心舒寶片活血化瘀功效的有效物質(zhì)辨識(shí)研究

張方博 李煜 張毅 徐核 王麗芳 劉叢盛

摘要 目的：以含藥腸吸收液-體外藥理活性相結(jié)合的方法，初步辨識(shí)研究心舒寶片體現(xiàn)活血化瘀功效的有效物質(zhì)。方法：制備心舒寶片全方及各單味藥的腸吸收液，以抗凝血和抗氧化為反映活血化瘀的藥理活性作用，尋找藥效最強(qiáng)的單味藥?？鼓饔眠x擇凝血4項(xiàng)和腺苷二磷酸（ADP）誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)，抗氧化作用選擇1，1-二苯-2-三硝苯肼（DPPH）自由基清除實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：抗凝血研究結(jié)果表明與空白對(duì)照組比較，山楂可延長(zhǎng)凝血酶原時(shí)間（PT，P<0.01）和凝血酶時(shí)間（TT，P<0.05），且有較強(qiáng)的抗ADP誘導(dǎo)血小板凝集作用（P<0.01）?？寡趸芯拷Y(jié)果表明與空白對(duì)照組比較，以丹參的DPPH自由基清除作用最強(qiáng)（P<0.01），其次分別為山楂、刺五加、白芍和郁金。結(jié)論：丹參和山楂可能是心舒寶片體現(xiàn)活血化瘀功效的重要組分，但尚不能代表全方的整體效應(yīng)。

關(guān)鍵詞 心舒寶片;抗凝血;抗氧化;活血化瘀;功效物質(zhì)基礎(chǔ)

Therapeutic Material Basis of Xinshubao Tablet in Promoting Blood Circulation and Removing Stasis

ZHANG Fangbo1，LI Yu1，2，ZHANG Yi1，XU He1，WANG Lifang1，LIU Congsheng3

（1 Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China; 2 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 301617，China; 3 Zhangzhou Pien Tze Huang Pharmaceutical CO. LTD.， Zhangzhou 363000，China）

Abstract Objective：To preliminarily study the therapeutic material basis of Xinshubao tablet in “promoting blood circulation and removing stasis” by a combined method of the drug-containing intestinal absorption liquid and the pharmacological activity evaluation in vitro.Methods：The intestinal absorption liquids containing Xinshubao prescription and five single ingredients were prepared，and the pharmacological effect of “promoting blood circulation and removing stasis” was reflected by the anticoagulant and antioxidant to find the single ingredient with the optimum efficacy.Four coagulation tests and adenosine diphosphate（ADP）-induced platelet aggregation test were conducted to detect the anticoagulant effect，and 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH） radical scavenging test was conducted to reveal the antioxidant effect.Results：The results of anticoagulant experiments showed that compared with the blank control group，Crataegi Fructus prolonged prothrombin time（PT）（P<0.01） and thrombin time（TT）（P<0.05），and had a stronger effect on anti-platelet aggregation induced by ADP（P<0.01）.The results of antioxidant experiments showed that compared with the blank control group，Salvia Root had the optimum effect on scavenging DPPH radical（P<0.01），followed by Crataegi Fructus，Acanthopanacis，Senticosi Radix Et Rhizoma Seu Caulis，Paeoniae Radix Alba，and Curcumae Radix.Conclusion：Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma and Crataegi Fructus may be the most important ingredients of Xinshubao tablet to exert the pharmacological effect of “promoting blood circulation and removing stasis”，but they are unable to represent the whole effect of Xinshubao tablet.

Keywords Xinshubao tablet; Anticoagulant effect; Antioxidant effect; Promoting blood circulation and removing stasis; Therapeutic material basis

