王現(xiàn)玲 孫吏聰 郭培云 呂艷麗

近年來(lái)，口腔癌患病率逐年增加，尤以年輕人居多，由于口腔癌早期癥狀不太明顯，被臨床發(fā)現(xiàn)時(shí)往往確診為中晚期，導(dǎo)致患者生存率不高[1]。因此，早期診斷對(duì)改善口腔癌患者的生存率具有重要意義。中期因子(midkine，MK)是1988年Kadomatsu等發(fā)現(xiàn)的肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，可以修復(fù)創(chuàng)傷，加快神經(jīng)生長(zhǎng)，增強(qiáng)纖維溶酶活性[2]。有研究報(bào)道[3]，MK在腎癌患者中的表達(dá)高于良性病變患者，可以提高腎癌的臨床診斷準(zhǔn)確率。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是1981年Termine等分離提純的細(xì)胞基質(zhì)蛋白，在血管新生、組織修復(fù)、細(xì)胞遷移等方面發(fā)揮重要作用[4]。已有研究證實(shí)，SPARC在多種惡性腫瘤中存在高表達(dá)，但在口腔癌的相關(guān)報(bào)道較少[5]。本研究探討口腔癌組織MK、SPARC表達(dá)量與臨床病理及預(yù)后轉(zhuǎn)歸的關(guān)系，旨在為口腔癌的早期診斷給出有價(jià)值的參考指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2016年3月至2017年10月行手術(shù)切除的口腔癌標(biāo)本組織84例，另取癌旁正?？谇唤M織作為對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理及組織學(xué)檢查確診為口腔癌；②年齡大于18周歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并臟器疾病；②合并全身慢性疾病；③其他惡性腫瘤；④精神類疾病；⑤手術(shù)前沒有進(jìn)行過(guò)化療。入選患者中男性46例，女性38例；年齡28～79歲，平均(64.32±5.82)歲；癌旁正常口腔組織距離腫瘤邊緣5 cm以上，經(jīng)病理證實(shí)無(wú)腫瘤浸潤(rùn)。

1.2 方法

對(duì)MK、SPARC進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，操作嚴(yán)格按照試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行。(1)在光鏡(×400)下，MK陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞膜/質(zhì)中觀察到清晰的棕黃色顆粒。隨機(jī)選取10個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)15%以上為高表達(dá)，小于15%為低表達(dá)[6]。(2)采用半定量積分法判定SPARC結(jié)果，SPARC陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間質(zhì)呈黃色。以染色強(qiáng)度計(jì)分：棕褐色3分，棕黃色2分，淺黃色1分，無(wú)色0分。在光鏡(×400)下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分比>75%為4分，>50%～75%為3分，>10%～50%為2分，≤10%為1分，陰性為0分。兩項(xiàng)的乘積大于或等于3分，為免疫組化陽(yáng)性，反之陰性[7]。

1.3 隨訪

于術(shù)后通過(guò)電話詢問(wèn)、門診復(fù)診等方式隨訪，統(tǒng)計(jì)患者的死亡率，以患者死亡為觀察終點(diǎn)，隨訪截止時(shí)間是2020年10月。

1.4 觀察指標(biāo)

癌組織和癌旁組織中MK和SPARC的表達(dá)差異，MK和SPARC表達(dá)水平與臨床病理特征以及患者3年生存率的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組組織中MK和SPARC表達(dá)情況比較

口腔癌組織中MK的高表達(dá)率為52.38%(44/84)，高于癌旁組織的2.38%(2/84)(χ2=52.807,P<0.001)；SPARC的陽(yáng)性表達(dá)率為40.48%(34/84)，低于癌旁組織的65.48%(55/84)(χ2=10.537,P=0.001)。

2.2 癌組織中MK、SPARC表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

MK在分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的口腔癌組織中，高表達(dá)率高于分化程度高、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的口腔癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑的口腔癌組織中無(wú)明顯差異(P>0.05)；SPARC在分化程度低、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的口腔癌組織中，陽(yáng)性率高于分化程度高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的口腔癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑的口腔癌組織中無(wú)明顯差異(P>0.05)。見表1。

表1 MK、SPARC表達(dá)水平與口腔癌臨床病理的關(guān)系(例，%)

2.3 不同MK和SPARC表達(dá)水平與患者預(yù)后關(guān)系

對(duì)84例口腔癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪36個(gè)月，以患者口腔癌復(fù)發(fā)死亡為觀察終點(diǎn)，死亡45例，3年總生存率是46.43%(39/84)。MK高、低表達(dá)者3年生存率分別是38.64%(17/44)、55.00%(22/40)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.095，P=0.043)，見圖1。SPARC陰、陽(yáng)性患者3年生存率分別是22.00%(11/50)、82.35%(28/34)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.638，P<0.001)，見圖2。

