雒 猛，邵 維，李艷婷，陳富強(qiáng)，王 忠△，劉金玲1,，楚中華

1.山東省臍帶血造血干細(xì)胞庫(kù)，山東濟(jì)南 250102；2.山東省齊魯干細(xì)胞工程有限公司，山東濟(jì)南 250102;3.山東省血液中心，山東濟(jì)南 250014；4.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院輸血科，山東濟(jì)南 250012

人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒(HTLV)是20世紀(jì)80年代初發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)人類反轉(zhuǎn)錄病毒，主要包括HTLV-Ⅰ型和HTLV-Ⅱ型。HTLV-Ⅰ型在加勒比海地區(qū)、南美東北部、日本西南部及非洲的某些地區(qū)流行。HTLV-Ⅱ型在美國(guó)黑人、印第安人及歐洲等地的靜脈吸毒者中流行，我國(guó)是一個(gè)HTLV低流行國(guó)家，有研究顯示在福建、廣東、廣西和浙江等沿海地區(qū)HTLV流行率較高[1-2]。HTLV是成人T淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤(ATL)的病原體，也可引起HTLV-Ⅰ型相關(guān)性脊髓病/熱帶痙攣性下肢輕癱的慢性炎癥性疾病[3-5]。HTLV主要通過血液傳播、性傳播和母嬰傳播[6-7]。2015年原國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)辦公廳下發(fā)了《關(guān)于血站做好人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒監(jiān)測(cè)的通知》，目前我國(guó)對(duì)HTLV的篩查及分析研究主要關(guān)注于在采供血機(jī)構(gòu)的獻(xiàn)血者中血清抗體篩查和母嬰垂直傳播的母乳喂養(yǎng)傳播情況[8-15]。針對(duì)母嬰垂直傳播的胎盤傳播方式的報(bào)道甚少，本研究通過檢測(cè)儲(chǔ)存臍帶血的產(chǎn)婦靜脈血及有反應(yīng)性母血對(duì)應(yīng)的臍帶血HTLV抗體，分析其結(jié)果，為HTLV的母嬰傳播方式積累資料。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 2020年8月5日至2020年9月1日于山東省臍帶血造血干細(xì)胞庫(kù)采集的臍帶血及對(duì)應(yīng)的母血標(biāo)本12 803份。

1.2儀器與試劑 全自動(dòng)加樣儀(瑞士，Hamilton Micro lab star)，全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀(瑞士，Hamilton Micro lab Fame 24/20)。HTLV抗體檢測(cè)試劑盒A[酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，北京萬泰中聯(lián)科技股份有限公司]，HTLV抗體檢測(cè)試劑盒B[ELISA，艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司]，試劑均合格且在有效期內(nèi)使用。

1.3方法 所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行。依據(jù)說明書的要求設(shè)置臨界值，當(dāng)檢測(cè)孔的吸光度值≥臨界值時(shí)為HTLV抗體有反應(yīng)性，當(dāng)檢測(cè)孔的吸光度值<臨界值時(shí)，為HTLV抗體無反應(yīng)性。采用試劑A檢測(cè)母血有反應(yīng)性時(shí)，采用試劑A和B同時(shí)對(duì)母血與對(duì)應(yīng)的臍帶血進(jìn)行雙孔復(fù)查，復(fù)查的4孔只要有1孔為反應(yīng)性，則檢測(cè)結(jié)果為有反應(yīng)性。復(fù)查有反應(yīng)性的母血與對(duì)應(yīng)的臍帶血標(biāo)本送至國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心使用核酸檢測(cè)(NAT)法和蛋白印跡(WB)法進(jìn)一步確認(rèn)。

2 結(jié) 果

12 803份母血標(biāo)本，經(jīng)ELISA初篩5份有反應(yīng)性，母血ELISA初篩有反應(yīng)性率為0.039%(5/12 803)；初篩有反應(yīng)性的5份母血對(duì)應(yīng)的臍帶血，經(jīng)ELISA篩查3份有反應(yīng)性，母血ELISA初篩有反應(yīng)性對(duì)應(yīng)臍帶血篩查有反應(yīng)性率為60%；經(jīng)確認(rèn)試驗(yàn)，ELISA初篩有反應(yīng)性的5份母血標(biāo)本，母血確認(rèn)陽(yáng)性1份，母血不確定1份，對(duì)應(yīng)的臍帶血確認(rèn)陽(yáng)性1份，母血ELISA初篩有反應(yīng)性確認(rèn)陽(yáng)性率為20%；所有母血標(biāo)本中，確認(rèn)陽(yáng)性率為0.007 8%(1/12 803)，見表1。

表1 5份HTLV抗體結(jié)果情況

3 討 論

ELISA具有靈敏度、特異度高，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單且易于自動(dòng)化操作等優(yōu)點(diǎn)，已成為國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)HTLV抗體篩查的首選方法。不同廠家的檢測(cè)試劑因包被的單克隆抗體、方法學(xué)、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量等因素的不同，試劑間檢測(cè)結(jié)果存在一定的差異[7]。本研究發(fā)現(xiàn)在復(fù)檢2號(hào)母血標(biāo)本和5號(hào)臍帶血標(biāo)本時(shí)，兩種試劑出現(xiàn)有反應(yīng)性和無反應(yīng)性兩種相反的結(jié)果。NAT和WB確認(rèn)陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于ELISA初篩陽(yáng)性率[8-14]。推測(cè)原因?yàn)榇嬖谂c試劑相關(guān)的假陽(yáng)性或者存在一些非特異性抗原的交叉反應(yīng)引起的假陽(yáng)性。而產(chǎn)婦作為特殊的人群，其體內(nèi)的激素等因素與普通的獻(xiàn)血者存在一定的差異，產(chǎn)婦的血液對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性或假陰性的影響，有待進(jìn)一步研究。

