高效液相色譜-示差折光檢測法檢測無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖含量

鄭 星，王 凱,*，薛曉鋒，汪正威，潘 鵬，吳黎明，趙亞周，彭文君,*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，北京 100093；2.中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園，云南 西雙版納 650223；3.西雙版納云蜂古山生物科技有限公司，云南 西雙版納 666200）

無刺蜂屬于膜翅目（Hymenoptera）、蜜蜂科（Apidae）、麥蜂族（Meliponini）昆蟲，由于尾部蟄針退化，故被名為無刺蜂。其主要生活在熱帶和亞熱帶地區(qū)，在我國主要分布于中國臺灣、云南和海南等熱帶地區(qū)。無刺蜂身型較小，是熱帶植物的重要授粉者，它可采集巢穴周圍開花的汁液、植物或昆蟲分泌物，并儲存于用蜂膠和蜂蠟的混合物制成的球型罐中，即為無刺蜂蜂蜜。研究發(fā)現(xiàn)無刺蜂蜂蜜中含有豐富的營養(yǎng)成分，如多酚類化合物等，具有顯著的藥理活性和藥用價值，例如抗氧化、消炎、抑菌、促進傷口愈合、抗糖尿病、治療眼部疾病、調(diào)節(jié)機體代謝、調(diào)節(jié)腸道菌群等，因此會被認為是一種重要的保健食品，越來越受消費者的喜愛。無刺蜂蜂蜜的口感酸甜，水分含量較高，主要由糖類組成，約占其干質(zhì)量碳水化合物的95%～97%。

海藻酮糖是一種還原性二糖，目前僅在天然無刺蜂蜂蜜中發(fā)現(xiàn)，難以用化學(xué)合成，研究表明目前只有某些微生物可以通過蔗糖異構(gòu)酶轉(zhuǎn)化蔗糖生成異麥芽酮糖和海藻酮糖。這些蔗糖異構(gòu)體比蔗糖具有更高的酸穩(wěn)定性，在某種程度上可以增加物種的競爭優(yōu)勢。高蔗糖飲食除了會引起人體的肥胖、高血壓、高血脂、高血糖等代謝疾病，還會引起全身和腦部炎癥，以及增加結(jié)腸直腸癌等風(fēng)險?？紤]到蔗糖異構(gòu)體還沒有副作用的報道，這些物質(zhì)可能是理想的蔗糖替代品。異麥芽酮糖的甜度約為蔗糖的30%；但海藻酮糖甜度是蔗糖的60%，具有高度水溶性，可作為填充劑、保濕劑和質(zhì)地增強劑，適合用于果凍和果醬等高甜食品加工。海藻酮糖的消化吸收慢于蔗糖，會降低單糖和胰島素釋放到血液中的速率，可用于糖尿病患者的食品和飲料；并且海藻酮糖不作為能引起齲齒的變形鏈球菌的葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的底物，顯著降低齲齒病，防止蛀牙。除了作為食品成分的優(yōu)點外，海藻酮糖的還原性使其成為良好的化學(xué)修飾前體，并且還被用于制作糖醇，作為低熱量的甜味劑和生物相容性聚合物。海藻酮糖具有優(yōu)秀的生物學(xué)功能，然而目前鮮見針對我國無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的研究報道。

無刺蜂蜂蜜含有多種功效成分，消費者對無刺蜂蜂蜜衍生產(chǎn)品的需求迅速增長，無刺蜂蜂蜜的鑒別、質(zhì)量控制和標(biāo)準對于無刺蜂蜂蜜的應(yīng)用具有重要的支撐意義。但我國無刺蜂蜂產(chǎn)品相關(guān)研究剛起步，對其化學(xué)組分及營養(yǎng)成分的研究才剛剛開始。本實驗以我國無刺蜂蜂蜜為研究對象，通過建立無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的檢測方法，對我國無刺蜂蜂蜜樣品中的海藻酮糖進行分析。通過樣品的采集地點、時間、蜂種差異，分析海藻酮糖在無刺蜂蜂蜜中的含量及穩(wěn)定性，旨在為相關(guān)食品標(biāo)準的建立提供一定參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

