鄧程恩

摘要：目的：探討p140Cap和細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原67（Ki-67）在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)p140Cap、Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織和膀胱癌癌旁組織中的表達(dá)。結(jié)果：膀胱尿路上皮癌組織中的p140Cap、Ki-67陽性表達(dá)率高于膀胱癌癌旁組織;膀胱尿路上皮癌組織中的p140Cap陽性表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)無關(guān);p140Cap和Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論：p140Cap在膀胱癌組織中高表達(dá)，可能在膀胱癌的發(fā)展中發(fā)揮促癌作用，抑制凋亡;p140Cap和Ki-67可能在膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，影響膀胱癌不良預(yù)后。

關(guān)鍵詞：膀胱尿路上皮癌;p140Cap;細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原67;免疫組織化學(xué)

【中圖分類號(hào)】 R694 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）12--01

膀胱癌屬世界九大惡性腫瘤之一。膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）具有多灶性、易復(fù)發(fā)性和較高死亡率的生物學(xué)特征[1]。研究多基因與膀胱移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系，不僅可以了解膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中各基因及其所表達(dá)產(chǎn)物所發(fā)生的改變，還可通過了解各基因的作用及相互關(guān)系，為移行細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制的闡明提供一定的幫助。細(xì)胞核相關(guān)抗原67（Ki-67）是一種僅在增殖細(xì)胞中表達(dá)的蛋白，是檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)。p140Cap主要表達(dá)于大腦、睪丸以及富含上皮的組織，例如乳腺、大腸等。目前關(guān)于人類腫瘤組織中表達(dá)的報(bào)道較少，僅根據(jù)過往報(bào)道籠統(tǒng)認(rèn)為，p140Cap的陰性表達(dá)率與腫瘤的惡性程度成負(fù)相關(guān)?，F(xiàn)本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)膀胱尿路上皮癌組織和癌旁組織中p140Cap和Ki-67表達(dá)，旨在探討p140Cap和Ki-67蛋白表達(dá)的意義及相關(guān)性。

1研究方法：

1.1膀胱尿路上皮癌患者資料和組織準(zhǔn)備

選取廣西醫(yī)科大學(xué)附腫瘤醫(yī)院泌尿外科所收治的膀胱尿路上皮癌患者15例，標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)為膀胱尿路上皮癌，提取患者的手術(shù)切除標(biāo)本。入選病例均為男性，年齡47～77歲，平均63歲。15例標(biāo)本病理分級(jí)按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為：低級(jí)別6例，高級(jí)別9例。臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)分為：Tis～T1期7例，T2～T4期8例。術(shù)后和活檢時(shí)采集樣本，從每例患者標(biāo)本中可獲得腫瘤組織和癌旁正常膀胱粘膜組織備用，取癌旁正常膀胱粘膜組織標(biāo)本作對(duì)照。

1.2免疫組化檢測(cè)p140Cap和Ki-67的表達(dá)

采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)15例膀胱尿路上皮癌者組織及癌旁正常組織中p140Cap和Ki-67的表達(dá)情況。

實(shí)驗(yàn)試劑：用于免疫組織化學(xué)染色的p140Cap一抗多克隆兔抗人SNAP25InteractingProteinAb抗體購自Novus，即用型快捷免疫組織化學(xué)MaxVision試劑盒，Ki-67鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，二抗和DAB顯色試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3免疫組化結(jié)果判斷：

Olympus（日本）BX53雙目顯微鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選取4個(gè)不同視野，分別計(jì)數(shù)陽性和陰性細(xì)胞。p140Cap陽性表達(dá)產(chǎn)物呈黃色顆粒狀，表達(dá)較強(qiáng)時(shí)呈棕黃色，定位于細(xì)胞核中。光鏡下半定量結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)[2]：染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)標(biāo)準(zhǔn)：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。同樣物鏡下陽性細(xì)胞數(shù)：≤10%為1分，11%—50%為2分，51%—75%為3分，≥75%為4分。兩類分?jǐn)?shù)乘積滿3分為“+”;4分為“++”;5分以上為“+++”;“+、++、+++”為表達(dá)陽性;“++、+++”為表達(dá)強(qiáng)陽性。本研究P140Cap陽性表達(dá)率為（評(píng)分大于4分，++/+++），即高表達(dá)。Ki-67陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，陽性表達(dá)表現(xiàn)為棕黃色顆粒染色，以陽性表達(dá)率<20%為陰性，≥20%為陽性[3]。

