蒲德成， 李 虹， 蘇勝齊， 翟旭亮， 牟重寧

(1.巫溪縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會， 重慶 405899； 2.重慶市水產(chǎn)技術(shù)推廣總站， 重慶 400020； 3.西南大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院， 水產(chǎn)科學(xué)重慶市市級重點實驗室， 重慶 400716)

0 引言

【研究意義】云南盤鮈(Discogobioyunnanensis)隸屬硬骨魚綱(Osteichthyes)鯉形目(Cypriniformes)鯉科(Cyprindae)盤鮈屬(Discogobio)，分布于長江中上游和南盤江、元江等水系，為產(chǎn)區(qū)重要的小型底層經(jīng)濟魚類，營養(yǎng)價值高，味道鮮美，極具開發(fā)價值和養(yǎng)殖前景，具有重要的經(jīng)濟價值和生態(tài)價值[1-3]。受人類活動和環(huán)境變化影響，野生云南盤鮈種群數(shù)量急劇減少，因此開展云南盤鮈人工繁殖技術(shù)，對其資源保護和開發(fā)利用具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】目前，對云南盤鮈的研究主要集中在肌肉營養(yǎng)、形態(tài)學(xué)和繁殖生理等方面。云南盤鮈肌肉營養(yǎng)成分分析表明，其是一種營養(yǎng)價值極高的冷水魚類[3]；趙健蓉等[4]采用形態(tài)學(xué)、組織學(xué)及酶學(xué)方法對云南盤鮈成體消化系統(tǒng)進行研究認(rèn)為，消化系統(tǒng)特征與其以固著藻類為食有關(guān)；蔡瑞鈺等[5]探究了不同溫度對云南盤鮈仔稚魚生長及存活率的影響，建議在實際生產(chǎn)中，以20～26℃作為云南盤鮈的養(yǎng)殖溫度。有關(guān)云南盤鮈胚胎發(fā)育和成魚性腺發(fā)育及周年變化也相繼有學(xué)者研究報道[6-7]；楊琴等[8]對云南盤不同地理居群的形態(tài)變異及分化進行了系統(tǒng)研究；晏正碧等[9]通過野生云南盤鮈繁殖力初步研究發(fā)現(xiàn)，其個體自然繁殖力和種族恢復(fù)力差，建議加強資源保護；張慧芬等[10]以正交試驗法確定了云南盤鮈酶水解條件；周偉等[11]系統(tǒng)闡述云南盤鮈口吸盤的發(fā)育及功能和適應(yīng)意義?！狙芯壳腥朦c】近年來，受多種因素影響，野生云南盤鮈種群數(shù)量急劇減少，人工繁殖增殖放流是保護野生魚類資源的重要技術(shù)措施[12]，有關(guān)云南盤鮈人工繁殖技術(shù)的已有報道僅限于實驗室條件下對野生發(fā)育成熟親本的簡單催產(chǎn)[13]，尚無人工馴養(yǎng)條件下云南盤鮈繁育的系統(tǒng)研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過人工馴養(yǎng)云南盤鮈親魚，開展人工催產(chǎn)繁殖技術(shù)研究，并實施人工批量繁殖，為云南盤鮈人工繁育與保護提供技術(shù)支撐，并進一步豐富云南盤鮈人工繁殖技術(shù)資料。

1 材料與方法

1.1 親魚來源

2011—2019年陸續(xù)從重慶大寧河中上游河段收集體長為5.9～14.7 cm的野生云南盤鮈，在流水池塘中進行人工馴化培育。從2016年開始，挑選成熟個體開展催產(chǎn)劑對比篩選，并持續(xù)進行批量人工繁殖，初次參與繁殖的親魚2～5齡。

