)；(5)整體解構(gòu)，細(xì)胞高度液泡化，所有細(xì)胞結(jié)構(gòu)組分已崩潰，大部分內(nèi)含物已消失，僅有少量未被消化的囊泡和膜狀斷片，整個(gè)細(xì)胞的電子密度幾近透明，僅細(xì)胞壁保留原來(lái)的形態(tài)(圖5e)。

圖5 分生孢子自噬性死亡的結(jié)構(gòu)特征Fig. 5 Structural characteristics of the autophagic death of the conidia

3 討論與結(jié)論

長(zhǎng)期以來(lái)，水生植物滿江紅被認(rèn)定為蕨類與固氮藍(lán)藻的共生體，而今隨著越來(lái)越多的內(nèi)生細(xì)菌被分離培養(yǎng)，人們將滿江紅與微生物的共生關(guān)系上升為蕨-藻-細(xì)菌的三聯(lián)共生[16]。陳堅(jiān)等[8]通過(guò)高通量測(cè)序，發(fā)現(xiàn)滿江紅體內(nèi)還有真菌存在，將滿江紅與微生物共生關(guān)系的研究又推進(jìn)一步。本研究不僅證實(shí)滿江紅體內(nèi)存在內(nèi)生真菌，還首次實(shí)現(xiàn)滿江紅體內(nèi)真菌的體外培養(yǎng)，用轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)1 (ITS1)和間隔區(qū)4 (ITS4)引物通過(guò)PCR擴(kuò)增、測(cè)序和軟件組裝，取得545 bp序列，經(jīng)Blastn比對(duì)，與聚多曲霉的相似度到99.45%的菌株在100株以上，從分子水平上明確了該內(nèi)生真菌分離物的分類位置。

分生孢子是有隔菌絲霉菌中最常見(jiàn)的一類無(wú)性孢子，是大多數(shù)子囊菌門真菌的無(wú)性繁殖方式。分生孢子的形態(tài)、構(gòu)造、大小和排列等特征因種而異，是菌種鑒定的重要依據(jù)[16—17]。為此本研究用掃描電鏡對(duì)滿江紅內(nèi)生真菌分生孢子的發(fā)生和發(fā)育模式進(jìn)行觀察。子囊菌門的曲霉屬(Aspergillus)和青霉屬(Penicillium)是兩個(gè)進(jìn)化關(guān)系相當(dāng)接近、均具有分化明顯并產(chǎn)生一定形狀的分生孢子梗的屬，但曲霉的分生孢子梗頂端膨大成頂囊，頂囊上半部著生呈輻射狀排列的小梗，小梗末端形成分生孢子鏈；而青霉的分生孢子梗頂端多次分枝成掃帚狀，分枝頂端著生小梗，小梗上串生分生孢子[18—19]。本研究觀察到喇叭狀的頂囊，上面著生輻射狀的分生孢子鏈，因而可排除屬于青霉的可能性。對(duì)真菌分離物分生孢子形態(tài)結(jié)構(gòu)和發(fā)育模式的觀察表明，其分生孢子發(fā)生模式為芽殖型(blastic)[16—17]，其分生孢子的形狀、大小等具有曲霉屬真菌的典型特征[18]。這與分子鑒定結(jié)果一致，因而可以進(jìn)一步認(rèn)定該分離物為聚多曲霉，屬子囊菌門(Ascomycota)散囊菌目(Eurotium)發(fā)菌科(Trichocomaceae)。

更有意義的是，將該分離物的ITS序列與能產(chǎn)生多種活性物質(zhì)的多種聚多曲霉菌株比對(duì)，相似度均大于98%，表明本研究獲得的滿江紅內(nèi)生真菌聚多曲霉具有上述潛能，值得進(jìn)一步研究，以確定其應(yīng)用價(jià)值。