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2022.07.003

冠心病指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞和（或）因冠狀動(dòng)脈功能性改變，導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死，常見癥狀為心絞痛、胸悶胸痛、心律失常、惡心嘔吐、氣促、出汗和虛弱等，若斑塊脫落可引起急性冠狀動(dòng)脈綜合征甚至心源性猝死[1]。冠心病作為臨床最常見的心血管疾病，國內(nèi)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，是危害健康及生命的主要?dú)⑹?，成為重大的公共衛(wèi)生問題[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為冠心病心絞痛是由于腎氣衰減、血脈瘀滯引起胸痹、心痛，治療原則以活血化瘀為主，補(bǔ)腎益氣為輔。目前冠心病防治療效顯著，藥物、介入及外科手術(shù)等方法日益規(guī)范和完善，但心力衰竭、心律失常、抗血小板藥物抵抗、血運(yùn)重建后無復(fù)流或慢血流等臨床問題突出，仍有待改善[3]。冠心病的藥物治療主要包括減輕癥狀的藥物如硝酸酯制劑和鈣通道阻滯劑等，改善預(yù)后的藥物如β受體阻滯劑、抗血小板藥、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和他汀類降脂藥等[4]。當(dāng)冠心病患者出現(xiàn)不同的臨床表現(xiàn)，在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上，可加用相應(yīng)的中成藥治療[5]。與西藥比較，中藥作用平和，安全性良好，中藥聯(lián)合治療不但改善患者心肌缺血及心功能狀況，還調(diào)節(jié)整體狀態(tài)，有效緩解氣短、乏力、頭暈、納呆、多汗、失眠、便秘等伴隨或繼發(fā)癥狀，提高生命質(zhì)量[6]。

心舒寶片由丹參、白芍、刺五加、山楂和郁金五味藥組成，具有活血化瘀和益氣止痛的功效，用于治療冠心病、氣虛血瘀引起的胸悶、心絞痛以及高血壓、高血脂、動(dòng)脈硬化等病癥。臨床研究表明其降低患者總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、三酰甘油（Triacylglycerol，TG）和高密度脂蛋白（High Density Lipoprotein，HDL）水平，改善血液流變學(xué)功能，有效防治冠心病心絞痛[7-8]。規(guī)范化西藥聯(lián)合心舒寶片辨證治療冠心病，通過冠脈造影術(shù)表明聯(lián)合療法更有效控制穩(wěn)定型心絞痛患者相關(guān)癥狀，減輕心臟急性缺血損傷[9]。上述研究說明心舒寶片治療冠心病有良好療效，但其活血化瘀的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚。

利用外翻腸囊法制備含中藥腸吸收液，該法最早用于研究中藥主要成分的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，后被用于中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、成分辨識(shí)和體外藥理活性等研究[10]。與中藥提取物比較，含藥腸吸收液不含提取物中雜質(zhì)如鞣質(zhì)和無機(jī)鹽等成分干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;與含藥血清比較，不含血清中內(nèi)源性活性物質(zhì)對(duì)組織細(xì)胞生物活性的影響[11-12]。本研究制備心舒寶片的含藥腸吸收液，選取直接反映活血化瘀的藥理活性如抗凝血和抗氧化作用，采用“含藥腸吸收液-體外藥理活性”相結(jié)合的研究方法探討心舒寶片抗凝血及抗氧化的藥效，初步明確其抗凝血和抗氧化功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，為有效成分辨識(shí)以及中藥復(fù)方質(zhì)量評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 無特定病原體（Specific Pathogen Free，SPF）級(jí)雄性SD大鼠30只，6～8周齡，體質(zhì)量180～220 g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2019-0008，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)（110322211101259352和110322211103152774）。實(shí)驗(yàn)期間大鼠飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SCXK（京）2019-0003。動(dòng)物房為屏障系統(tǒng)，人工光照，12 h明暗周期，溫度控制在20～22 ℃的范圍，相對(duì)濕度40%～70%，換氣次數(shù)15次/h。大鼠飼養(yǎng)于塑料飼養(yǎng)籠，每籠5只。用100 mL塑料飲水瓶盛裝純凈水，供隨意飲用，每天更換新鮮飲水和墊料。

1.1.2 藥物 白芍（批號(hào)：Q2103005）產(chǎn)自安徽，丹參（批號(hào)：Q2101001）產(chǎn)自山東，刺五加（批號(hào)：Q2103004）產(chǎn)自吉林，山楂（批號(hào)：Q2102008）產(chǎn)自安徽，郁金（批號(hào)：Q2102002和Q2007002）產(chǎn)自廣西，上述飲片經(jīng)鑒定符合2020年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定。白芍提取物（批號(hào)：21042502）、刺五加提取物（批號(hào)：21042802）、丹參提取物（批號(hào)：21042501）、山楂提取物（批號(hào)：21042505）、郁金提取物（批號(hào)：21042803）以及心舒寶片全方提取物（批號(hào)：21042801）均為按照相應(yīng)的工藝路線制備所得。以上飲片和提取物均由漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司提供。