1.2 親魚培育

在巫溪縣冷水魚基地進行親魚人工培育，馴化培育池為8.0 m×2.5 m×1.2 m(長×寬×高)的標(biāo)準(zhǔn)流水魚池，池底有少量河沙和卵石。野生云南盤鮈經(jīng)過人工馴化和培育2個階段，將采集的野生云南盤鮈與全長3～5 cm的齊口裂腹魚或多鱗白甲魚混合飼養(yǎng)馴化，云南盤鮈約占10%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，馴化至其攝食人工餌料后再進行單養(yǎng)培育，密度5～10 kg/m3。培育期間，投喂全價配合料(CP≥35%)，日投餌2次，投喂量為魚體重的2%～6%。水源為地下泉水，水質(zhì)優(yōu)良，培育水溫7～22℃，pH 7.1～7.8，溶解氧6 mg/L以上。

1.3 人工催產(chǎn)與授精

催產(chǎn)親魚鑒別標(biāo)準(zhǔn)為雌魚腹部明顯膨大、柔軟，輕壓腹部后端可見肛門有卵粒；雄魚胸鰭第1根鰭條內(nèi)側(cè)鋸齒狀白點明顯，輕壓腹部有乳白色精液流出，遇水立即散開。

人工催產(chǎn)親魚體質(zhì)健壯、性腺發(fā)育成熟，雌雄比約1︰1.5。催產(chǎn)激素為鯉魚腦垂體(PG)、人絨毛膜促性腺激素(HCG)、促黃體素釋放激素類似物(LHRH-A2)和馬來酸地歐酮(DOM)。經(jīng)初步預(yù)試驗后，以Ⅰ(PG 2 mg/kg +HCG 600 IU/kg)、Ⅱ(LHRH-A24 μg/kg +HCG 800 IU/kg)、Ⅲ(LHRH-A26 μg/kg +DOM 3 mg/kg)和Ⅳ(LHRH-A24 μg/kg +HCG 400 IU/kg +DOM 2 mg/kg)4種催產(chǎn)劑組合注射催產(chǎn)，選擇背鰭基部肌肉或腹腔一次注射，雌雄親魚劑量一致。對照組注射蒸餾水，每組合設(shè)2個重復(fù)。注射后親魚放入產(chǎn)卵池，流水刺激，自然產(chǎn)卵受精或干法人工授精方式獲得受精卵。

1.4 人工孵化

受精卵平鋪于自制孵化箱中(0.4 m×0.5 m，網(wǎng)目60目)微流水孵化，定期揀出無活性卵。隨機挑選受精卵觀察仔稚魚發(fā)育情況。孵化出膜仔魚先在孵化箱中暫養(yǎng)，開口攝食后轉(zhuǎn)入魚苗池進行后期培育。

1.5 指標(biāo)計算

隨機取樣31尾人工馴養(yǎng)云南盤鮈雌魚，測量體重、性腺重、絕對懷卵量，計算相對懷卵量、成熟系數(shù)；人工繁殖過程中，計算催產(chǎn)率、自產(chǎn)率、受精率、孵化率。

催產(chǎn)率=產(chǎn)卵雌魚數(shù)/催產(chǎn)雌魚總數(shù)×100%

自產(chǎn)率=注射催產(chǎn)劑后自然產(chǎn)卵雌魚數(shù)/催產(chǎn)雌魚總數(shù)×100%

受精率=受精卵數(shù)/總卵粒數(shù)×100%

孵化率=出苗數(shù)/受精卵總數(shù)×100%

體質(zhì)量相對懷卵量=絕對懷卵量/凈體重

體長相對懷卵量=絕對懷卵量/體長

接收機的時延由接收鏈路上的功能電路如放大器、混頻器件及濾波器等引起，下面分別對各部份電路的時延進行分析和仿真。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用Excel統(tǒng)計，利用SPSS 17.0進行單因素方差分析和ANOVA分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 云南盤鮈人工馴養(yǎng)及懷卵量