無刺蜂蜂蜜樣品主要是2019—2021年從我國海南、云南和馬來西亞采集，具體樣品編號、所屬的蜂種、采集日期和地點詳見表1。

表1 無刺蜂蜂蜜樣品Table 1 Details of stingless bee honey samples tested

續(xù)表1

洋槐蜂蜜、棗花蜂蜜、荊條蜂蜜（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所實驗蜂場，由意大利蜂采集）；麥盧卡蜜 康維他食品（中國）有限公司；果葡糖漿（食品級） 安徽源森生物科技有限公司；海藻酮糖標(biāo)準品（HPLC≥90%，CAS：51411-23-5） 英國Biosynth Carbosynth公司；-無水葡萄糖（HPLC≥99.5%，CAS：50-99-7）、-果糖（HPLC≥99.5%，CAS：57-48-7；）、蔗糖（HPLC≥98%，CAS：57-50-1）、麥芽糖（HPLC≥98%，CAS：6363-53-7）、海藻糖（HPLC≥98%，CAS：99-20-7）標(biāo)準品 上海源葉生物科技有限公司；超純水 中國華潤怡寶飲料有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ME104E型電子分析天平 上海Mettler-Toledo儀器有限公司；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀（配示RID-10A示差檢測器） 日本島津有限公司；1290高效液相色譜-6545電噴霧離子源四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀安捷倫科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 糖標(biāo)準品及蜂蜜樣品溶液制備

海藻酮糖標(biāo)準溶液：將1 g/mL的海藻酮糖母液，依次稀釋為300、150、50、25、10、5、2.5、1、0.5 mg/mL。

其他糖單標(biāo)準品溶液：分別配制質(zhì)量濃度為150 mg/mL的葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖標(biāo)準品溶液，后稀釋為50 mg/mL的單標(biāo)準品溶液。

混合標(biāo)準品溶液：分別取150 mg/mL各標(biāo)準溶液20 μL，配成25 mg/mL的混合標(biāo)準品溶液。

樣品溶液：準確稱取0.5 g樣品于燒杯中，加入5 mL水溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL的容量瓶中，用3 mL水清洗燒杯，并轉(zhuǎn)移至相同的容量瓶中，純水定容。用一次性注射器取1 mL樣品溶液過0.22 μm尼龍濾膜到進樣小瓶中，準備進樣。

1.3.2 色譜條件

Hi-Plex Pb色譜柱（300 mm×7.7 mm，8 μm）；流動相：純水；柱溫50 ℃；壓力0.6 kPa；RID-10A示差檢測器溫度50 ℃；進樣量10 μL；流速0.5 mL/min；單梯度洗脫時間27.5 min。

1.3.3 高效液相色譜-電噴霧離子源四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜分析

50 mg/mL無刺蜂蜂蜜水用高效液相色譜儀按照1.3.2節(jié)條件下進行分離，當(dāng)保留時間為18.61 min的目標(biāo)化合物峰值出現(xiàn)時，用離心管收集洗脫液。將收集的單體物質(zhì)用冷凍干燥的方法出去溶劑水，然后配制成50 mg/mL單體物質(zhì)。

高效液相色譜條件：ACQUITY UPLCBEH Amide（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）分離柱；柱溫45 ℃，流速0.15 mL/min，分別對制備單體和海藻酮糖、蔗糖、麥芽糖標(biāo)準品進樣5 μL，流動相為50% A相（0.2%氨水）和50% B相（乙腈）進行等度分離。

質(zhì)譜條件：在負離子Auto MS/MS模式下對母離子341.108 9（[M－H]）進行撞擊，獲得二級碎片。干燥氣溫度320 ℃，干燥氣流速8 L/min，鞘氣溫度320 ℃，鞘氣流速11 L/min，噴嘴電壓1 000 V，去簇電壓130 V。

