畢夢凡，張克霄，常娟，王平，王利軍，劉超齊，楊明凡，姚毅沛，朱湲湲，尹清強

（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河南鄭州 450046）

植物性飼料原料具有安全、毒副作用較小、耐藥性低等特點。植物性飼料原料除了含糖類、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)等常規(guī)養(yǎng)分外，還含有生物堿、有機酸、多糖、皂甙等多種生物活性物質(zhì)（高鐸等，2021）。利用益生菌對植物性飼料原料進行發(fā)酵，能夠?qū)⑵渲械幕钚晕镔|(zhì)最大程度釋放出來，更利于機體的吸收和利用，從而減少植物性飼料原料的使用量，避免浪費，節(jié)約資源（Kim等，2018；楊迪等，2014）。Lei 等（2018）研究表明，在生長育肥豬日糧中添加屎腸球菌發(fā)酵毛蒿和刺五加可提高生長育肥豬平均日增重、平均日采食量以及養(yǎng)分消化率，并對背最長肌的脂肪酸組成有積極的影響。Huang等（2020）在肉雞日糧中添加枯草芽孢桿菌發(fā)酵的植物性飼料原料，提高了肉雞的生長性能。Wang等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加益生菌發(fā)酵的植物性飼料原料濃縮液，能夠顯著提高澤西牛的體重、產(chǎn)奶性能、免疫力及耐藥性。Shan 等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，將枯草芽孢桿菌和釀酒酵母聯(lián)合發(fā)酵的山楂、黨參等植物性飼料原料添加到荷斯坦奶牛日糧中可以改善熱應(yīng)激條件下奶牛的產(chǎn)奶性能和免疫功能。發(fā)酵植物性飼料原料在豬、雞、牛中的應(yīng)用研究已有諸多報道，而在羊上卻鮮有研究。因此，本試驗旨在探究發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊生長性能、血清生化指標(biāo)、瘤胃發(fā)酵參數(shù)以及消化酶活性的影響，為發(fā)酵植物性飼料原料在肉羊?qū)嶋H生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗所用發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料由河南德鄰生物制品有限公司提供，采用固態(tài)發(fā)酵，山楂、麥芽、陳皮、大白按干物質(zhì)比例8：8：3：1 制成復(fù)合植物性飼料原料，調(diào)節(jié)含水量至25%，培養(yǎng)基混合均勻后121 ℃高壓20 min。選擇枯草芽孢桿菌（活菌數(shù)1.0×109cfu/g）、干酪乳桿菌（活菌數(shù)1.0×108cfu/g）及釀酒酵母（活菌數(shù)1.0×107cfu/g）三種益生菌等比例制成復(fù)合菌，復(fù)合菌在發(fā)酵原料中的添加量為3%（m/m），混合均勻后在37 ℃恒溫箱發(fā)酵3 d。

1.2 試驗設(shè)計 選擇78 只3 月齡左右、體重（17.73±0.11）kg 且健康狀況良好的育肥湖羊隨機分為2組，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)13 只羊（均為公羔）。對照組飼喂全價顆粒飼糧，試驗組在全價顆粒飼糧中添加2 kg/t 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料。全價顆粒飼糧按照我國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 816-2004《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》和場區(qū)生產(chǎn)實踐配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 全價顆粒飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)試驗于2020 年9～ 11 月在河南省漯河市悅美禾農(nóng)牧有限公司湖羊養(yǎng)殖場進行，試驗期60 d。每天在06：00 和16：00 進行飼喂，自由采食，自由飲水，其他飼養(yǎng)管理按養(yǎng)殖場規(guī)定執(zhí)行。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長性能的測定 試驗開始第1 天與第60 天早晨空腹稱重，以重復(fù)為單位記錄每天飼喂量及剩料量，計算ADG、ADFI 及F/G。

1.4.2 養(yǎng)分表觀消化率的測定 試驗結(jié)束前3 天開始每組隨機選擇3 只試驗羊（每個重復(fù)1 只羊）進行消化試驗，于每日06：00 和16：00 飼喂后采集全部糞樣，并記錄采食量。采集鮮糞后加入10%的硫酸固氮，混勻后按總重的5%采樣，連續(xù)采集3 d，將采集的所有糞樣以重復(fù)為單位混勻，于65 ℃條件下烘干后置于室溫回潮24 h，裝于自封袋中備用，同時采集飼料樣品。飼糧與糞樣中粗蛋白質(zhì)（CP）、粗脂肪（EE）、鈣（Ca）、磷（P）、中性洗滌纖維（NDF）及酸性洗滌纖維（ADF）分別采用GB/T 6432-2018（凱氏定氮法）、GB/T 6433-2006、GB/T 6436-2018、GB/T 6437-2018以及范氏（Van Soest等，1991）洗滌纖維分析法測定。