本研究還對(duì)不同發(fā)育期的分生孢子結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行定義和比較分析。結(jié)果表明，分離的聚多曲霉在沙氏平板培養(yǎng)6 d與12 d，其分生孢子發(fā)生與老化程度有如下區(qū)別：6 d培養(yǎng)物處于發(fā)育早中期的分生孢子比12 d培養(yǎng)物高約25%，成熟的分生孢子也比后者高8%。而12 d培養(yǎng)物不健康或呈現(xiàn)自噬特征的分生孢子比6 d培養(yǎng)物高約35%。出現(xiàn)不健康的分生孢子可能是 DNA復(fù)制出錯(cuò)或翻譯時(shí)蛋白質(zhì)折疊異常所致，在發(fā)育早期或后期均可能發(fā)生；也可能是菌體之間營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)導(dǎo)致的死亡。12 d培養(yǎng)物中不健康或衰亡的分生孢子比例偏高可能與自制的平板培養(yǎng)基厚度較薄，營(yíng)養(yǎng)在短期內(nèi)耗盡有關(guān)，營(yíng)養(yǎng)元素缺乏作為一種化學(xué)信號(hào)可能誘發(fā)細(xì)胞程序性死亡；也可能是取樣誤差所致。固體培養(yǎng)基上的真菌菌苔隨著培養(yǎng)時(shí)間的推進(jìn)由中心向外周呈輻射狀生長(zhǎng)(圖1A)。在菌齡12 d的菌苔中心處取樣，其分生孢子老化的比例可能大于在菌苔外緣處取樣的分生孢子。后續(xù)將在研究中對(duì)不同取樣區(qū)域的觀察結(jié)果進(jìn)行比較，制定更科學(xué)的取樣標(biāo)準(zhǔn)，以避免因取樣造成誤差。懸浮液是真菌發(fā)酵的主要產(chǎn)物。分生孢子的生育狀況直接關(guān)系到其代謝產(chǎn)物的質(zhì)量與數(shù)量。上述結(jié)果啟示在后續(xù)的開(kāi)發(fā)研究中應(yīng)通過(guò)發(fā)酵條件的優(yōu)化以調(diào)控其生育狀況從而取得最佳的產(chǎn)品得率。

細(xì)胞程序性死亡是真核生物死亡的重要形式，可分為凋亡、自溶和自噬等類型[20]。滿江紅內(nèi)生真菌培養(yǎng)物中不健康分生孢子除了電子密度低、細(xì)胞內(nèi)含物裂解外，其外膜系統(tǒng)尤其細(xì)胞壁有明顯的程序性死亡特征。如圖4B近似于凋亡(apoptosis-like)，細(xì)胞壁呈不規(guī)則的內(nèi)陷變形；而圖4C更接近于自溶(autolysis-like)，即細(xì)胞壁自我溶解；圖5e分生孢子幾乎中空，殘存但形態(tài)完整的細(xì)胞壁則是自噬性死亡區(qū)別于凋亡和自溶的重要標(biāo)志[20]。

自噬是單細(xì)胞或多細(xì)胞真核生物將其細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物移入自噬泡(液泡、溶酶體或兩者融合)進(jìn)而自我消化的動(dòng)態(tài)過(guò)程。它也是各種生物為實(shí)現(xiàn)體內(nèi)平衡，達(dá)到新的適應(yīng)水平的自我保護(hù)和調(diào)節(jié)過(guò)程[21—22]。自噬性死亡(Autophagic cell death)是細(xì)胞通過(guò)自噬而實(shí)現(xiàn)自我“犧牲”的消亡過(guò)程，是細(xì)胞程序性死亡的一種重要方式。本研究分生孢子自噬性死亡的幾個(gè)階段與真核生物自噬性死亡的超微結(jié)構(gòu)變化基本吻合[22—23]。圖5a中自噬泡的出現(xiàn)，是典型的自噬，可視為自噬性死亡的早期信號(hào)。但因其胞質(zhì)電子密度較高，也可能是一種自我調(diào)節(jié)的可逆行為。圖5d中溶酶體與液泡的融合是自噬泡形成和擴(kuò)展，最終導(dǎo)致死亡的主要途徑。

本研究首次分離培養(yǎng)，并通過(guò)測(cè)序比對(duì)和形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察，鑒定了水生植物滿江紅的內(nèi)生真菌聚多曲霉的存在，較為系統(tǒng)地揭示了其分生孢子發(fā)育模式以及發(fā)生與衰亡進(jìn)程的結(jié)構(gòu)特征，為聚多曲霉活性物質(zhì)的開(kāi)發(fā)和利用及其基礎(chǔ)生物學(xué)研究提供了細(xì)胞學(xué)依據(jù)，并啟示對(duì)水生植物滿江紅內(nèi)生真菌資源的開(kāi)發(fā)是有意義的課題。