白龍?zhí)摹『羧諛钒透跆m　宏梅　烏日汗

【摘 要】 目的：觀察肉蔻-5味丸對抑郁模型大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響，探討其抗抑郁作用機制，為肉蔻-5味丸臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法：將60只SD雄性健康大鼠按體重隨機分為正常組，模型組，肉蔻-5味丸高、中、低劑量組，氟西丁對照組6組，每組為10只大鼠。采用慢性輕度不可預(yù)知溫和刺激結(jié)合孤立飼養(yǎng)方法建立抑郁模型。用體重增長情況、糖水消耗實驗、Open-field敞箱實驗等行為學(xué)方法評價抑郁模型成功與否。實驗第一天開始造模同時給藥，經(jīng)28d刺激后取血、海馬組織，采用ELISA技術(shù)檢測大鼠海馬/血清谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）的水平。結(jié)果：與正常組比較，模型組體重增長緩慢，糖水消化量明顯減少，Open-Field敞箱實驗水平、垂直活動得分均明顯降低，海馬/血清Glu含量顯著升高，GABA含量降低。與模型組比較，氟西丁對照組和蒙藥組均有不同程度抑郁模型大鼠行為學(xué)改變，肉蔻-5味丸中、高劑量組具有明顯的降低Glu水平、提高GABA水平。結(jié)論：蒙藥肉蔻-5味丸對抑郁模型大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)具有調(diào)節(jié)作用，調(diào)節(jié)抑郁模型大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量可能是其抗抑郁作用機制之一。

【關(guān)鍵詞】 蒙藥肉蔻-5味丸;抑郁模型大鼠;氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)

【中圖分類號】R29 【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）14-0031-05

Thesis Topic：Effects of Mongolian Medicine Cardamom-5 Wei Wan on Serum Amino Acid Neurotransmitters in Depression Model Rats

BAI Longtang¹Hurilebagen²Wulan^2*HONG Mei²Wurihan²

1.Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Huhehot 010050，China;2.Inner? Mongolia? Medical University，Huhehot 010110，China

Abstract：Objective To observe the effect of Mongolian medicine Cardamom-5 Wei Wan on serum amino acid neurotransmitters in depression model rats， further explore the mechanism of antidepressant action， and provide scientific basis for its clinical application. Methods 60 healthy SD male rats were randomly divided into 6 groups according to their weight：normal group， model group， high dose group， medium dose group， low dose group and western medicine control group， with 10 rats in each group. Chronic mild unpredictable stimulation combined with isolated feeding was used to establish a depression model. The success or failure of the depression model was evaluated by behavioral methods such as sugar water consumption experiment and open-box experiment. On the first day of the experiment， the model was made and drugs were administered. After 28 days of stimulation， blood and hippocampal tissue were taken. The contents of amino acids such as Glu and GABA in hippocampus， serum were detected by ELISA. Methods：60 SD male healthy rats were randomly divided into six groups according to their body weight：blank control group， model group， Mongolian medicineCardamom-5 Weiwan high dose group， middle dose group， low dose group and Western medicine control group， with 10 rats in each group. The depression model was established by chronic mild unpredictable stimulation combined with isolated feeding. The success of depression model was evaluated by behavioral methods such as sugar water consumption experiment and open field open box experiment. After 28 days stimulation， blood and hippocampal 0tissue were taken. The contents of amino acid neurotransmitters such as Glu and GABA in hippocampus， serum were detected by ELISA. ResultsCompared with the normal group， the glucose digestion amount of the model group was significantly reduced， the horizontal and vertical activity scores of the open-box experiment were decreased， the hippocampal/serum Glu content was increased， and the GABA content was decreased. Compared with the model group， the western medicine group and the Mongolian medicine group both improved the behavioral changes of the depression model rats to varying degrees， while the middle and high dose Mongolian medicine groups significantly reduced the content of Glu and increased the content of GABA. Conclusion The Mongolian medicine Cardamom-5 Weiwan has a regulatory effect on amino acid neurotransmitters in depression model rats， and regulating the content of amino acid neurotransmitters in depression model rats may be one of its mechanisms of antidepressant action.