養(yǎng)分表觀消化率/%=（攝入養(yǎng)分量－排出養(yǎng)分量）/攝入養(yǎng)分量×100。

1.4.3 血清生化指標(biāo)的測定 試驗第60 天早上，每個重復(fù)隨機挑選2 只羊，空腹頸靜脈采血5 mL，置于10 mL 離心管中，3500 r/min、4 ℃條件下離心15 min，分離血清，置于-20 ℃冰箱保存。血清生化指標(biāo)采用BECKMAN COULTER AU5800 全自動生化分析儀測定。

1.4.4 瘤胃發(fā)酵參數(shù)及消化酶活性的測定 試驗結(jié)束當(dāng)天，每個重復(fù)隨機挑選2 只羊，使用瘤胃液采集管空腹采集瘤胃液，4 層紗布過濾后分裝于50 mL 離心管中，置于-20 ℃冰箱保存，用于測定pH、氨態(tài)氮（NH3-N）、揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的含量以及淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶活性。瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸含量采用離子色譜法（牟豪杰等，2009）測定，氨態(tài)氮含量采用苯酚-次氯酸鈉比色法（Beoderick等，1980）測定，淀粉酶活采用DNS 法（劉賀紅等，2008），定義為：1 min 產(chǎn)生1 mg 葡萄糖所用酶量為一個酶活單位（U）。蛋白酶活采用SB/T10317-1999 測定，定義為：在40 ℃下，每分鐘產(chǎn)生1 μg 酪氨酸定義為1 個蛋白酶活力單位（U）。纖維素酶活采用羧甲基纖維素酶活測定方法（劉德海等，2002），定義為：1 h 水解生成1 mg葡萄糖的酶量為1 個酶活力單位（U）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 試驗數(shù)據(jù)使用Excel 2016 進行整理，采用SPSS 26.0 軟件對所測數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（One-way ANOVA），結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差” 表示，以P <0.05 和P <0.01分別表示差異顯著和差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊生長性能的影響 由表2 可知，在全價顆粒飼糧中添加發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊的平均日增重、平均日采食量及料肉比均無顯著影響（P>0.05）。

表2 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊生長性能的影響

2.2 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 由表3 可知，試驗組粗脂肪、Ca、NDF 和ADF 的消化率均高于對照組，其中NDF 和ADF 的消化率分別極顯著提高了4.58%和16.10%（P <0.01）；粗蛋白質(zhì)和P 的消化率對照組與試驗組差異不顯著（P >0.05）。

表3 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

2.3 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊血清生化指標(biāo)的影響 由表4 可知，試驗組血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）及球蛋白（GLO）含量均高于對照組，且GLO 含量顯著提高了29.20%（P<0.05）；其他指標(biāo)對照組與試驗組差異不顯著（P>0.05）。

表4 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊血清生化指標(biāo)的影響

2.4 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)及消化酶活性的影響 由表5 可知，試驗組pH 極顯著降低了4.43%（P <0.01）；NH3-N含量以及異丁酸含量分別顯著提高了67.63%、189.24%（P <0.05）；試驗組淀粉酶、蛋白酶及纖維素酶活性分別極顯著提高了109.03%、123.47%及140.89%（P <0.01）；揮發(fā)性脂肪酸乙酸、丙酸及丁酸含量對照組與試驗組差異不顯著（P >0.05）。

表5 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)及消化酶活性的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊生長性能的影響 植物性飼料原料中的主要生物活性成分為黃酮類、萜類、有機酸類、多糖類等。Zhou等（2015）研究表明，在飼糧中添加發(fā)酵銀杏葉能夠提高斷奶仔豬的平均日增重及末重，提高生長性能。Qiao 等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加發(fā)酵黃芪可顯著降低肉雞的料重比。張瀟屹等（2021）研究表明，添加2%的發(fā)酵山楂、厚樸等植物性飼料原料可以顯著提高肉雞的生長性能。山楂、麥芽和陳皮這類植物性飼料原料具有增加食欲、改善飼料的適口性、消食、健胃的功能，可以促進動物發(fā)育和生長。蘇家宜（2017）將山楂、陳皮、麥芽等組成的發(fā)酵藥渣添加到斷奶仔豬日糧中對動物的生長性能并未產(chǎn)生顯著的影響，但提高了仔豬的抗氧化性能。徐琪翔等（2021）、Kim 等（2014）、Lan 等（2017）及Ahmed（2016）等關(guān)于不同的植物性飼料原料對動物生長性能的研究結(jié)果也并不完全相同，本試驗中，與對照組相比，試驗組的平均日增重在數(shù)值上有所增加，但并不顯著，這可能與植物性飼料原料在瘤胃中的消化有關(guān)，具體原因有待進一步研究。

