孫淑媛，侯麗娜，楊桂玲，杜雨婷，趙 蕓

(1.長(zhǎng)興縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江 長(zhǎng)興 313100；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與營(yíng)養(yǎng)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021；3.杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310000)

綠盲蝽學(xué)名(Meyer-Dür)，半翅目，盲蝽科，是一種多食性害蟲，是棉花、蔬菜、果樹、牧草等多種作物上主要的害蟲之一。綠盲蝽為害葡萄主要在春季萌芽期和展葉期，主要為害嫩芽、嫩葉、花和幼果，有喜濕及趨嫩為害習(xí)性，飛翔力強(qiáng)，白天潛伏，稍受驚動(dòng)，迅速爬遷，不易被發(fā)現(xiàn)。

目前，在葡萄作物上防治綠盲蝽的登記用藥很少，僅有苦皮藤素一種，甚至在其他作物上登記防治綠盲蝽的農(nóng)藥也很少，僅有登記在棗樹上的綠盲蝽性信息素一種，生產(chǎn)使用不足，果農(nóng)存在盲目用藥現(xiàn)象。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(甲維鹽)、噻蟲嗪、啶蟲脒是生產(chǎn)上使用較多，藥效較好的幾種農(nóng)藥，然而目前這3種農(nóng)藥還沒有在葡萄上的殘留降解的研究，為了明確其在葡萄上使用的安全間隔期和膳食風(fēng)險(xiǎn)，設(shè)計(jì)試驗(yàn)開展了其在葡萄上的田間殘留試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Waters TQ-S Micro)；SPE固相萃取柱(迪馬科技，2 mL)，超純水機(jī)(UPH-II-100L，成都優(yōu)普)；分析天平(賽多利斯QUINTIX65-1CN)；乙腈(色譜純，上海星可生化有限公司)；氯化鈉(分析純，江蘇強(qiáng)盛化工有限公司)；乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)粉(分析純，天津博納艾杰爾科技有限公司)；甲酸(色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)。

甲維鹽(emamectin benzoate)標(biāo)準(zhǔn)品(96.88%，Dr.Ehrenstorfer)；噻蟲嗪(thiamethoxam)標(biāo)準(zhǔn)品(90.69%，Dr.Ehrenstorfer)；啶蟲脒(acetamiprid)標(biāo)準(zhǔn)品(99.72%，Dr.Ehrenstorfer)。2.5%甲維鹽微乳劑(成都新朝陽(yáng)作物科學(xué)有限公司)；25%噻蟲嗪水分散粒劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)；40%啶蟲脒水分散粒劑(江西中迅農(nóng)化有限公司)。

1.2 材料

葡萄品種魏可，屬歐亞種，原產(chǎn)日本。張家港市于2001年從日本引進(jìn)該品種。該品種樹勢(shì)強(qiáng)，品質(zhì)上等，上色偏淡，稍有裂果，抗病性較強(qiáng)，容易栽培，成熟后掛在樹上的貯藏期也較長(zhǎng)，適合于大棚避雨延遲栽培。

1.3 田間殘留試驗(yàn)設(shè)計(jì)

田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)依據(jù)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 788—2018 農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則。試驗(yàn)共設(shè)計(jì)4個(gè)處理，每個(gè)處理8株葡萄，處理間設(shè)置隔離帶。施藥劑量為登記劑量的最高使用劑量(制劑量)：2.5%甲維鹽微乳劑40 g·667 m噴霧使用、25%噻蟲嗪水分散粒劑4 000倍噴霧使用，40%啶蟲脒水分散粒劑3.75 g·667 m拌土撒施。施藥次數(shù)和間隔采用推薦使用的最多使用次數(shù)和最短施藥間隔，均噴霧使用3次，施藥間隔為7 d。最后一次施藥后0、1、3、7、14、21、28 d采樣，每個(gè)樣品采集時(shí)需從不少于8個(gè)藤上至少采集12串，至少1 kg。每個(gè)樣品制備2份，一份用于檢測(cè)，一份用于備份。樣品包裝后貼好標(biāo)簽，所有處理好的樣品于-20 ℃條件下保存。

1.4 樣品前處理方法

采用QuEChERS處理方法，均勻稱取10.0 g經(jīng)過勻漿的葡萄樣品，加入20 mL乙腈，8 000 r·min，渦旋1 min，再加入2 g氯化鈉、4 g無水硫酸鈉，8 000 r·min渦旋2 min，8 500×離心3 min，取1 mL上清液入QuEChERS凈化管(PAS粉)，8 000 r·min渦旋30 s，10 000 ×離心3 min，過0.22 μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣小瓶，-20 ℃保存待檢測(cè)。

1.5 色譜分析條件

1.5.1 液相色譜分析條件

ACQUITY UPL CRBEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相：0.1%甲酸水(A)和0.1%甲酸乙腈(B)，采用梯度洗脫：0～8 min，(A)∶(B)=95∶5；8～11 min，(A)∶(B)=5∶95，11～15 min，(A)∶(B)= 95∶5，運(yùn)行時(shí)間15 min。流速0.3 mL·min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量5 μL。