1.3.4 方法學(xué)考察

干擾性實驗：將50 mg/mL海藻酮糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖混合標(biāo)準品溶液，在1.3.2節(jié)色譜條件下進樣10 μL，記錄各標(biāo)準品糖的出峰時間及峰面積，觀察此方法中其他糖類物質(zhì)對海藻酮糖的干擾。

標(biāo)準曲線繪制：分別將50、25、10、5、2.5、1、0.5 mg/mL的海藻酮糖標(biāo)準溶液在1.3.2節(jié)和1.3.3節(jié)條件下進樣測定，以不同質(zhì)量濃度海藻酮糖標(biāo)準溶液（，mg/mL）為橫坐標(biāo)，以不同質(zhì)量濃度海藻酮糖標(biāo)準溶液的出峰面積（）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線。檢出限（limit of detection，LOD）為3 倍的信噪比，定量限（limit of quantitation，LOQ）為10 倍的信噪比。

重復(fù)性實驗：按照1.3.1節(jié)方法平行制備6 份50 mg/mL海藻酮糖標(biāo)準品溶液，按照1.3.2節(jié)色譜條件進樣10 μL，記錄6 份平行制備的標(biāo)準品溶液的出峰時間，并計算其相對標(biāo)準偏差（relative standard deviation，RSD）。

精密度實驗：按照1.3.1節(jié)方法制備50 mg/mL海藻酮糖標(biāo)準品溶液，按照1.3.2節(jié)色譜條件連續(xù)進樣6 次，記錄標(biāo)準品溶液的出峰時間，并計算其峰面積的RSD。

穩(wěn)定性實驗：按照1.3.1節(jié)方法平行制備3 份50 mg/mL海藻酮糖標(biāo)準品溶液，按照1.3.2節(jié)色譜條件分別在第1、2、3、4、5天進樣10 μL，觀察日間穩(wěn)定性，記錄標(biāo)準品溶液的出峰時間，并計算其峰面積的RSD。

回收率實驗：用果葡糖漿作為樣品添加不同量海藻酮糖標(biāo)準品進行回收，精確稱取0.500 g果葡糖漿4 份，分別添加100 mg/mL海藻酮糖標(biāo)準品5、2.5、1、0.5 mL，用水定容至10 mL，所得最終海藻酮糖溶液質(zhì)量濃度分別為50、25、10、5 mg/mL，樣品溶液過0.22 μm尼龍濾膜到進樣小瓶中。再按1.3.2節(jié)色譜條件進樣10 μL，計算海藻酮糖的加標(biāo)回收率。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

實驗數(shù)據(jù)為重復(fù)3 次測定的平均值，采用SPSS 22.0軟件進行差異顯著性分析（＜0.05，差異顯著），并使用GraphPad Prism 8.3.0和Excel 2019進行圖表繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 糖標(biāo)準品和蜂蜜樣品色譜檢測

蜂蜜樣品前處理直接用純水進行提取，方法簡單易行。Hi-Plex Pb色譜柱有更好的保留性，提高了對乳糖、蔗糖和其他一些單糖的分辨能力，經(jīng)常用于甜乳制品的分析。本實驗發(fā)現(xiàn)用Hi-Plex Pb可以將無刺蜂蜂蜜中的葡萄糖、果糖和海藻酮糖有效分離，峰形和保留時間穩(wěn)定（圖1）。用純水作為流動相，只需等度洗脫，在27.5 min內(nèi)無刺蜂蜂蜜中的葡萄糖、海藻酮糖和果糖就可以得到良好分離。

圖1 糖標(biāo)準品（A）和蜂蜜樣品（B）色譜圖Fig. 1 Chromatograms of sugar standards (A) and honey samples (B)