2.1.1 人工馴養(yǎng) 觀察發(fā)現(xiàn)，人工環(huán)境下馴養(yǎng)，云南盤鮈性腺能夠發(fā)育成熟，馴化的個體在池底未鋪砂石的池塘中性腺也可正常發(fā)育，但初入池塘的野生云南盤鮈喜頂水跳躍、怕光，對池塘部分遮光處理馴化效果更佳。將野外采集的野生云南盤鮈同已馴化的魚類混養(yǎng)，能較好地帶動其攝食人工餌料。

2.1.2 懷卵量 對繁殖季節(jié)的31尾雌魚解剖計數(shù)，人工馴養(yǎng)云南盤鮈絕對懷卵量185～637粒，平均為301粒，稍低于野生云南盤鮈平均數(shù)(375粒)[9]；體質(zhì)量相對懷卵量平均24.99粒/g，高于野生云南盤鮈(21.27粒/g)[9]；體長相對懷卵量平均3.21粒/mm。絕對懷卵量(F)與凈體重(W)存在線性關(guān)系(圖1)，擬合關(guān)系式為F=15.336W+103.01(R2=0.626 7)，隨著云南盤鮈凈體質(zhì)量的增加，其絕對懷卵量隨之增加。

圖1 云南盤鮈絕對懷卵量與凈體重的關(guān)系

2.2 人工催產(chǎn)繁殖

從4種催產(chǎn)劑組合對性成熟親魚的催產(chǎn)效果(表1)對比看出，人工催產(chǎn)的受精率和孵化率無差異；催產(chǎn)率均較高，但催產(chǎn)劑組合Ⅲ的催產(chǎn)率(82.6%)顯著低于組合Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ(均為100%)；注射催產(chǎn)劑組合Ⅰ、Ⅲ需要通過人工授精方式才能獲得受精卵，而注射催產(chǎn)劑組合Ⅱ、Ⅳ后部分親魚能夠發(fā)情自然產(chǎn)卵受精，但催產(chǎn)劑組合Ⅳ的自產(chǎn)率(86.7%)顯著高于組合Ⅳ(32%)。對照組雌魚不能產(chǎn)出卵粒，催產(chǎn)無效。綜合比較，催產(chǎn)劑組合Ⅳ適合生產(chǎn)上使用，能夠減輕人工授精勞動強度。

表1 不同催產(chǎn)劑組合云南盤鮈的人工催產(chǎn)效果

使用催產(chǎn)劑組合Ⅳ(LHRH-A24 μg/kg+HCG 400 IU/kg +DOM 2 mg/kg)進行批量人工催產(chǎn)繁殖，共分11批次催產(chǎn)云南盤鮈929組，催產(chǎn)后親魚在催產(chǎn)池中發(fā)情自然產(chǎn)卵受精。由表2可見，水溫13～21℃條件下，效應(yīng)時間8～14 h，水溫15℃以上的催產(chǎn)效果佳，高于20℃時人工繁殖效果差。人工催產(chǎn)后雌魚最高自然產(chǎn)卵率達86.67%，平均68.47%，其受精率和孵化率平均值分別為76.86%和53.1%，共產(chǎn)卵201 866粒，孵化出水花魚苗96 049尾。

表2 云南盤鮈批量人工繁殖情況

人工繁殖過程中，在催產(chǎn)池內(nèi)觀察到云南盤鮈親魚產(chǎn)卵受精過程：雌雄親魚發(fā)情后，雄魚用吸盤吸附于雌魚體側(cè)，雌魚左右劇烈擺動產(chǎn)出卵粒，雄魚同時排出精液，形成受精卵。觀察還發(fā)現(xiàn)，有1尾雌魚體側(cè)吸附幾尾雄魚的現(xiàn)象，產(chǎn)卵多集中于產(chǎn)卵槽內(nèi)已經(jīng)產(chǎn)出卵粒的集中區(qū)域。

2.3 卵及仔稚魚發(fā)育

注：a為受精卵(白色和淡黃色)，b為初孵仔魚(0日齡)胸鰭，c為3日齡仔魚尾鰭鰭條，d為仔魚(7日齡)，e為4日齡仔魚魚鰾，f為9日齡仔魚腸道(貫通)和側(cè)線。

