王福清，亢和平，邢 瑞，杜繼紅，趙麗霞，郭建軍，楊冬梅，烏日罕，郭 宇，齊 彪，張林沖

（1.中科醫(yī)藥行業(yè)生產(chǎn)力促進(jìn)中心，北京 100038；2.金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010111；3.北京市獸藥飼料監(jiān)測中心，北京 101127；4.內(nèi)蒙古自治區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；5.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000）

0 引言

隨著我國規(guī)?；B(yǎng)殖的逐年發(fā)展，動(dòng)物疫病的防控水平也隨之不斷提高，獸用疫苗作為動(dòng)物疫病防控的主要措施，其質(zhì)量對于動(dòng)物疫病的防控效果起著至關(guān)重要的作用。獸用疫苗通常情況下是指用于免疫接種以達(dá)到預(yù)防動(dòng)物病毒病、細(xì)菌病或寄生蟲病的生物制品。按照疫苗株構(gòu)建技術(shù)或抗原設(shè)計(jì)技術(shù)的應(yīng)用情況，可以分為傳統(tǒng)疫苗、亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗以及抗獨(dú)特型疫苗等。

獸用疫苗的生產(chǎn)工藝依據(jù)疫苗的材料、用途、劑型、接種方式、感染性不同，一般包括：培養(yǎng)、滅活、濃縮、純化、凍干、乳化、灌裝等關(guān)鍵技術(shù)。近些年，獸用疫苗的生產(chǎn)工藝有了長足的發(fā)展，尤其在大規(guī)模反應(yīng)器、先進(jìn)的純化技術(shù)用于獸用疫苗生產(chǎn)后，生產(chǎn)規(guī)模、產(chǎn)品質(zhì)量都得到了顯著提升。

但是，疫苗質(zhì)量的管控是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，生產(chǎn)疫苗所用原輔材料的質(zhì)量、生產(chǎn)工藝的水平、佐劑的效果以及疫苗的保存條件均對疫苗的“安全、高效、均一、穩(wěn)定”的特性影響顯著。近些年，各企業(yè)對于原輔料均建立了嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)工藝也從硬件、軟件不斷開發(fā)提升，佐劑也從傳統(tǒng)的鋁佐劑、弗氏佐劑等傳統(tǒng)佐劑陸續(xù)增加了納米材料佐劑、γ-干擾素（IFNγ）、白細(xì)胞介素（Interleukins，ILs），脂質(zhì)體、免疫刺激復(fù)合物（ISCOMs）等新型免疫佐劑。但是，對于疫苗“高效、穩(wěn)定”影響巨大的疫苗儲(chǔ)存、運(yùn)輸技術(shù)未見深入研究報(bào)道。

冷鏈運(yùn)輸是指運(yùn)輸?shù)娜^程中運(yùn)輸貨物始終保持一定的溫度，包括裝卸搬運(yùn)、變更運(yùn)輸方式以及更換包裝設(shè)備等環(huán)節(jié)。近些年，冷鏈運(yùn)輸技術(shù)逐步成熟，包括移動(dòng)制冷技術(shù)、保溫箱制造技術(shù)、冷鏈運(yùn)輸監(jiān)控及管理技術(shù)等方面發(fā)展有明顯提升。本文通過對獸用疫苗冷鏈運(yùn)輸技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀和水平進(jìn)行總結(jié)和分析，為獸用疫苗的冷鏈技術(shù)進(jìn)行深入研究，從而確保合格疫苗從生產(chǎn)端到用戶端的冷鏈保障，降低疫苗有效成分的裂解率，從而提高疫苗的“高效、穩(wěn)定”特性，為疫苗的防疫效果打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1 材料

口蹄疫O 型疫苗、其它輔助材料，金宇保靈生物藥品有限公司。離心機(jī)，美國Beckman。其它耗材、試劑，金宇保靈生物藥品有限公司。

2 方法

2.1 保存方法。將口蹄疫O 型疫苗取樣檢測破乳146S、劑型，然后將疫苗分為3 組，每組12 個(gè)樣品，分別存放于-20℃、2～8℃以及25℃，每月取樣檢測146S、觀察劑型。