Key words：Mongolian Medicine Cardamomi-5 Wei Wan; Depression Model Rat; Amino Acid Neurotransmitter

抑郁癥（depression）是以持續(xù)的興趣減退、情感低落為核心癥狀的精神類疾病之一。抑郁癥病程緩慢，發(fā)作至少持續(xù)2周，病程遷延，反復(fù)發(fā)作，致殘率高^[1]。據(jù)統(tǒng)計首發(fā)患者85%左右會在未來10年內(nèi)反復(fù)發(fā)作，終身患病率約為20%，約15%～25%患者最終轉(zhuǎn)變?yōu)殡y治性抑郁癥。因其悲觀厭世，嚴(yán)重者有自殺觀念和行為，有10%～15%的抑郁癥患者最終死于自殺^[2]。隨著經(jīng)濟文化的快速發(fā)展和競爭壓力的急劇增加，抑郁癥的患病率呈逐年上升。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，預(yù)計到2030年抑郁癥可能成為嚴(yán)重威脅人類健康的第二大疾患，增加社會經(jīng)濟負擔(dān)的第一大疾病。抑郁癥不僅影響著患者的日常生活，且對家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟損失^[3]。因此研究其發(fā)病機制、有效預(yù)防和積極治療已成為廣大科研工作者和醫(yī)護人員面臨的重大課題。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為抑郁癥發(fā)病機制復(fù)雜，為多種因素導(dǎo)致綜合性疾病。目前臨床上常用的抗抑郁西藥雖然有一定的臨床療效，但也有不良反應(yīng)多、療效欠佳和耐藥等局限性^[4]。近年來越來越多的研究顯示，氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸（glutamate， Glu）與γ-氨基?。╣ammaaminobutyric acid，GABA）等在抑郁、焦慮、失眠等精神類疾病發(fā)病機制及治療中的作用^[5]，越來越引起人們的關(guān)注。

蒙醫(yī)學(xué)對抑郁癥有獨特的認識，多年的臨床實踐表明用蒙藥治療抑郁癥療效顯著。根據(jù)對抑郁癥發(fā)病誘因、臨床癥狀和病情轉(zhuǎn)歸的認識，抑郁癥是蒙醫(yī)赫依、巴達干偏旺導(dǎo)致三根平衡失調(diào)，影響心、白脈、腦而引起的一系列癥狀。在蒙醫(yī)學(xué)抑郁癥歸屬于“心思病”范疇的疾病^[6]。蒙醫(yī)治療抑郁癥以調(diào)節(jié)三根，鎮(zhèn)心臟赫依，寧心、安神為原則。蒙藥肉蔻-5味丸是具有鎮(zhèn)赫依、寧心、安神等作用的臨床常用的復(fù)方制劑^[7]。研究表明，肉蔻-5味丸對CUMS大鼠5-HT、DA、EA等含量具有一定調(diào)節(jié)作用^[8]。但尚無研究肉蔻-5味丸對氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。

本研究為進一步了解氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁癥中的作用和探索肉蔻-5味丸治療抑郁癥的作用機制，觀察其抑郁模型大鼠海馬/血清中Glu、GABA的影響，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與材料

1.1 動物 SD雄性健康大鼠60只，體重180±20g。購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK（京）：2016-0002。

1.2 材料 肉蔻-5味丸（批號：M13010062，內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院制劑中心），氟西?。▏帨?zhǔn)字：J20160029，禮來制藥有限公司），谷氨酸ELASA試劑盒（批號：20911202，南京建成）、γ-氨基丁酸ELASA試劑盒（批號：L91292625，南京建成），水合氯醛（批號：RH127070、上海羅恩）;