圖1 不同MK表達(dá)口腔癌患者生存曲線圖

圖2 不同SPARC表達(dá)口腔癌患者生存曲線圖

3 討論

口腔癌多發(fā)于頭頸部，與患者吸煙飲酒、局部刺激、病毒入侵等因素有關(guān)，目前，還沒有研究報(bào)道給出明確的發(fā)病機(jī)制[8]。MK是肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子家族中的一員，名稱是由妊娠中期首字母與腎臟英文首字母的合成，最早在小鼠胚胎瘤細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)[9]。有研究指出，MK與腫瘤的發(fā)展關(guān)系密切。正常組織中MK低表達(dá)或幾乎不表達(dá)，而在已有的文獻(xiàn)報(bào)道中，大腸癌、宮頸癌、肝癌、卵巢癌等癌組織中均呈現(xiàn)高表達(dá)[10]。研究結(jié)果顯示，與癌旁組織相比，口腔癌組織中MK的高表達(dá)率更高；且在分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的口腔癌組織中，MK的高表達(dá)率更高，提示MK參與了口腔癌的發(fā)生和發(fā)展，有望成為口腔癌早期診斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。錢濤等[11]研究表明，MK高表達(dá)率在肝內(nèi)膽管癌腫瘤組織中表達(dá)更高，且表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期有關(guān)；研究結(jié)果與其一致。MK可通過(guò)誘導(dǎo)增加交感神經(jīng)元的數(shù)量，促進(jìn)神經(jīng)母腫瘤細(xì)胞的發(fā)生；還可以上調(diào)Notch信號(hào)通路相關(guān)蛋白，促進(jìn)口腔癌細(xì)胞的增殖與遷移，進(jìn)而促進(jìn)口腔癌組織的生長(zhǎng)與分化。MK生存曲線圖顯示，MK高表達(dá)口腔癌患者的生存率低于低表達(dá)者，與方慧英等[12]研究結(jié)論基本一致，提示MK與口腔癌預(yù)后關(guān)系密切。

SPARC是由成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等不同類別細(xì)胞分泌的糖蛋白，主要位于細(xì)胞外基質(zhì)中，可作用于細(xì)胞基質(zhì)，使其成分和結(jié)構(gòu)發(fā)生變化來(lái)阻斷基質(zhì)合成過(guò)程，同時(shí)可促進(jìn)間質(zhì)降解酶、膠原酶等多種蛋白酶的合成，在血管生成、腫瘤細(xì)胞表達(dá)中發(fā)揮作用[13]。SPARC在腫瘤組織中的表達(dá)呈兩級(jí)分化，在有些癌組織中低表達(dá)甚至幾乎不表達(dá)，而在部分癌組織中高表達(dá)，如前列腺癌、肺癌、黑色素瘤等。張書勤等[14]研究發(fā)現(xiàn)，SPARC在乳腺癌腫瘤組織中高表達(dá)，具有促癌作用。在細(xì)胞外基質(zhì)中，SPARC可以降解基質(zhì)蛋白，破壞細(xì)胞外基質(zhì)的屏障保護(hù)功能，有助于腫瘤細(xì)胞遷移。此外，SPARC還能通過(guò)增加基底膜溶解產(chǎn)生的鈣離子結(jié)合肽，促進(jìn)生成腫瘤血管，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的侵襲能力和轉(zhuǎn)移過(guò)程。本研究SPARC的表達(dá)結(jié)果與其相反。研究中，與癌旁組織相比，口腔癌組織中SPARC的陽(yáng)性表達(dá)率更低；且在分化程度高、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的口腔癌組織中，SPARC的陽(yáng)性表達(dá)率更高，提示SPARC參與了口腔癌的發(fā)生和發(fā)展，有望成為口腔癌早期診斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。SPARC在口腔癌中具有抑癌效果，作用機(jī)制有3個(gè)方面：(1)可以抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-7等腫瘤細(xì)胞因子的表達(dá)，減少腫瘤血管生成；(2)作用于內(nèi)皮細(xì)胞DNA的合成過(guò)程，從而限制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)；(3)提高腫瘤細(xì)胞在放、化療中的敏感性，有助于加速腫瘤細(xì)胞凋亡。生存分析顯示，SPARC陽(yáng)性患者的生存期低于陰性患者，提示SPARC陽(yáng)性表達(dá)可以提高口腔癌患者的生存率。

綜上所述，MK和SPARC在口腔癌組織中表達(dá)水平比癌旁組織中更高。MK和SPAR在口腔癌組織中表達(dá)水平均與分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)；生存分析顯示，MK低表達(dá)和SPARC陽(yáng)性的口腔癌患者生存率更高。MK和SPARC可以作為口腔癌疾病發(fā)展及預(yù)后的指標(biāo)，檢測(cè)其水平有助于臨床及時(shí)干預(yù)治療，進(jìn)而提高口腔癌患者的生存率。