胚胎和仔稚魚發(fā)育主要特征表現(xiàn)為孵化時間長，仔魚混合營養(yǎng)階段長，初孵仔魚運動能力強。22.5～24.2℃水溫條件下，受精卵經(jīng)76.5 h孵化出膜。剛孵出仔魚(0日齡)呈淡黃色，全長7.6～10.1 mm，體側(cè)肌節(jié)發(fā)達，胸鰭形成(圖2b)，偶爾能作向上的直線運動和短距離的平游；腹部卵黃囊很大，卵黃囊前半部分呈橢圓形，后半部分由腹部至尾部呈前大后小的圓錐形；下頜游離，能自動開合，但不能完全閉合；心臟袋狀；肛門原基、尾鰭原基和臀鰭原基形成。3日齡仔魚尾鰭下緣開始出現(xiàn)鰭條2～7根(圖2c)，鰓蓋能夠隨口開閉而有節(jié)律地閉合。4日齡仔魚口能完全閉合(圖2d)，卵黃前部上端凹陷增大，中間出現(xiàn)鰾(圖2e)。9日齡仔魚開始平游，鰾完全充氣，透明狀，下頜馬蹄形吸盤雛形形成，側(cè)線連貫清晰、腸道延伸貫通于肛門(圖2f)，能見排泄行為。21日齡稚魚卵黃吸收完全，卵黃囊消失。30日齡稚魚尾鰭中心略向內(nèi)凹陷分成淺叉形，外形與成魚基本一致。

3 討論

3.1 繁殖力特性

魚類繁殖力反應(yīng)物種及種群對環(huán)境的適應(yīng)性，受遺傳特性和環(huán)境因子影響，通常用雌魚的懷卵量表示，測算多使用絕對繁殖力和相對繁殖力[14-16]。人工馴養(yǎng)云南盤鮈絕對懷卵量(87～637粒)與野生絕對懷卵量(126～728粒)[9]接近，表明云南盤鮈繁殖力受該研究的環(huán)境因素影響小。與同為野鯪亞科的泉水魚、桂華鯪和唇鯪相比[14]，云南盤鮈的絕對繁殖力較低，個體懷卵量較小，成熟卵的卵徑大；相對繁殖力(24.99粒/g)低于唇鯪(2 350粒/g)[14]，與泉水魚(9.7～49.3粒/g)和桂華鯪(18.6～23.0粒/g)相近[14]。一般認(rèn)為，相對繁殖力低，則魚卵體積大、數(shù)量少、卵黃多、每個卵子成功發(fā)育的機會增加，大卵能夠延長從內(nèi)源轉(zhuǎn)向外源營養(yǎng)的時間，從而有利于仔魚建立初次攝食，提高存活率，但同時也降低了繁殖力[15,17]。云南盤鮈的繁殖策略是通過大卵聚集更多營養(yǎng)物質(zhì)以應(yīng)對外界環(huán)境變化，以降低繁殖力提高早期生活史階段存活率，維護種群的延續(xù)。

3.2 親魚培育的環(huán)境條件

親魚培育是開展魚類人工繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)和前提。魚類性腺發(fā)育和成熟好壞，在一定程度上取決于營養(yǎng)、溫度、光照、水流等外界生態(tài)條件[18]。該研究中，年水溫7～22℃條件下，采用小型流水魚池(8.0 m×2.5 m×1.2 m)流水培養(yǎng)云南盤鮈親魚，其性腺能發(fā)育成熟，并人工繁殖出魚苗。因此，年水溫7～22℃是云南盤鮈親魚培育的適合溫度，云南盤鮈作為小型魚類，親魚培育場所選擇小型流水魚池比較合適，關(guān)鍵是保證水流量和餌料質(zhì)量。