1.1.3 試劑與儀器 2，2-二苯1-三硝苯肼（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazine，DPPH）氮自由基清除能力測(cè)試試劑盒（上海聰羿生物科技有限公司，貨號(hào)：A001-96T）;青鏈霉素（100×，貨號(hào)：P400）、二磷酸腺苷（ADP，貨號(hào)：A0180）、阿司匹林（貨號(hào)：A8830）和脂多糖（Escherichia coli 055：B5，貨號(hào)：L8880）購于北京索萊寶科技有限公司;潑尼松（Selleckchem公司，美國，貨號(hào)：S173703）;凝血酶原時(shí)間（貨號(hào)：STY50101-35-1）、活化部分凝血激酶時(shí)間（Activated Partial Thromboplastin Time，APTT，貨號(hào)：STY50201-42-6）、凝血酶時(shí)間（貨號(hào)：STY50301-33-6）和纖維蛋白原（貨號(hào)：STY50401-35-1）測(cè)定試劑盒均購于泰州中勤世帝生物技術(shù)有限公司;戊巴比妥鈉（Sigma公司，美國，貨號(hào)：P3761）;DMEM高糖培養(yǎng)基（貨號(hào)：11965092）、無菌磷酸緩沖鹽溶液（PhosphateBuffer Saline，PBS）（1×，貨號(hào)：10010049）、胎牛血清（貨號(hào)：12484028）和0.25%胰酶-EDTA（貨號(hào)：25200072）均購于美國Gibico公司;細(xì)胞活力計(jì)數(shù)試劑（CCK-8，新賽美生物科技有限公司，貨號(hào)：C6005）;無水乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，貨號(hào)：10009218）;生理鹽水（石家莊四藥有限公司，批號(hào)：2012211910）。多功能熒光酶標(biāo)儀（Becton-Dickinson，美國，型號(hào)：SpectraMax M5）;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（恒豐醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)：FCD-3000系列）;電子天平（精密科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：FA2204B）;離體組織器官實(shí)驗(yàn)裝置（奧爾科特生物科技有限公司，型號(hào)：ALC-M）;血小板凝集及凝血因子分析儀（中勤世帝科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：SC40 LG-PABER-I）;凝血分析儀（中勤世帝科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：STEELLEX AC100）;二氧化碳培養(yǎng)箱（Sanyo公司，日本，型號(hào)：MCO-18AIC）;倒置相差顯微鏡（Olympus公司，日本，型號(hào)：CKX41）;高速低溫離心機(jī)（Eppendorf，德國，型號(hào)：5424R）。