1.5.2 質(zhì)譜分析條件

電噴霧離子化方式(ESI)，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子掃描模式(動(dòng)態(tài)MRM)，Mass Lynx軟件用于定性和定量分析。脫溶劑氣為氮?dú)?，脫溶劑氣溫?00 ℃，干燥氣流量800 L·h，離子源溫度150 ℃，錐孔電壓70 V。噻蟲嗪定量離子對(duì)()為292.00/210.92，啶蟲脒定量離子對(duì)()為223.03/125.98，甲維鹽定量離子對(duì)()為886.42/158.06。

1.6 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法

1.6.1 慢性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法

按照國(guó)際上普遍認(rèn)可的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估原理和方法對(duì)每日攝入量的估計(jì)值(EDI)和每日允許攝入量(ADI)進(jìn)行測(cè)定。

1.6.2 急性膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法

按照國(guó)際上普遍認(rèn)可的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估原理和方法對(duì)短期攝入量的估計(jì)值(ESTI)和急性攝入風(fēng)險(xiǎn)用每日攝入量的估計(jì)值與急性參考劑量(%ARfD)。

1.6.3 農(nóng)藥毒理評(píng)估數(shù)據(jù)

農(nóng)藥的慢性參考劑量(ADI)和急性參考劑量(ARfD)綜合參照了FAO/WHO農(nóng)藥殘留聯(lián)合專家委員會(huì)(JMPR)評(píng)估報(bào)告、歐洲食品安全局(EFSA)的評(píng)估報(bào)告以及我國(guó)GB 2763—2019《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中的參考劑量。甲維鹽ADI值為0.000 5 mg·kg·d，無參考ARfD值，MRL值為0.03 mg·kg；噻蟲嗪ADI值為0.08 mg·kg·d，ARfD為0.5 mg·kg·d，MRL值為0.5 mg·kg；啶蟲脒ADI值為0.07 mg·kg·d，ARfD為0.1 mg·kg·d，MRL值為2 mg·kg。

1.6.4 葡萄消費(fèi)量及人群體重?cái)?shù)據(jù)

水果消費(fèi)量數(shù)據(jù)參照2012年全球環(huán)境監(jiān)測(cè)系統(tǒng)/食品污染監(jiān)測(cè)與評(píng)估規(guī)劃(GEMS/Food)公布的消費(fèi)組G09(東亞地區(qū)包括中國(guó)在內(nèi))的水果消費(fèi)數(shù)據(jù)，葡萄的大份餐消費(fèi)數(shù)據(jù)參照FAO/WHO公布的國(guó)際估計(jì)短期攝入量(IESTI)計(jì)算器中中國(guó)人群的大份餐消費(fèi)量，見表1。人群體重?cái)?shù)據(jù)依《第四次中國(guó)總膳食研究》整理，8～12歲兒童平均體重為33.1 kg，20～50歲成人平均體重為63.0 kg。

表1 不同人群的水果消費(fèi)量

1.6.5 情景假設(shè)

本次評(píng)估選擇20～50歲的成年人作為一般人群，選擇8～12歲兒童作為敏感人群。人群攝入農(nóng)藥殘留的來源分2種假設(shè)，分別是：情景Ⅰ，消費(fèi)的所有葡萄均有相當(dāng)于試驗(yàn)農(nóng)藥在安全間隔期(14 d，參考蔬菜)的殘留量；情景Ⅱ，消費(fèi)的所有水果均有相當(dāng)于試驗(yàn)農(nóng)藥在安全間隔期(14 d，參考蔬菜)的殘留量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配制成1 000 mg·L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)配液。然后用色譜乙腈梯度稀釋配得0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.4mg·L的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。在1.5節(jié)液相-質(zhì)譜條件下，分別以噻蟲嗪、啶蟲脒、甲維鹽進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)()，色譜峰面積為縱坐標(biāo)()繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖1所示，在0.01～0.4 mg·L范圍內(nèi)，噻蟲嗪的線性回歸方程為=2 537.22-1 859.68，=0.999 4；啶蟲脒的線性回歸方程為=9 146.14-1 351.93，=0.999 5；甲維鹽的線性回歸方程為=47 911.5+46 446.4，=0.999 0。噻蟲嗪、啶蟲脒、甲維鹽3種農(nóng)藥的進(jìn)樣質(zhì)量濃度與色譜峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，均滿足定量分析要求。檢出限為0.01 mg·L。

2.2 方法的準(zhǔn)確度、精密度與定量限

按照1.4節(jié)前處理方法在空白對(duì)照樣品中分別添加質(zhì)量濃度分別為0.01、0.05、0.1 mg·kg的噻蟲嗪、啶蟲脒、甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加回收率結(jié)果如表2所示，甲維鹽的平均回收率范圍為84.1%～85.8%，噻蟲嗪的平均回收率范圍為95.0%～115.6%，啶蟲脒的回收率范圍為85.8%～94.3%，均滿足NY/T 788《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》對(duì)農(nóng)藥殘留分析的要求。定量限均為0.01 mg·kg。