批量繁殖結(jié)果表明，水溫15～19℃催產(chǎn)效果佳，說明該溫度是人工催產(chǎn)的理想溫度。鯉科魚類中，卵巢的發(fā)育和排卵受溫度和光周期的調(diào)節(jié)[19-20]，云南盤鮈的生殖季節(jié)在4—5月[1]，該研究在4月末和5月均證實了云南盤鮈人工繁殖這一觀點，但6—8月也成功完成了人工繁殖過程。解剖發(fā)現(xiàn)，適宜條件下，云南盤鮈Ⅳ期性腺可以維持較長時間，而6—8月親魚培育池水溫尚處于人工催產(chǎn)水溫范圍內(nèi)。由此可見，影響云南盤鮈催產(chǎn)時間的主要因素是水溫，適宜水溫時間長可延長繁殖季節(jié)時間。云南盤鮈Ⅳ期性腺維持的機理尚待研究。

3.3 催產(chǎn)激素的選擇與注射

該研究中，云南盤鮈在人工環(huán)境條件下性腺可以發(fā)育成熟，但不能夠自行產(chǎn)卵受精；采用4種催產(chǎn)劑組合劑型對其性成熟個體進行人工催產(chǎn)，催產(chǎn)率和受精率均比較高，表明云南盤鮈對上述催產(chǎn)劑均較敏感。魚類的自然發(fā)情交配產(chǎn)卵是一個復(fù)雜的過程，硬骨魚類的生殖適應(yīng)性是受環(huán)境因子的暗示和調(diào)控，部分魚類經(jīng)人工誘導(dǎo)可自然產(chǎn)卵受精[18-21]。試驗篩選催產(chǎn)劑組合Ⅳ(LHRH-A24 μg/kg +HCG 400 IU/kg +DOM 2 mg/kg)對人工培育親魚注射催產(chǎn)劑后能夠?qū)崿F(xiàn)自然產(chǎn)卵受精，且連續(xù)5年運用組合催產(chǎn)劑Ⅳ進行批量繁殖均取得良好效果，這可能與云南盤鮈應(yīng)對環(huán)境條件改變后的生殖適應(yīng)性調(diào)控能力較強有關(guān)。因此，云南盤鮈規(guī)?；敝晨蓛?yōu)先選擇催產(chǎn)劑組合Ⅳ進行人工催產(chǎn)，具有節(jié)省人工授精勞力和減輕人工操作對親魚機械損傷的優(yōu)點。

綜合比較，選擇云南盤鮈臀鰭基部進行體腔注射催產(chǎn)劑具有易操作、親魚損傷小等優(yōu)點，可以作為小型魚類人工催產(chǎn)的參考注射方式。

3.4 云南盤鮈資源保護對策

自然繁殖是魚類數(shù)量增殖和種群修復(fù)的根本途徑，云南盤鮈的絕對懷卵量小，繁殖力和種群恢復(fù)能力弱，但通過人工繁殖可以穩(wěn)定產(chǎn)出批量魚苗。因此，云南盤鮈資源保護除加強野生資源和棲息地生態(tài)環(huán)境保護外，實施云南盤鮈的人工繁殖增殖及開發(fā)利用也十分必要，一方面通過人工繁殖苗種開展增殖放流，補充野生資源量；另一方面開展人工養(yǎng)殖滿足市場消費需求，減輕對野生云南盤鮈資源的依賴。

4 結(jié)論

云南盤鮈通過人工馴化養(yǎng)殖，親魚性腺能夠發(fā)育成熟，選用催產(chǎn)劑組合(LHRH-A2+HCG+DOM)催產(chǎn)能夠?qū)崿F(xiàn)親魚自然產(chǎn)卵受精，具有操作簡單、效果佳等優(yōu)點，連續(xù)5年進行批量繁殖的催產(chǎn)率、受精率和孵化率分別為68.47%、76.86%和53.1%。云南盤鮈人工繁殖技術(shù)的推廣應(yīng)用，既能有效解決云南盤鮈人工養(yǎng)殖苗種需求，又能為其增殖放流提供苗種來源，對云南盤鮈的資源保護和開發(fā)利用具有重要意義。