1.2 方法

1.2.1 分組與含藥腸吸收液制備 實(shí)驗(yàn)前隨機(jī)選取10只大鼠禁食12 h，頸部脫臼處死，沿腹中線剪開皮膚和肌肉。找出胃幽門，自幽門以下10 cm開始截取腸段并沖洗干凈。將硅膠套管的一端插入腸管中，將腸道內(nèi)表面翻轉(zhuǎn)，用細(xì)線結(jié)扎;然后用0 ℃臺(tái)氏緩沖液沖洗腸段內(nèi)表面，將另一端用線結(jié)扎，確保不漏液。量取25 mL受試藥物供試液（或加入臺(tái)氏緩沖液，為空白腸吸收液），預(yù)先將其加入麥?zhǔn)显」苤?，同時(shí)通入95%O2和5%CO2的混合氣體，開啟37 ℃恒溫水浴循環(huán)系統(tǒng)。用注射器吸取2 mL臺(tái)氏緩沖液，注入腸管中，然后將其置于麥?zhǔn)显」苤小? h后收集腸管內(nèi)液體，即為含藥腸吸收液，0.22 μm無菌濾膜過濾分裝，-20 ℃保存待用。根據(jù)心舒寶膠囊的制備工藝路線，分別制備得到干浸膏如下：白芍185 g、刺五加168 g、丹參120 g、山楂158 g、郁金50 g以及心舒寶全方198 g。將以上干浸膏各稱取30.0 g，200 mL臺(tái)氏緩沖液溶解，并分別制備相應(yīng)的含藥腸吸收液，以上6種受試樣品腸吸收液的生藥量均為150.0 mg/mL。實(shí)驗(yàn)時(shí)將上述腸吸收液分別稀釋至所需濃度。取剩余的20只大鼠，麻醉后每只大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈取全血8～10 mL，各取4～5 mL全血分別用于制作凝血4項(xiàng)和ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)的受試血漿樣本，每只大鼠最終能得到2～3 mL血漿用于凝血4項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，3～4 mL血漿用于ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)按照干預(yù)藥物的不同，將血漿或DPPH自由基等實(shí)驗(yàn)樣本隨機(jī)分為8個(gè)大組：空白對(duì)照組、陽性對(duì)照藥組、心舒寶片全方組、白芍組、丹參組、刺五加組、山楂組和郁金組，空白對(duì)照組加入空白腸吸收液預(yù)處理;陽性對(duì)照藥組加入陽性對(duì)照藥預(yù)處理;其他用藥組加入不同濃度受試藥物如心舒寶片全方、白芍、丹參、刺五加、山楂和郁金的含藥腸吸收液預(yù)處理。其中凝血4項(xiàng)和抗ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)上述6種受試藥物組分低濃度（0.42 mg/mL）和高濃度（0.83 mg/mL）2組，陽性對(duì)照藥為阿司匹林，共14組，每組為來自3只大鼠的3個(gè)血漿樣本;DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)上述6種受試藥物組分為低濃度（7.5 mg/mL）、中濃度（15.0 mg/mL）和高濃度（30.0 mg/mL）3組，陽性對(duì)照藥為維生素C，共20個(gè)組，每組9個(gè)樣本。

1.2.2 干預(yù)方法 將白芍、刺五加、丹參、山楂、郁金以及心舒寶全方等6種含藥腸吸收液與凝血四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)樣本（血漿）、ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)樣本（富血小板血漿）和DPPH自由基混合后，凝血4項(xiàng)和ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)共同作用20 min，DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)共同作用30 min，再進(jìn)行相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.4.1 凝血4項(xiàng) 凝血4項(xiàng)為凝血酶原時(shí)間（Prothrombin Time，PT）、活化部分促凝血酶原激酶時(shí)間（Activated Partial Thromboplastin Time，APTT）、凝血酶時(shí)間（Thrombin Time，TT）和纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)IB）。戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，枸櫞酸鈉抗凝，3 000 r/min，離心半徑10 cm，離心10 min，吸取上清，得到血漿實(shí)驗(yàn)樣本。檢測(cè)PT和APTT需將45 μL血漿與5 μL不同濃度的干預(yù)藥物混合，檢測(cè)TT和FIB需將90 μL血漿與10 μL不同濃度的干預(yù)藥物混合，作用時(shí)間均為20 min，按試劑盒操作說明加入其他試劑，上機(jī)檢測(cè)。

1.2.4.2 ADP誘導(dǎo)血小板凝集 戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，枸櫞酸鈉抗凝。800 r/min，離心半徑10 cm，離心10 min，吸取上層富血小板血漿（Platelet Rich Plasma，PRP），得到血漿實(shí)驗(yàn)樣本。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，PRP最適數(shù)目（200～250）×109/L。將270 μL PRP與30 μL不同濃度的干預(yù)藥物作用20 min，上機(jī)預(yù)熱5 min，加入ADP 10 μL，終濃度10 μmol/L，比濁法測(cè)定誘導(dǎo)血小板PRP聚集所需要的時(shí)間（s）和百分率。

1.2.4.3 DPPH自由基清除 吸取DPPH自由基樣品溶液100 μL于96孔板，加入100 μL不同濃度的干預(yù)藥物，混勻后室溫避光30 min，517 nm處測(cè)定吸光值（A）。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，共計(jì)9個(gè)樣本。以空白腸吸收液為空白對(duì)照（A0），各樣品與DPPH溶液為測(cè)定樣品（A1），各樣品與樣品稀釋液為對(duì)照樣品（A2），則樣品吸光值為A（A1-A2）。清除率計(jì)算公式：清除率（%）=（A0-A）/A0×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，任意2組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 心舒寶片全方及各單味藥對(duì)凝血4項(xiàng)的影響