1.3 儀器 自制敞箱實驗設(shè)備：制作正方形立柱箱一個，長×寬×高為80cm×80cm×80cm，底面為一個正方形，有9個小方格組成，箱體四壁均為黑色。EPOCH型酶標(biāo)儀（BioTeK廠家）;BCD-186型超低溫冰箱;TGL-16C型臺式離心機;AJC-0501-P純水儀;TL-420D水浴鍋;PL-203型號電子天秤。

2 方法

2.1 動物分組 將60只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后參考體重及糖水消耗量隨機分為6組，分別為正常組，模型組，氟西丁對照組，肉蔻-5味丸高、中、低劑量組，每組為10只。

2.2 給藥方法與劑量 造模第1天開始對各組大鼠灌胃給藥，除正常組和模型組給予等體積的蒸餾水外，肉蔻-5味丸高、中、低劑量組分別給予肉蔻-5味丸1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg，對照組給予氟西汀3.6mg/kg。按1.0mL/100g體積灌胃，連續(xù)28d，每日同一時間給藥。

2.3 造模 由慢性輕度不可預(yù)知溫和刺激（CUMS）配合孤養(yǎng)法復(fù)制抑郁動物模型。除了正常組外，其余組大鼠均單籠孤養(yǎng)，并給予連續(xù)28d的不同刺激（包括：24h禁食水、黑白顛倒12h、4℃冰水游泳4min、40℃高溫環(huán)境6min、平行搖擺、夾尾1min、潮濕墊料、傾斜鼠籠45°等）;每天隨機刺激1次，同樣刺激不連續(xù)使用，每種刺激28d內(nèi)不超過使用3次。

2.4 評價模型復(fù)制

2.4.1 體重變化 各組大鼠實驗前、實驗14d和28d同一個時間點測量每個大鼠體重。抑郁模型大鼠食欲減退，體重增長緩慢。因此，根據(jù)體重增長快慢來評價抑郁模型成功與否的標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.2 1%蔗糖水消耗量 各組大鼠實驗前、實驗14d和28d，禁水24h后，每只大鼠給予1%蔗糖水100mL，計算大鼠1h內(nèi)飲用蔗糖消耗量。糖水消耗量多說明大鼠快感好，該實驗檢測大鼠快感反應(yīng)。

2.4.3 Open-field自主活動 采用自制箱體，規(guī)格為80cm（長）×80cm（寬）×80cm（高），箱內(nèi)壁為黑色，底面劃分為大小相等的16個等邊方格，記錄大鼠在3min內(nèi)水平和垂直活動得分（以大鼠前兩只腿穿越敞箱底面格數(shù)為水平活動評分，以前兩只腿直立次數(shù)為垂直活動評分）。水平活動得分反應(yīng)大鼠自主活動能力，垂直活動得分反應(yīng)大鼠好奇及探索能力。

2.5 標(biāo)本制備與檢測 連續(xù)28d刺激，同時藥物干預(yù)，第29天實驗結(jié)束后，用10%水合氯醛麻醉大鼠（劑量為0.3mL/100g）， 取腹主動脈血后，3000r/min速度離心后取血清快速冷凍。采用ELISA技術(shù)，按照試劑盒說明測試海馬組織/血清中Glu和GABA含量。

2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 24.00數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件分析，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，選用單因素方差分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 體重變化的比較 與正常組比較，模型組大鼠體重增長在第2、4周時較慢（P<0.05，P<0.01）;與模型組比較，西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠體重增長較快（P<0.05，P<0.01），低劑量組的體重增長較慢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3.2 1%蔗糖水消耗量變化情況比較 與正常組比較，模型組大鼠1%蔗糖水消耗量在第2、4周時較少（P<0.05，P<0.01）;與模型組比較，西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠1%蔗糖水消耗量顯著多（P<0.05）。見表2。