如圖1A所示，6 個單標(biāo)準品溶液的色譜圖表明，海藻糖同蔗糖出峰時間完全一致，但其同海藻酮糖可實現(xiàn)明顯分離。圖1B無刺蜂蜂蜜樣品溶液色譜圖中3 個主要高響應(yīng)峰分別為葡萄糖（1號峰，保留時間16.59 min）、海藻酮糖（2號峰，保留時間18.61 min）和果糖（3號峰，保留時間23.02 min）。以洋槐蜜、棗花蜜、荊條蜜、麥盧卡蜜作為常見蜂蜜對照，從圖1B可以看出，無刺蜂蜂蜜的葡萄糖和果糖含量低于普通蜂蜜，但含有較高的海藻酮糖。由于海藻酮糖具有豐富的功能和生物利用度，檢測出無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的含量有極大的研究價值。

海藻糖是一種低甜度的非還原性二糖，由2 個葡萄糖殘基組成，于細菌、真菌、昆蟲、無脊椎動物以及低等植物中天然存在。海藻糖在生物細胞中，能夠與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)間形成氫鍵，在炎熱、寒冷、干燥、缺氧等不利條件下具有穩(wěn)定細胞膜和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的特性。文獻報道蜂蜜中含有少量的海藻糖和異麥芽酮糖，且海藻糖質(zhì)量分數(shù)低于0.3%。但是國內(nèi)沒有研究者報道蜂蜜中含有海藻酮糖，這是首次在我國蜂蜜，特別是我國無刺蜂蜂蜜中發(fā)現(xiàn)海藻酮糖的證據(jù)。

蜂蜜中糖含量檢測，目前主要采用的方法主要包括高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法、穩(wěn)定碳同位素比值測定法、高性能薄層色譜法、核磁共振碳水化合物譜圖以及近紅外光譜法等。參照GB 5009.8—2016《食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定》中提出的檢測方法，用高效液相色譜-示差折光檢測法/蒸發(fā)光散射檢測法，使用氨基色譜柱，以乙腈-水（70∶30，/）為流動相，檢測蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的含量，但課題組前期實驗表明，通過此方法，蔗糖和海藻酮糖的保留時間完全相同，不能實現(xiàn)二者的完全分離。因此在國標(biāo)的基礎(chǔ)上，探索出一種簡單、快速和準確的方法檢測無刺蜂蜂蜜中的海藻酮糖，此方法亦可對其他食物中海藻酮糖的檢測提供重要參考。

2.2 高效液相色譜-電噴霧離子源四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜分析海藻酮糖

通過高效液相色譜法對樣品與標(biāo)準品的對比可推測，保留時間為18.61 min的目標(biāo)化合物為海藻酮糖。海藻酮糖與蔗糖、麥芽糖具有相同的分子式CHO，互為同分異構(gòu)體，它們在負離子模式下（[M－H]）/341.108 9。因此通過電噴霧離子源四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜對制備的單體物質(zhì)和海藻酮糖、蔗糖、麥芽糖標(biāo)準品進行二級分離，以檢查制備單體物質(zhì)與單體糖標(biāo)準品的二級碎片（[M－H]）/341.108 9差異性。

由圖2可以看出，從無刺蜂蜂蜜中分離制備的單體物質(zhì)與海藻酮糖標(biāo)準品的二級譜圖一致，母離子（[M－H]）/341.108 9的主要二級碎片為/113、119、179和221。蔗糖在母離子（[M－H]）/341.108 9的主要二級碎片為/113、119和179，沒有海藻酮糖中的221。麥芽糖在母離子（[M－H]）/341.108 9的主要二級碎片為/113、119、161和221，與海藻酮糖的二級離子也有顯著差異。這與Fletcher等用UPLC-MS/MS分析的結(jié)果一致，海藻酮糖與蔗糖、麥芽糖在母離子（[M－H]）/341.108 9的主要二級碎片具有明顯的差異性，3 種糖互為同分異構(gòu)體。因此，通過高效液相色譜-電噴霧離子源四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜可進一步確定保留時間18.61 min的目標(biāo)化合物為海藻酮糖。

圖2 無刺蜂蜂蜜制備單體（A）與海藻酮糖（B）、蔗糖（C）、麥芽糖（D）標(biāo)準品在ESI-MS/MS光譜（碰撞電壓130 V）在負離子模式下（[M－H]－ m/z 341.108 9）的結(jié)果Fig. 2 ESI-MS/MS spectra (at fragmentor voltage of 130 V) in negative ion mode of ([M?H]?) m/z 341.108 9 of stingless bee honey (A) and trehalulose (B), sucrose (C) and maltose (D) standards