表2 試驗(yàn)農(nóng)藥的平均添加回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 田間試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，所選3種農(nóng)藥甲維鹽、噻蟲嗪、啶蟲脒在葡萄中的降解均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，殘留動(dòng)態(tài)曲線如圖1所示。甲維鹽在葡萄中的一級(jí)降解動(dòng)力學(xué)方程為=1.7743-0.106，=0.732 1，降解速率常數(shù)為0.106，降解半衰期為6.5 d，降解較快。噻蟲嗪在葡萄中的一級(jí)降解動(dòng)力學(xué)方程為=78.847-0.01，=0.618 7，降解速率常數(shù)為0.010，降解半衰期為69.3 d，由于相關(guān)系數(shù)較小，擬合度較差，因此半衰期計(jì)算值可能與實(shí)際降解情況有一定的誤差，但整體看來噻蟲嗪在葡萄中降解很慢。啶蟲脒在葡萄中的一級(jí)降解動(dòng)力學(xué)方程為=69.476-0.023，=0.752 8，降解速率常數(shù)為0.023，降解半衰期為30.1 d，降解相對(duì)較慢。目前國(guó)內(nèi)還沒有甲維鹽在葡萄或水果中殘留動(dòng)態(tài)的研究報(bào)道，在蔬菜、水稻、煙葉中有少量的研究，張侃侃等在研究了甲維鹽在水稻植株、稻米、稻田水樣及土壤中的消解動(dòng)態(tài)和最終殘留，結(jié)果表明，甲維鹽的半衰期均在2 d左右，在施藥間隔7、14、21 d采收的稻米中均未檢出。張怡等研究了噻蟲嗪在釀酒葡萄果實(shí)中的殘留動(dòng)態(tài)，降解半衰期為7.4 d。啶蟲脒在葡萄中的殘留動(dòng)態(tài)的研究較少。王鵬飛等研究了啶蟲脒在葡萄上防治斑衣葉蟬時(shí)的殘留動(dòng)態(tài)，結(jié)果表明，啶蟲脒在葡萄著色期至成熟期果實(shí)上的降解半衰期為4.14～5.60 d。噻蟲嗪和啶蟲脒的降解半衰期與本研究差別較大，可能與葡萄品種、試驗(yàn)溫度、露天和大棚試驗(yàn)有關(guān)，還需進(jìn)一步的試驗(yàn)研究驗(yàn)證。

圖1 葡萄中甲維鹽、噻蟲嗪和啶蟲脒的殘留動(dòng)態(tài)曲線

2.4 膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

分別以各農(nóng)藥施藥間隔期14 d的殘留值計(jì)算相應(yīng)的慢性風(fēng)險(xiǎn)、急性風(fēng)險(xiǎn)與全膳食風(fēng)險(xiǎn)，各農(nóng)藥的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果如表3所示。甲維鹽在降解14 d的殘留值為0.000 2 mg·kg，按照1.6節(jié)中的計(jì)算方法和參數(shù)計(jì)算其慢性風(fēng)險(xiǎn)為0.001%，全膳食風(fēng)險(xiǎn)為32.57%。噻蟲嗪在降解14 d的殘留值為0.066 5 mg·kg，其慢性風(fēng)險(xiǎn)為0.000 004%，急性風(fēng)險(xiǎn)為0.120%，全膳食風(fēng)險(xiǎn)為6.68%。啶蟲脒在降解14 d的殘留值為0.047 9 mg·kg，其慢性風(fēng)險(xiǎn)為0.002%，急性風(fēng)險(xiǎn)為0.434%，全膳食風(fēng)險(xiǎn)為7.58%。數(shù)據(jù)表明，所選3種農(nóng)藥的慢性風(fēng)險(xiǎn)、急性風(fēng)險(xiǎn)和全膳食風(fēng)險(xiǎn)均小于100%，按照推薦的使用方法所選3種試驗(yàn)農(nóng)藥使用14 d后膳食風(fēng)險(xiǎn)較小，且3種農(nóng)藥在使用14 d后均可降解至MRL值以下，均可推薦使用。安全間隔期建議設(shè)置為14 d。

表3 試驗(yàn)農(nóng)藥的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估參數(shù)

3 結(jié)論與建議

綠盲蝽是近年來葡萄生產(chǎn)上的重要害蟲，然而在葡萄作物上登記的防治綠盲蝽的殺蟲劑僅有一種噻蟲嗪，生產(chǎn)使用不足，果農(nóng)存在盲目用藥現(xiàn)象。試驗(yàn)所選3種農(nóng)藥甲維鹽、噻蟲嗪、啶蟲脒在葡萄中的降解均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，且在使用14 d后均可降解至MRL值以下。3種農(nóng)藥在降解14 d的殘留量的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明，3種農(nóng)藥的慢性風(fēng)險(xiǎn)、急性風(fēng)險(xiǎn)和全膳食風(fēng)險(xiǎn)均小于100%；按照推薦的使用方法所選3種試驗(yàn)農(nóng)藥使用14 d后膳食風(fēng)險(xiǎn)較小，可以推薦使用于綠盲蝽的防治，推薦安全間隔期為14 d。