3.3 Open-Field自主活動情況比較 與正常組比較，模型組大鼠水平運動和垂直運動得分較低（P<0.01）;與模型組比較，西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中劑量組水平運動得分較高（P<0.01），肉豆蔻-5味丸高劑量組水平和垂直運動得分較高（P<0.05）。見表3。

3.4 肉蔻-5味丸對大鼠Glu、GABA含量的影響 與正常組比較，模型組大鼠海馬/血清里Glu含量較高（P<0.01），GABA含量較低（P<0.05）;與模型組比較，蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠海馬和血清里Glu含量較低（P<0.01），GABA含量較高（P<0.05），肉豆蔻-5味丸低劑量組無顯著差異（P>0.05）。見表4。

4 討論

抑郁癥是一種情感障礙性疾病，其發(fā)病與遺傳、社會環(huán)境因素、心理、生物化學(xué)等眾多因素有關(guān)。社會環(huán)境和心理因素可能是誘發(fā)抑郁癥的主要原因之一。根據(jù)其發(fā)病誘因，現(xiàn)在已有很多種抑郁動物模型應(yīng)用于研究抑郁癥的生物學(xué)機制。其中慢性輕度不可預(yù)知溫和刺激（CUMS）高度模擬人類抑郁癥的誘發(fā)因素。CUMS是抑郁癥的發(fā)病機制和抗抑郁作用機理研究中最廣泛實用的動物模型之一^[9]。實驗采用CUMS配合孤養(yǎng)造模，觀察體重變化、1%蔗糖水消耗量和Open-Field敞箱實驗垂直及平行得分情況分別反應(yīng)抑郁模型動物體重減輕，快感缺乏和自主活動及探索能力等行為學(xué)方法評價CUMS大鼠模型成功與否。結(jié)果顯示，應(yīng)激刺激前，各組間大鼠體重、糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活動均無顯著性差異。應(yīng)激刺激后，與正常組比較，模型組體重增長緩慢，糖水消耗量、敞箱實驗水平活動格數(shù)和垂直活動次數(shù)均明顯減少，說明抑郁模型復(fù)制成功。與模型組比較，應(yīng)激刺激后，氟西汀組和肉蔻-5味丸組，體重增長明顯，糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活動均有所改善，說明肉蔻-5味丸具有抗抑郁作用，與以往的研究結(jié)果一致。

隨著抑郁癥發(fā)病機制研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其不僅與遺傳、社會心理因素有關(guān)，并且與大腦神經(jīng)生物化學(xué)密切相關(guān)。根據(jù)其發(fā)病的神經(jīng)生物化學(xué)基礎(chǔ)，提出了很多科學(xué)假說，其中“單胺類神經(jīng)遞質(zhì)”是在抑郁癥的發(fā)病機制中最早提出的且相對主導(dǎo)地位的科學(xué)假說^[10]。臨床上常用的抗抑郁藥物大部分都基于該假說而研發(fā)的，這些藥物僅對50%～60%的患者有效。其次，服用這些藥雖然體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量立即上升，但其抗抑郁作用有臨床滯后現(xiàn)象^[11]，說明抑郁癥的發(fā)病機制不僅與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平有關(guān)，可能其他類神經(jīng)遞質(zhì)也參與了抑郁癥發(fā)病機制。文獻^[12]報道，越來越多研究證明，氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）也參與到抑郁癥的發(fā)病機理中，氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)Glu是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在的，人體內(nèi)最主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，對維持神經(jīng)元的興奮與正?；顒泳哂兄匾饬x，其功能為參與感覺傳遞、運動控制、高級皮層功能等過程。GABA屬于抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，其合成主要來自于Glu代謝，谷氨酸脫羧酶是GABA的重要生物合成酶。GABA具有抗焦慮、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌作用^[13]。研究^[14]顯示，抑郁癥患者血和腦組織內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu含量與正常對照組比較明顯升高，而抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA含量下降。Glu的上升水平及GABA 的下降水平與抑郁程度呈正相關(guān)，且經(jīng)藥物治療干預(yù)后、Glu水平下降，GABA含量增加^{[15 ]}。說明抑郁癥發(fā)作與Glu和GABA等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。實驗結(jié)果顯示：與正常組比較，抑郁癥模型大鼠海馬及血清中Glu含量比正常組明顯高，GABA含量比正常組顯著降低，這結(jié)果符合以往的研究結(jié)果，說明氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)異?？赡苁且钟舭Y發(fā)病機制之一。與模型組比較，肉蔻-5味丸高、中劑量組海馬/血清Glu含量降低，肉蔻-5味丸高劑量組海馬/血清GABA含量增多（P<0.05）。說明：肉蔻-5味丸中、高劑量具有明顯的降低Glu含量，不同程度提高GABA含量作用。肉蔻-5味丸調(diào)節(jié)抑郁模型大鼠氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量可能是其抗抑郁作用機理之一。與模型組比較，西藥氟西丁組Glu和GABA含量無顯著性差異（P>0.05）。氟西汀抗抑郁作用可能與氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)無關(guān)。