結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組PT（20.13±0.80）s和TT（32.17±1.78）s比較，山楂低劑量組（0.42 mg/mL）PT為（22.06±0.16）s，TT為（35.11±0.41）s;山楂高劑量組（0.83 mg/mL）PT為（23.54±0.46）s，TT為（38.5±1.99）s;以山楂高劑量組效果最好，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。心舒寶片全方、白芍、刺五加、丹參和郁金等組別劑量在0.83 mg/mL和0.42 mg/mL時(shí)，對(duì)凝血4項(xiàng)指標(biāo)均無影響。陽性對(duì)照藥阿司匹林（0.25 mg/mL）組TT為（35.72±0.94）s，F(xiàn)IB為（0.59±0.05）g/L。見表1。

2.2 心舒寶片全方及各單味藥對(duì)ADP誘導(dǎo)血小板凝集的影響 結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組（22.66±6.05）%比較，山楂高劑量組（0.83 mg/mL）血小板凝集率顯著降低至（2.43±0.37）%（P<0.05）。陽性對(duì)照藥阿司匹林也具有抗血小板凝集的作用，凝集率為（3.43±2.53）%（P<0.05）。見表2。

2.3 心舒寶片全方及各單味藥對(duì)DPPH自由基清除的影響 結(jié)果顯示，空白對(duì)照組沒有清除作用，白芍、刺五加、丹參、山楂和郁金濃度均在30.0 mg/mL時(shí)，以丹參的DPPH自由基清除作用最強(qiáng)，其次分別為山楂、刺五加、白芍和郁金。其中刺五加DPPH自由基清除作用均較強(qiáng)，隨濃度變化不明顯。心舒寶片全方的3個(gè)作用濃度與丹參的DPPH自由基清除作用基本相當(dāng)。陽性對(duì)照藥維生素C（0.5 mmol/L）的DPPH自由基清除率為（74.15±0.93）%。見表3，圖1。

3 討論

本研究結(jié)果表明心舒寶片全方、白芍、刺五加、丹參和郁金等對(duì)凝血4項(xiàng)和血小板凝集均無影響，只有山楂可以延長(zhǎng)凝血酶原時(shí)間和凝血酶時(shí)間，并抑制血小板凝集。對(duì)照藥阿司匹林（0.25 mg/mL）可以降低纖維蛋白原的水平，延長(zhǎng)凝血酶時(shí)間，同時(shí)抑制血小板凝集。心舒寶片全方、白芍、刺五加、丹參、山楂和郁金均具有DPPH自由基清除作用，以丹參的自由基清除作用最強(qiáng)，心舒寶片全方的自由基清除作用與丹參相當(dāng)。對(duì)照藥維生素C（0.5 mmol/L）也具有自由基清除作用。本研究結(jié)果說明心舒寶片全方未發(fā)現(xiàn)抗凝血作用，但具有抗氧化作用;全方中抗凝血作用最強(qiáng)的單藥為山楂，抗氧化作用最強(qiáng)的單藥為丹參。全方無抗凝血作用，推測(cè)原因可能是全方和單藥的效應(yīng)結(jié)果均是在等劑量的基礎(chǔ)上進(jìn)行比較，不排除將全方劑量增加后，各種效應(yīng)均相應(yīng)增強(qiáng)，而強(qiáng)于其中的單藥。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明血瘀證與凝血酶功能活化、血小板過度激活、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血流動(dòng)力學(xué)改變、纖溶功能衰退、微循環(huán)功能障礙和炎癥反應(yīng)等關(guān)系密切[13]。冠心病血瘀證患者常出現(xiàn)凝血相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)異常，如APTT、PT和抗凝血酶均降低，F(xiàn)IB、纖維蛋白原降解產(chǎn)物、D-二聚體和血小板P選擇素均升高[14]。冠心病急性發(fā)作患者PT、TT、APTT、抗凝血酶活性、抗凝血酶抗原和組織型纖溶酶原激活物降低，F(xiàn)IB和血小板聚集率升高，出現(xiàn)高凝血、低抗凝和低纖溶的表現(xiàn)[15]。

