孫雪瑩，田海霞，郭明杰

(1.上海螢火蟲農(nóng)業(yè)科技中心，上海 201799；2.興農(nóng)藥業(yè)(中國)有限公司，上海 201416)

氟啶蟲酰胺(flonicamid)是一種高選擇性殺蟲劑，主要用于防治刺吸式口器害蟲，原理是通過抑制昆蟲內(nèi)向整流鉀離子(Kir)通道，干擾昆蟲細(xì)胞的離子穩(wěn)態(tài)與平衡電位，破壞馬氏管與唾液腺的正常分泌功能，從而影響昆蟲的取食與排泄過程,最終導(dǎo)致害蟲死亡[1]。噻蟲啉(thiacloprid)是一種新煙堿類殺蟲劑，主要用于防治刺吸式口器和部分咀嚼式口器害蟲，具有高效、廣譜、低毒和高選擇性等優(yōu)點[2]，對刺吸式口器害蟲、鞘翅目等害蟲具有十分突出的防治效果，成為當(dāng)今使用最為廣泛的殺蟲劑之一。噻蟲啉作為新煙堿類殺蟲劑中對蜜蜂較安全的藥劑成為吡蟲啉、噻蟲嗪、噻蟲胺等的替代品，近幾年在我國大量生產(chǎn)并推廣使用[3]。將氟啶蟲酰胺和噻蟲啉復(fù)配，可有效防治蚜蟲、粉虱、各種甲蟲(如馬鈴薯甲蟲、蘋果象甲、稻象甲)和鱗翅目害蟲(如蘋果樹上潛葉蛾和蘋果蠹蛾)等，應(yīng)用前景廣闊。而關(guān)于氟啶蟲酰胺和噻蟲啉的檢測方法報道主要是氣相色譜法和液相色譜法[4-11]，本文采用反相高效液相色譜法，在同一色譜條件下對36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑有效成分進(jìn)行定量分析。該方法操作簡便、快速，準(zhǔn)確度和精密度良好，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測分析。

1 試驗方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1260型高效液相色譜儀配有可變波長檢測器、自動進(jìn)樣器和Agilent色譜工作站。

水為新蒸二次蒸餾水；甲醇為色譜純；氟啶蟲酰胺標(biāo)樣：純度≥98.0%；噻蟲啉標(biāo)樣：純度≥98.0%；36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑(標(biāo)樣和樣品均由興農(nóng)藥業(yè)(中國)有限公司提供)。

1.2 色譜條件

色譜柱：采用Zorbax Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm i.d.，5μm)；檢測波長：260 nm；流動相：甲醇∶水=45∶55(體積比)；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：30 ℃。在上述色譜條件下，噻蟲啉和氟啶蟲酰胺的保留時間分別約為3.7 min和7.2 min(圖1～2)。

圖1 噻蟲啉+氟啶蟲酰胺標(biāo)樣液相色譜 圖2 36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑試樣液相色譜

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氟啶蟲酰胺標(biāo)樣約0.05 g、噻蟲啉標(biāo)樣約0.10 g(精確至0.000 1 g)置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，于超聲波中振蕩至完全溶解，取出，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容至刻線搖勻，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑試樣0.41 g(精確至0.000 1 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，于超聲波中振蕩至完全溶解，取出，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容至刻線搖勻，用0.22 μm有機濾膜過濾后備用。

1.4 測定

在上述液相色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計算各針相對響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰兩針的相對響應(yīng)值變化小于1.0%，按下列順序進(jìn)樣分析：標(biāo)樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標(biāo)樣溶液。用外標(biāo)法計算各自含量。

1.5 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的氟啶蟲酰胺(或噻蟲啉)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟啶蟲酰胺(或噻蟲啉)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)按照公式(1)計算：

(1)

式中：A1為標(biāo)樣溶液中氟啶蟲酰胺(或噻蟲啉)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟啶蟲酰胺(或噻蟲啉)峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣質(zhì)量(g)；m2為試樣質(zhì)量(g)；P為標(biāo)樣中氟啶蟲酰胺(或噻蟲啉)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%(m/m)。

2 實驗過程及步驟

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相的選擇

流動相的選擇是決定液相色譜分離效果的關(guān)鍵所在。通過試用不同比例的甲醇、水，甲醇、水作為流動相對試樣進(jìn)行分離檢測。根據(jù)檢測結(jié)果，采用甲醇、水作為流動相分離效果好，出峰時間短，且峰型尖銳，最終選定流動相的比例為甲醇∶水=45∶55(體積比)。