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 方法的選擇性

圖3 糖混合標(biāo)準品和單個糖標(biāo)準品的液相色譜圖Fig. 3 Liquid chromatograms of mixed and individual sugar standards

由于蜂蜜中主要的糖種類為葡萄糖、果糖、蔗糖和麥芽糖，并且文獻中對蜂蜜報道較多的糖為海藻糖，因此將這5 種糖與海藻酮糖混合到一起作為混合標(biāo)準糖溶液，觀察蜂蜜中其他常見糖對海藻酮糖檢測的干擾性。從圖3可以看出，海藻酮糖與另外5 種糖完全分離，且保留時間與海藻酮糖單體一致。用1.3.2節(jié)色譜條件可以將海藻酮糖完整分離出來，方法具有很好的選擇性，因此這種色譜條件可以作為檢測蜂蜜中海藻酮糖含量的方法。

2.3.2 海藻酮糖標(biāo)準曲線

由0.5、1、2.5、5、10、25、50 mg/mL的海藻酮糖標(biāo)準溶液在1.3.2節(jié)色譜條件下檢測得出的標(biāo)準曲線，線性方程為=1.56×10＋2.21×10，=0.999 6，因此海藻酮糖在0.5～50 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。該方法測定海藻酮糖的其LOD為0.07 mg/mL，LOQ為0.22 mg/mL。

2.3.3 重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性實驗結(jié)果

由表2可以看出，6 份50 mg/mL的海藻酮糖標(biāo)準品溶液進樣后，出峰面積的RSD為2.46%，表明此提取方法重復(fù)性良好；同一份海藻酮糖標(biāo)準品進樣后，出峰面積的RSD為0.18%，表明色譜方法的精密度良好；不同時間測定3 份相同質(zhì)量濃度的海藻酮糖標(biāo)準品后，出峰面積的RSD為2.43%，表明此色譜方法在5 d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表2 50 mg/mL海藻酮糖標(biāo)準品溶液的重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性實驗結(jié)果Table 2 Repeatability, precision and stability for the determination of 50 mg/mL trehalulose standard

2.3.4 回收率實驗結(jié)果

表3 果葡糖漿中海藻酮糖加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)（n=3）Table 3 Recoveries of trehalulose spiked into high fructose corn syrup (n = 3)

表3表明，不同添加量海藻酮糖在果葡糖漿中的加標(biāo)回收率在93.50%～95.71%之間，RSD均不高于0.61%，說明本方法有較好的回收率，結(jié)果準確可靠。

2.4 無刺蜂蜂蜜樣品中海藻酮糖含量測定

通過本實驗建立的蜂蜜中海藻酮糖的檢測方法，對不同蜂種、采集時間和地點的無刺蜂蜂蜜進行海藻酮糖含量的測定。1～6號樣品為2020年5月在云南采集的黃紋無刺蜂蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為22.90%～30.82%；7～10號樣品為2020年5月在云南采集的頂無刺蜂蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為17.30%～27.91%；11～13號樣品為2020年5月和11月在云南采集的戈氏無刺蜂蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為19.72%～27.74%；14號樣品為2020年11月在云南同一蜂場采集的黃紋無刺蜂、頂無刺蜂、戈氏無刺蜂的混合蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為24.03%；15和16號樣品分別為2020年和2019年11月在海南同一蜂場采集的黃紋無刺蜂蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)相似，分別為18.16%和18.52%；17～21號樣品為2019年在馬來西亞采集的無刺蜂蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為10.36%～20.92%；22～31號樣品為2021年1月在云南采集的黃紋無刺蜂蜂蜜，海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為6.97%～20.61%。

表4 無刺蜂蜂蜜樣品中海藻酮糖含量測定結(jié)果Table 4 Contents of trehalulose in different stingless bee honey samples