2.2 檢驗(yàn)方法。采用蔗糖梯度離心法檢測146S；通過滴水試驗(yàn)檢測疫苗劑型。

3 疫苗保存溫度標(biāo)準(zhǔn)建立方法

依據(jù)疫苗的特性，獸用疫苗的保存溫度一般包括-20℃、2～8℃兩種保存方法。其中活疫苗主要為凍干疫苗，該類疫苗一般需要在-20℃條件下儲(chǔ)存和運(yùn)輸，防止病毒或細(xì)菌死亡導(dǎo)致效力降低；滅活疫苗一般需要添加佐劑，該類疫苗主要在2～8℃下儲(chǔ)存或運(yùn)輸，不但要防止溫度過高，也要防止溫度低于0℃導(dǎo)致疫苗凍結(jié)，溫度異常會(huì)導(dǎo)致疫苗變性或疫苗的劑型發(fā)生改變。

3.1 疫苗保存溫度對有效性影響。疫苗保存溫度對于疫苗的效力有明顯的影響，疫苗保存溫度標(biāo)準(zhǔn)的建立是疫苗運(yùn)輸條件設(shè)定的關(guān)鍵。試驗(yàn)以口蹄疫O 型疫苗為例開展了一種疫苗的保存溫度標(biāo)準(zhǔn)建立，通過表1 可以看出，該口蹄疫疫苗在2～8℃下的裂解率最低，-20℃下裂解率在第10 個(gè)月達(dá)到94.8%，25℃在第8 個(gè)月達(dá)到100%。因此，從裂解率來看，口蹄疫O 型疫苗為了保證其效力，保存溫度應(yīng)為2～8℃。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1；不同溫度下口蹄疫O 型疫苗穩(wěn)定性對比如圖1 所示。

表1 不同保存溫度下口蹄疫O 型疫苗146S 裂解對比（μg/ml）

圖1 不同保存溫度下口蹄疫O 型疫苗146S 裂解率對比

3.2 疫苗保存溫度對穩(wěn)定性的影響。疫苗保存溫度不僅影響疫苗的效力，同時(shí)對于疫苗的劑型也會(huì)存在很多不確定性因素。試驗(yàn)仍以口蹄疫O 型疫苗為例開展了一種疫苗的保存溫度對疫苗穩(wěn)定性影響的摸索?？谔阋逴 型疫苗是一種水包油包水型雙相疫苗，通過不同溫度保存可以看出，在2～8℃下該疫苗的劑型12 個(gè)月保持穩(wěn)定，-20℃下1 個(gè)月發(fā)生分層，25℃下1 個(gè)月發(fā)生分層。因此，從穩(wěn)定性來看，口蹄疫O 型疫苗為了保證其穩(wěn)定性，保存溫度應(yīng)為2～8℃。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表2。

表2 不同保存溫度下口蹄疫O 型疫苗穩(wěn)定性對比

通過以上試驗(yàn)，從疫苗的有效性、穩(wěn)定性兩個(gè)方面評價(jià)了口蹄疫O 型疫苗的保存溫度應(yīng)為2～8℃。

4 疫苗保存、運(yùn)輸環(huán)節(jié)關(guān)鍵點(diǎn)建立

建立疫苗保存溫度的標(biāo)準(zhǔn)后，應(yīng)就疫苗保存、運(yùn)輸?shù)恼麄€(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行梳理，確定疫苗整個(gè)運(yùn)輸過程可能影響溫度的環(huán)節(jié)，并建立相應(yīng)制度以確保疫苗始終在標(biāo)準(zhǔn)溫度下進(jìn)行操作和轉(zhuǎn)運(yùn)。

4.1 疫苗出庫關(guān)鍵點(diǎn)建立。疫苗出庫包括裝卸、改變運(yùn)輸方式、改變包裝設(shè)備等操作，該階段疫苗的溫度與疫苗的出庫時(shí)長有直接關(guān)系，出庫時(shí)長由轉(zhuǎn)運(yùn)距離、單次出庫量決定。因此，在疫苗的出庫過程中應(yīng)設(shè)定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，盡量實(shí)現(xiàn)“門對門”，“快速”的操作原則，保證疫苗離開冷庫后及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)至冷鏈運(yùn)輸車中。