關(guān)于HTLV的感染情況，國(guó)內(nèi)很多學(xué)者均有報(bào)道。近10年來福建省寧德市HTLV初篩陽(yáng)性率為0.589%(61/10 352)，確認(rèn)陽(yáng)性率為0.338%(35/10 352)，福建省南平市HTLV初篩陽(yáng)性率高達(dá)0.149%(46/30 878),確認(rèn)陽(yáng)性率為0.016%(5/30 878)，廣東省深圳市HTLV初篩陽(yáng)性率為0.198%(2/1 008)，廣東省廣州市HTLV初篩陽(yáng)性率為0.105%(21/20 056)，廣東省廣州市的確認(rèn)陽(yáng)性率為0.015%(3/20 056)[1]。山東地區(qū)獻(xiàn)血者HTLV ELISA初篩陽(yáng)性率為0.053%(31/58 395)，NAT陽(yáng)性率為0.003%(2/58 395)，WB確認(rèn)陽(yáng)性率為0[8]。青島地區(qū)獻(xiàn)血者HTLV ELISA初篩陽(yáng)性率為0.027%(11/40 341)，經(jīng)確認(rèn)均為陰性[9]。北京地區(qū)獻(xiàn)血人群中 HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩陽(yáng)性率為 0.019%(26/137 833)，確認(rèn)陽(yáng)性率為 0.001 5%(2/137 833)[10]。天津地區(qū)HTLV ELISA初篩陽(yáng)性率為0.048%(8/16 791)，經(jīng)確認(rèn)全部為陰性[11]。長(zhǎng)春地區(qū)獻(xiàn)血者HTLV ELISA初篩陽(yáng)性率為0.038%(25/65 821)，確認(rèn)全部為陰性[12]。石家莊地區(qū)獻(xiàn)血者HTLV ELISA初篩陽(yáng)性率為0.061%(25/41 000)，確認(rèn)陽(yáng)性1份[13]。以上報(bào)道可以推測(cè)北方地區(qū)獻(xiàn)血者HTLV ELISA初篩陽(yáng)性率處于較低的水平，介于0.01%～0.07%，但這些報(bào)道均為對(duì)無償獻(xiàn)血者的篩查。即使在我國(guó)HTLV流行率高的福建、廣東、廣西等地區(qū)，關(guān)于HTLV的篩查也基本側(cè)重于采供血機(jī)構(gòu)，而對(duì)普通人群、高危人群、疾病患者、幼兒群體或產(chǎn)婦群體等HTLV的流行情況報(bào)道較少。本研究發(fā)現(xiàn)，山東省采集臍帶血對(duì)應(yīng)母血標(biāo)本的HTLV抗體ELISA初篩有反應(yīng)性率為0.039%，母血確認(rèn)陽(yáng)性率為0.007 8%，提示除獻(xiàn)血人群外，孕產(chǎn)婦也存在HTLV感染的可能性。

HTLV-Ⅰ型通過被感染的細(xì)胞進(jìn)行傳播，傳播途徑主要包括性傳播、血液傳播和母嬰傳播[14-16]。本研究發(fā)現(xiàn)，5份ELISA初篩陽(yáng)性的母血標(biāo)本中，HTLV確認(rèn)陽(yáng)性的母血其對(duì)應(yīng)的臍帶血篩查和確認(rèn)均為陽(yáng)性，可以看出HTLV確實(shí)可以穿過胎盤屏障進(jìn)行母嬰垂直傳播，攜帶HTLV的育齡女性，如何避免HTLV通過胎盤傳給嬰兒是值得探討的問題。

HTLV-Ⅰ型通過母乳喂養(yǎng)的傳播率為10%～25%[14]。母乳喂養(yǎng)傳播HTLV-Ⅰ的概率受母乳喂養(yǎng)時(shí)間、母乳病毒的含量等因素的影響[15]。含有HTLV病毒的乳液，經(jīng)巴氏消毒或凍融后，病毒含量會(huì)降低[16]。由于沒有相關(guān)的疫苗，也沒有預(yù)防母嬰傳播的抗反轉(zhuǎn)錄病毒的方法，因此防止母嬰傳播的有效策略僅為避免母乳喂養(yǎng)或減少母乳喂養(yǎng)時(shí)間(前提是能夠提供安全可及的替代喂養(yǎng)方式)[15]。目前HTLV的篩查還未列入醫(yī)院的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)臍帶血進(jìn)行HTLV抗體篩查，可以合理地指導(dǎo)產(chǎn)婦進(jìn)行母乳喂養(yǎng)，降低HTLV通過哺乳而傳給嬰兒的風(fēng)險(xiǎn)，防止嬰兒感染HTLV。

由于HTLV感染淋巴細(xì)胞不存在于血漿和紅細(xì)胞中，血站可以對(duì)每份血液進(jìn)行白細(xì)胞濾除來降低HTLV經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)，而臍帶血庫(kù)儲(chǔ)存的臍帶血干細(xì)胞主要來源于白細(xì)胞，這種濾除白細(xì)胞的方式顯然對(duì)臍帶血庫(kù)不適用，如何避免或降低臍帶血HTLV感染是值得研究的課題。