圖4 不同種類無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖含量Fig. 4 Contents of trehalulose in different stingless bee honey samples

文獻中對于蜂蜜中海藻酮糖鮮有報道，F(xiàn)letcher等運用核磁共振氫譜法確認海藻酮糖，并通過超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜對來自澳大利亞（和）、馬來西亞（和）和巴西（）的5 種不同無刺蜂的蜂蜜進行檢測，首次鑒定出不同尋常的海藻酮糖作為蜂蜜的主要成分，每100 g蜂蜜中含有13～44 g海藻酮糖。Popova等用核磁共振的方法鑒定出非洲無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)大于20%，但我國無刺蜂蜂蜜研究鮮有報道。此結(jié)果與表4接近，由于采集的時間和地理環(huán)境和蜂種等有差異，2021年冬季于馬來西亞和中國云南采集的無刺蜂蜂蜜樣品中，海藻酮糖含量略低。

表4中，采集的所有蜂蜜樣品海藻酮糖質(zhì)量分數(shù)為7.0%～30.8%，與文獻中報道的含量接近?？煽闯鱿嗤杉瘯r間、蜂種和地區(qū)的蜂蜜在不同蜂巢中收集，測得的海藻酮糖含量有顯著差異（＜0.05）。14號混合無刺蜂蜂蜜樣品海藻酮糖含量相對居中，15號和16號兩年海南采集的樣品中海藻酮糖含量相近。但相對于云南采集的樣品，海南采集的樣品中海藻酮糖含量較低，由于樣品過少，需要后期用更多的樣品進行實驗分析。

2020年采集的黃紋無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖含量明顯高于2021年（＜0.05）。從采集日期分析，2020年5月正值花蜜期，無刺蜂采集的花種類相對豐富，而2021年1月屬于冬季，蜜源植物種類相對較少，這可能是海藻酮糖含量較低的原因之一。馬來西亞和中國云南的無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖含量沒有顯著差異，可能是由于這兩個地區(qū)的無刺蜂蜂種習(xí)性相似，釀造出的蜂蜜中海藻酮糖含量差異不大。由圖4可看出，從云南采集的不同蜂種無刺蜂蜂蜜樣品中，黃紋無刺蜂蜂蜜中海藻酮糖含量顯著高于頂無刺蜂（＜0.05）和戈氏無刺蜂蜂蜜（＜0.01），但與混合無刺蜂蜂蜜相似，表明海藻酮糖在不同無刺蜂種的蜂蜜中含量不同。此外，相同蜂種無刺蜂在不同蜂箱中海藻酮糖含量也具有差異，這需要采集大量的樣本探究不同蜂種中海藻酮糖含量是否具有明顯差異。

3 結(jié) 論

采用高效液相色譜-示差檢測器法測定蜂蜜中海藻酮糖的含量，用純水溶解蜂蜜樣品，使用離子配體交換柱Hi-Plex Pb（300 mm×7.7 mm，8 μm）作為分離色譜柱，以純水作流動相，流速0.5 mL/min，進樣量10 μL，柱溫50 ℃，示差檢測池溫度50 ℃，海藻酮糖質(zhì)量濃度在0.5～50 mg/mL范圍內(nèi)線性良好，為0.999 6。通過高效液相色譜-電噴霧離子源四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜檢測可知，無刺蜂樣品中保留時間為18.61 min的目標(biāo)化合物是海藻酮糖。方法學(xué)檢驗證實海藻酮糖與其他糖類基線分離，本檢測方法的回收率高、重復(fù)性好，其LOD為0.07 mg/mL，LOQ為0.22 mg/mL，加標(biāo)回收率為93.50%～95.71%（RSD≤0.61%）。該方法簡單快捷、定量準確，可以實現(xiàn)無刺蜂蜂蜜樣品中海藻酮糖的準確定量分析，為我國無刺蜂蜂蜜品質(zhì)評價提供了科學(xué)依據(jù)，同時本研究建立的檢測方法也可為相關(guān)食品標(biāo)準的開發(fā)提供參考。