2.1.2 檢測波長的選擇

通過對氟啶蟲酰胺和噻蟲啉進(jìn)行紫外掃描，得到其相應(yīng)的吸收波長與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。當(dāng)選用260 nm作為檢測波長時，氟啶蟲酰胺和噻蟲啉均有較強吸收峰，同時雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動相無吸收。因此，為兼顧兩者均有較好的吸收，將檢測波長選為260 nm。

2.2 特異性的測定

本試驗方法采用HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別。氟啶蟲酰胺HPLC-DAD中的最小峰純度相似度均為0.999 846，最小峰純度閾值為0.999 964，最小峰純度指數(shù)為正值，說明樣品色譜峰中不含有雜質(zhì)峰；噻蟲啉HPLC-DAD中的最小峰純度相似度為0.999 999，最小峰純度閾值為0.999 999，最小峰純度指數(shù)為正值，說明樣品色譜峰中不含有雜質(zhì)峰。標(biāo)樣液相色譜峰與試樣液相色譜峰出峰時間差在1.0%以內(nèi)，如圖1～2所示。制劑中峰純度色譜圖如圖3～4所示。

圖3 制劑中氟啶蟲酰胺HPLC-DAD峰純度色譜

圖4 制劑中噻蟲啉HPLC-DAD峰純度色譜

2.3 線性相關(guān)性測定

在一定質(zhì)量范圍內(nèi)，按照濃度遞增的順序配制數(shù)個標(biāo)樣，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的操作步驟進(jìn)行分析，測定氟啶蟲酰胺/噻蟲啉的峰面積，取兩次測定的平均結(jié)果。以氟啶蟲酰胺/噻蟲啉標(biāo)樣溶液之濃度(mg·L-1)為橫坐標(biāo)，峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到氟啶蟲酰胺和噻蟲啉的線性相關(guān)性曲線。氟啶蟲酰胺線性方程是：y=4.6863x-24.303(圖5)，相關(guān)系數(shù)為1.000 0；噻蟲啉的線性方程是：y=13.031x-8.51(圖6)，相關(guān)系數(shù)為1.000 0。

圖5 氟啶蟲酰胺線性關(guān)系

圖6 噻蟲啉線性關(guān)系

2.4 分析方法的精密度測定

在上述色譜操作條件下，對同一36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑樣品平行測定5次，氟啶蟲酰胺和噻蟲啉的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.001 4和0.002 2，變異系數(shù)分別為1.16%和1.66%，結(jié)果見表1。

表1 36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑分析方法的精密度試驗結(jié)果

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度測定

制劑空白：按配方比例要求，除氟啶蟲酰胺原藥、噻蟲啉原藥外將所有助劑混合均勻。在制劑空白樣品中分別加入不同質(zhì)量已知含量的氟啶蟲酰胺標(biāo)樣、噻蟲啉標(biāo)樣至4個于100 mL容量瓶中，加入60 mL甲醇，置于超聲波中超聲振蕩至完全溶解，取出，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容至刻線，搖勻，用0.22 μm有機濾膜過濾后備用。

按照上述色譜條件測定樣品的氟啶蟲酰胺和噻蟲啉總濃度，并計算其平均回收率，結(jié)果見表2。氟啶蟲酰胺和噻蟲啉的平均回收率分別為99.88%和99.91%。

表2 36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑分析方法的回收率試驗結(jié)果

2.6 非分析物干擾的試驗

在評價準(zhǔn)確度時，通常需要包含非分析物質(zhì)的干擾，因為有效成分中的任何干擾物都會導(dǎo)致分析方法出現(xiàn)系統(tǒng)誤差。而且，在分析時應(yīng)同時測定不帶有效成分的空白樣品，或證明其無干擾。

通過對空白樣品(不含有效成分的助劑)、原藥等按分析方法1.2進(jìn)行分析，如圖7～9所示，各助劑與原藥無相互干擾，對分析無干擾，均不影響相互定性定量分析，因此本文的分析方法未受到非分析物干擾。

圖7 空白樣品液相色譜 圖8 氟啶蟲酰胺原藥液相色譜

圖9 噻蟲啉原藥液相色譜

3 結(jié) 論

本文建立了36%氟啶·噻蟲啉懸浮劑中有效成分的分析方法，此方法具有高精密度和高準(zhǔn)確度的特點，其線性關(guān)系良好，試驗操作簡便，是進(jìn)行在線產(chǎn)品質(zhì)量檢測較理想的分析方法。