4.2 疫苗運(yùn)輸關(guān)鍵點(diǎn)建立。疫苗運(yùn)輸過程中存在很多不確定性，冷鏈設(shè)備制冷異常、制冷不開、長時(shí)間停車等異常情況均會(huì)對疫苗的保存溫度造成影響。因此，該環(huán)節(jié)應(yīng)建立溫度監(jiān)控系統(tǒng)，如在線溫度遠(yuǎn)程監(jiān)控、冷鏈溫度記錄儀等設(shè)備。目前，溫度監(jiān)控或記錄已陸續(xù)成為疫苗廠家必要冷鏈保障的方法，很多廠家采用車載溫度記錄儀、隨車電子溫度連續(xù)記錄儀、遠(yuǎn)程監(jiān)控APP 等相結(jié)合的方式監(jiān)控疫苗運(yùn)輸過程溫度。

5 疫苗終端儲(chǔ)存、使用關(guān)鍵點(diǎn)建立

5.1 疫苗終端儲(chǔ)存關(guān)鍵點(diǎn)建立。獸用疫苗在終端用戶處的儲(chǔ)存往往會(huì)被獸用疫苗廠家和用戶所忽略，其實(shí)該環(huán)節(jié)也是疫苗溫度保障的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。獸用疫苗因使用環(huán)境的因素，往往會(huì)存在疫苗儲(chǔ)存量過大以及儲(chǔ)存條件不佳的情況。一般用戶會(huì)選擇將疫苗儲(chǔ)存在冰箱中，因儲(chǔ)存量大疫苗會(huì)貼壁，會(huì)造成貼壁疫苗溫度過低而發(fā)生凍結(jié)的可能；或者因冰箱沒有溫度校驗(yàn)或故障，導(dǎo)致溫度不準(zhǔn)造成疫苗高溫。因此，一方面如果采用冰箱儲(chǔ)存應(yīng)保證單個(gè)冰箱的儲(chǔ)存數(shù)量，避免疫苗貼壁儲(chǔ)存，最好經(jīng)驗(yàn)證后再確定儲(chǔ)存量；其次要在冰箱中放置溫度計(jì)，定時(shí)觀測冰箱溫度，以保證冰箱溫度正常。

5.2 疫苗使用關(guān)鍵點(diǎn)建立。疫苗在使用前應(yīng)做回溫處理，疫苗如果不回溫，直接接種動(dòng)物，由于有30 多℃的溫度差，極易引起豬只“冷應(yīng)激”，豬只痛感增強(qiáng)，甚至?xí)?dǎo)致免疫失敗。但是回溫過程應(yīng)在監(jiān)控范圍內(nèi)進(jìn)行，不能長時(shí)間回溫，可以采用水浴回溫、自然回溫等方法，回溫后應(yīng)及時(shí)使用，避免回溫過度對疫苗質(zhì)量造成影響。

6 儲(chǔ)存、運(yùn)輸、使用不當(dāng)示例

在疫苗儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用過程中，因溫度異常的情況時(shí)有發(fā)生，如因制冷設(shè)備異常、環(huán)境溫度等因素使疫苗低于0℃導(dǎo)致疫苗凍結(jié)或高于8℃；油乳劑疫苗長時(shí)間儲(chǔ)存溫度超出2～8℃的范圍會(huì)導(dǎo)致有效成分裂解、疫苗分層，從而導(dǎo)致注射效力低、安全差等問題。如圖2 所示是由于低溫、高溫導(dǎo)致油乳劑疫苗發(fā)生分層的示例圖片。

圖2 油乳劑疫苗低溫（-15℃）凍結(jié)、高溫（37℃）后發(fā)生分層

7 討論與小結(jié)

綜上所述，本文建立了一種“儲(chǔ)存溫度評估—運(yùn)輸環(huán)節(jié)關(guān)鍵點(diǎn)控制—終端用戶儲(chǔ)存、使用關(guān)鍵點(diǎn)管理”的流程規(guī)范，該方法就獸用疫苗從生產(chǎn)到終端使用過程的冷鏈保障提供了一種方法，以實(shí)現(xiàn)合格疫苗經(jīng)運(yùn)輸后不發(fā)生“安全、效力、均一、穩(wěn)定”等質(zhì)量方面的變化。