3.2 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 瘤胃在反芻動物營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收中起著重要的作用，飼料中大部分可消化的營養(yǎng)物質(zhì)都在瘤胃內(nèi)被消化吸收，日糧中添加發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料可以改變瘤胃內(nèi)環(huán)境，從而影響反芻動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收（郝建祥，2011）?？莶菅挎邨U菌可以抑制動物體內(nèi)需氧有害菌的生長，同時自身合成淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纖維素酶，幫助動物降解纖維素、果膠等大分子物質(zhì)，提高飼料利用率（王少歡，2019）。植物中的類黃酮化合物可以提高綿羊干物質(zhì)、有機物、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維消化率，從而提高反芻動物能量代謝（Chen等，2015）。本試驗結(jié)果表明，在全價顆粒飼糧中添加發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料能顯著提高酸性洗滌纖維及中性洗滌纖維的養(yǎng)分表觀消化率。這可能是由于發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料含有的黃酮類生物活性物質(zhì)或有益菌及其代謝酶改變了湖羊瘤胃內(nèi)微生物菌群活性及消化酶活性，提高了纖維素分解菌及纖維素酶的含量從而影響了飼料的消化率。

3.3 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)能夠反映動物機體新陳代謝、營養(yǎng)物質(zhì)利用沉積、機體健康狀況和組織器官機能變化（Zhou等，2015）。因此，評估動物機體的營養(yǎng)狀況，可以分析其血清相關(guān)代謝產(chǎn)物的濃度。血清中的TP、ALB 及GLO 這三個指標(biāo)可以反映機體對蛋白質(zhì)的吸收利用狀況和機體自身免疫狀況（李昊，2019）。本試驗結(jié)果表明，與對照組相比試驗組血清中GLO 含量顯著提高，說明發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料可以提高育肥湖羊的免疫狀況。UREA 作為蛋白質(zhì)代謝的中末產(chǎn)物，可反映動物機體對蛋白的利用狀況（汪水平等，2009），試驗組血清中UREA 與對照組差異不顯著，表明發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料的添加對動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝沒有抑制作用。

3.4 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料對育肥湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)及消化酶活性的影響 在評價反芻動物瘤胃內(nèi)環(huán)境時，將瘤胃液pH、NH3-N 含量以及揮發(fā)性脂肪酸作為主要參考指標(biāo)。瘤胃pH 穩(wěn)定是瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的基礎(chǔ)，也是瘤胃正常發(fā)揮作用的保證（簡仕燕等，2020；李孟偉等，2020）；NH3-N是蛋白質(zhì)代謝的中間產(chǎn)物，是瘤胃微生物蛋白合成的主要成分之一（Wallace等，1994）；揮發(fā)性脂肪酸包括乙酸、丙酸、異丁酸及丁酸等。周文章（2016）研究發(fā)現(xiàn)，添加山楂、陳皮等植物性飼料原料進行體外瘤胃發(fā)酵時，可顯著降低瘤胃pH，增加TVFA 濃度。Deng 等（2007）研究表明，在肉牛飼糧中添加植物性飼料原料可以提高瘤胃液中異丁酸含量。在本試驗中，各組羊瘤胃液pH 總體偏高，可能與飼喂的顆粒料中添加的小蘇打有關(guān)，但試驗組瘤胃液pH 顯著降低，異丁酸含量顯著提高，這可能是因為添加發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料后，促進了瘤胃內(nèi)微生物菌群對纖維的分解，從而產(chǎn)生的有機酸增多，降低了瘤胃pH，有利于瘤胃的健康。

胃腸消化酶來源于胃腸道微生物、機體分泌和外界攝入，是生物機體胃腸內(nèi)重要組成部分（賀璐等，2017）。陳國順等（2012）研究表明，日糧中添加山楂、黃芪等復(fù)合植物性飼料原料可顯著提高仔豬空腸胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。本試驗結(jié)果表明，發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料能顯著提高瘤胃內(nèi)NH3-N 含量以及蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶活性，這可能是由于發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料改變了瘤胃液pH，為消化酶的反應(yīng)提供了有利條件，從而提高了消化酶的活性（刁慧等，2013）。添加發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料組瘤胃液氨態(tài)氮含量顯著增加，也說明蛋白質(zhì)的分解作用增加，這也與瘤胃蛋白酶活的增加具有一定的關(guān)系。

4 結(jié)論

在全價顆粒飼糧中添加2 kg/t 發(fā)酵復(fù)合植物性飼料原料可以提高育肥湖羊?qū)w維的消化率；有助于提高血清中球蛋白和瘤胃液中異丁酸含量，降低瘤胃液pH，提高消化酶活性，從而改善瘤胃內(nèi)環(huán)境。