參考文獻

[1]MIZUKI D， MATSUMOTO K， TANAKA K， et al.Antidepressant-like effect of Butea superba in mice exposed to chronic mild stress and its possible mechanism of action[J].J Ethnopharmacol，2015（156）：16-25.

[2]汪艷，陳晶，雷威，等.抑郁癥患者內(nèi)隱自殺意念與外顯自殺意念的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)，2018，29（19）：2703-2706.

[3]COSEK P，CHOJNACKA M，BIENKOWSKI P，et al.Antidepressant effect of ketamine，a N-methyl-D-aspartale（NMDA） glutamate receptor antagonist，in the therapy of treatment-resistant depression[J].Psychiatr Pol，2014，46（2）：283-294.

[4]李苒，高彬，李琳，等.抑郁癥發(fā)病機制的研究進展[J].天津中醫(yī)藥，2016（2）：121-123.

[5]廖繼武，王絲絲，楊海華，等.抑郁癥患者血清谷氨酸及γ-氨基丁酸系統(tǒng)水平[J].臨床精神病學(xué)，2020（1）：87-90.

[6]胡斯楞，陳英松.抑郁癥的蒙醫(yī)學(xué)研究進展[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2016（4）：11-12.

[7]巴根那. 蒙藥方劑學(xué)[M].呼和浩特市：內(nèi)蒙古人民出版社，2007.

[8]呼日樂巴跟，席迎春，呼和木仁，等.肉蔻-5味丸對慢性抑郁模型大鼠行為及海馬神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2015，21（11）：146-149.

[9]曹利華，白明，方曉艷，等.基于臨床病癥特點的抑郁癥動物模型分析[J].神經(jīng)藥學(xué)學(xué)報，2016（4）：19-21.

[10]李苒，高彬，李琳，等.抑郁癥發(fā)病機制的研究進展[J].天津中醫(yī)藥，2016（2）：121-123.

[11]劉雨涵，王婕.抑郁癥發(fā)病機制及5-羥色胺再攝取抑制劑藥治療進展研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)，2019（14）：84-87.

[12]丁繼紅，胡建，陳華昌，等.谷氨酸循環(huán)障礙與抑郁癥[J]. 現(xiàn)代生物學(xué)進展，2014 （14）：6797-6800.

[13]OGAWA S，KOGA N，HATTORI K，et al.Plasma amino acid profile in major depresssie disorder：analyses in two independent acase-control samplesets[J].J Psychiatr Res，2018（96）：23-32.

[14]翁曉娟.抑郁癥患者血漿谷氨酸、γ-氨基丁酸水平與抑郁癥程度的關(guān)系[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2015.

[15]李婧，孫建棟.谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁癥發(fā)病機制中作用的研究進展[J]. 神經(jīng)藥學(xué)學(xué)報，2014（4）：20-23.

（收稿日期：2021-11-29 編輯：劉 斌）