心肌氧化應(yīng)激（Oxidative Stress）是誘發(fā)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和斑塊破裂的重要因素，表現(xiàn)為病理狀態(tài)下，活性氧生成過多，促進(jìn)低密度脂蛋白的氧化修飾和脂質(zhì)過氧化，釋放過量氧化中間產(chǎn)物，使內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失衡，導(dǎo)致細(xì)胞損傷，加速動(dòng)脈粥樣斑塊的形成，誘導(dǎo)血管損傷相關(guān)基因異常表達(dá)，并導(dǎo)致中性粒細(xì)胞浸潤[16]。氧化應(yīng)激以及后續(xù)的血管內(nèi)皮功能損傷參與冠心病的發(fā)生與發(fā)展，大量氧自由基與細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸結(jié)合，降低心肌組織超氧化物歧化酶活性，增加脂質(zhì)過氧化物和丙二醛含量，致肌質(zhì)網(wǎng)膜受損，心房肌纖維溶解，胞質(zhì)鈣濃度升高，引發(fā)細(xì)胞膜質(zhì)變，促進(jìn)心肌纖維化[17]。冠心病心肌缺血血瘀證大鼠血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶均降低，丙二醛升高，氧化應(yīng)激水平明顯升高[18]。急性冠脈綜合征血瘀證患者經(jīng)治療后血清超氧化物歧化酶和一氧化氮合酶的活性升高，丙二醛活性降低，氧自由基水平下降，心肌的抗氧化能力提高[19]。

心舒寶片全方以活血化瘀為主，加以理氣，使氣行則血行。臨床研究表明其具有較強(qiáng)的活血化瘀和行氣止痛的功效，用于冠心病心絞痛（胸痹）中醫(yī)辨證屬心血瘀阻證型者療效較好[20]。方中丹參、白芍、郁金和山楂均有活血化瘀的作用，丹參臨床主要用于治療冠心病心絞痛，具有抗炎、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、增加冠脈流量、抗脂質(zhì)過氧化、清除自由基、促進(jìn)纖維蛋白降解和抑制膠原纖維產(chǎn)生等作用[21]。白芍可抗血小板聚集，縮短纖維蛋白原形成的時(shí)間，擴(kuò)張冠脈，降低整體耗氧量，改善心肌缺血缺氧，增強(qiáng)心臟功能[22]。郁金抗炎，抑制氧化應(yīng)激，降低血脂[23]。山楂舒張外周血管，降低血壓，緩解心肌缺血，促進(jìn)心肌收縮，改善血液流變學(xué)，降低血脂，抗動(dòng)脈粥樣硬化[24]。刺五加抑制血小板聚集，降低血脂，縮小心肌梗死面積，增強(qiáng)抗氧化酶活性，改善心律失常，提高紅細(xì)胞膜的流動(dòng)性，降低血液黏稠度[25]。

本研究采用含藥腸吸收液與體外藥理實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法，從抗凝血和抗氧化的角度闡明心舒寶片通過活血化瘀治療冠心病的作用機(jī)制，并尋找發(fā)揮藥效最佳的單味藥。體外凝血4項(xiàng)和ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)顯示山楂抗凝血作用最強(qiáng)，DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)顯示丹參抗氧化作用最強(qiáng)。研究結(jié)果表明山楂和丹參分別是體現(xiàn)抗凝血和抗氧化的最佳有效單味藥，初步定位心舒寶片體現(xiàn)不同藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。而山楂和丹參中代表抗凝血和抗氧化最佳藥效的化合物，還需要結(jié)合含藥腸吸收液和人血成分的化學(xué)檢測(cè)結(jié)果來深入分析，以最終得到體現(xiàn)活血化瘀的中藥質(zhì)量標(biāo)志物，構(gòu)建新型的藥物質(zhì)量控制管理體系，有效提高和完善心舒寶片的質(zhì)量控制水平[26]。

綜上所述，丹參和山楂可能是心舒寶片發(fā)揮活血化瘀功效的重要組分，但尚不能代表全方的整體效應(yīng)。

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（2022-03-10收稿 本文編輯：王明）