1.4分析p140Cap和Ki-67蛋白的表達(dá)及相關(guān)性。

2.結(jié)果：

膀胱尿路上皮癌組織p140Cap陽性表達(dá)率（++/+++）為100%（15/15），癌旁正常組織陽性表達(dá)率為3/15（20%），癌組織陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織;低級(jí)別和高級(jí)別尿路上皮癌組織均高表達(dá)p140Cap。在膀胱尿路上皮癌組織中p140Cap的表達(dá)未體現(xiàn)出與癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度相關(guān)。Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織中的陽性率12/15（80%），癌旁正常膀胱組織2/15（13.3%），癌組織Ki-67陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織。高級(jí)別尿路上皮癌組織Ki-67呈高表達(dá)，低級(jí)別癌組織Ki-67呈低表達(dá)，Ki-67隨癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度增加有增強(qiáng)趨勢(shì)。經(jīng)分析，膀胱尿路上皮癌組織P140Cap、Ki-67表達(dá)陽性表達(dá)率均高于癌旁組織組織，兩者表達(dá)成正相關(guān)。

3.討論

膀胱癌作為泌尿系統(tǒng)三大常見的惡性腫瘤之一，可由吸煙、感染等多種因素所致。腫瘤分子標(biāo)志物作為反映腫瘤存在于機(jī)體內(nèi)具體情況的重要觀察指標(biāo)，在健康人體內(nèi)可能本不存在，而在惡性腫瘤患者的機(jī)體內(nèi)或腫瘤組織中，可以檢測(cè)到較高含量，并根據(jù)含量多少反映腫瘤的惡性程度，用于判斷腫瘤發(fā)生、發(fā)展情況時(shí)具有重要價(jià)值。

p140Cap主要表達(dá)于大腦、睪丸以及富含上皮的組織如乳腺和大腸等，目前的主要通路將E-鈣粘蛋白固定在細(xì)胞膜上并抑制EGFR和Erk1/2信號(hào)傳導(dǎo)，阻斷癌細(xì)胞的分散和增殖，從而影響癌細(xì)胞的侵襲和生長[4]。在乳腺癌細(xì)胞中，p140Cap可能通過Src和Rac激活表達(dá)控制非依賴性生長，p140Cap高表達(dá)抑制體內(nèi)腫瘤生長，p140Cap低表達(dá)增加體內(nèi)腫瘤的形成。同時(shí)有學(xué)者[5]發(fā)現(xiàn)：p140Cap在乳腺癌中可作為腫瘤抑制劑，發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。并且p140Cap在大部分結(jié)腸癌細(xì)胞中高表達(dá)，少部分大腸腺瘤表達(dá)，正常組織極少表達(dá)，在大腸癌發(fā)展的過程中發(fā)揮促進(jìn)腸癌細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移和侵襲，抑制凋亡的作用[6]。

Ki-67作為一種僅在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白，是目前檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)之一，并且其陽性表達(dá)可隨腫瘤分化程度降低或臨床分期增高而升高，同時(shí)Ki-67可能不僅與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，還與浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究癌組織Ki-67陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，且隨癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度增加呈增強(qiáng)趨勢(shì)，與之前研究相似，均證實(shí)了p140Cap、Ki-67和膀胱尿路上皮癌的相關(guān)性。

通過本研究，p140Cap表現(xiàn)為癌基因的特性，可能在膀胱癌的發(fā)展中發(fā)揮促癌作用，抑制凋亡，為預(yù)測(cè)膀胱癌預(yù)后的一個(gè)新的分子標(biāo)志物。p140Cap、Ki-67兩者表達(dá)成正相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)二者有助于膀胱尿路上皮癌發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]何小龍，朱海琴，高漓.經(jīng)典Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路在膀胱癌發(fā)生與發(fā)展中的作用研究進(jìn)展[J].廣西醫(yī)學(xué).2016，38（06）：838-41.

[2]許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229—231.

[3]伍季，茍欣，李云祥.聯(lián)合檢測(cè)ΔNp63、Ki-67和VEGF與膀胱移行細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2010;39（22）：3056-8.

[4]Sharma N， Repetto D， Aramu S， Grasso S， Russo I， Fiorentino A， et al. Identification of two regions in the p140Cap adaptor protein that retain the ability to suppress tumor cell properties[J]. American journal of cancer research. 2013，3（3）：290-301.

[5]童輝.p140Cap在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2018，25（29）：52-54.陸?zhàn)┙埽?，黃水平.基因表達(dá)對(duì)膀胱癌生存結(jié)局的預(yù)測(cè)：稀疏與混合Cox模型的實(shí)證比較研究[J].中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)，2022，39（1）：25-30.DOI：10.3969/j.issn.1002-3674.2022.01.005.

[6]馬鋒.p140Cap在結(jié)直腸癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2014.

基金項(xiàng)目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(huì)自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（No.Z20191091）