基于NF-κB/MAPK信號通路探討天山堇菜七葉內(nèi)酯對脂多糖誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制

王 雪，劉 燕，史玉柱

(新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆 烏魯木齊 830011)

天山堇菜(ViolatianshanicaMaxim)又名“比那夫西”，是堇菜科(Violaceae)堇菜屬植物，藥用其干燥全草，具有調(diào)理、軟化、發(fā)汗的作用。臨床用于熱性感冒、發(fā)燒、頭痛、咽痛、肢腫、小兒驚厥，也可外用于疔瘡腫痛等癥[1-2]。全草含揮發(fā)油、黃酮類、生物堿、氨基酸、皂苷、鞣質(zhì)、香豆素等成分，具有明顯的抗菌、抗氧化等作用[1-3]。天山堇菜在維吾爾藥經(jīng)典名方中存在著廣泛的應(yīng)用，它是常用的單方退燒藥或復(fù)方抗病毒藥的主要組分。如：復(fù)方天山堇菜顆粒、降熱比那甫西糖漿、復(fù)方比那甫西丸、比那甫西顆粒等，以上經(jīng)典名方的君藥均為天山堇菜。因其副作用低，價格低廉，是一味極具有研究開發(fā)價值的藥材。目前，有關(guān)天山堇菜及其化學(xué)成分藥理作用及機(jī)制方面的深入研究相對比較匱乏。課題組前期研究[3-5]發(fā)現(xiàn)，天山堇菜總黃酮提取物具有較好的體內(nèi)、外抗流感病毒作用及抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用。通過化學(xué)成分分析發(fā)現(xiàn)天山堇菜總黃酮提取物中含有大量的七葉內(nèi)酯，采用反相硅膠和Sephadex LH-20色譜技術(shù)對天山堇菜中的七葉內(nèi)酯進(jìn)行分離純化，最終得到了含量大于97%的七葉內(nèi)酯。七葉內(nèi)酯有可能是天山堇菜總黃酮提取物發(fā)揮抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。盡管七葉內(nèi)酯是一個常見的化合物，普遍存在于很多中藥材中，具有抗菌、抗炎、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘等功效，但對其藥理作用的研究都不夠深入。因此，本研究采用大腸桿菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞(RAW264.7)急性炎癥模型考察七葉內(nèi)酯的抗炎作用，探討其是否通過調(diào)節(jié)NF-κB、MAPK信號通路發(fā)揮抗炎作用的機(jī)制，為天山堇菜的應(yīng)用研究與開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑天山堇菜七葉內(nèi)酯，由新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所植物化學(xué)研究室制備，純度97%；陽性對照藥：吲哚美辛(Indomethacin，INDO)購于美國Sigma公司，貨號：I7378。脂多糖(LPS，Escherichia Coli 055：B5)，美國Sigma公司，貨號L2880；RPMI 1640培養(yǎng)基，Gibco公司，貨號：C11875500CP，批號：8118002；胎牛血清FBS，美國Gibco公司，貨號：10099-141，批號：19083660C；CellTiter 96?AQueous One Solution Cell Proliferation Assay，美國Promega公司，貨號：G3581；Griess試劑盒，碧云天公司，貨號：S0021；Mouse TNF-α ELISA Ready-SET-GO、Mouse IL-6 ELISA Ready-SET-Go，購于Thermo Fischer Scientific 公司，貨號分別為：88-7324-88，88-7064-88；IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒，批號：Z13019384，購自武漢華美生物技術(shù)有限公司；多聚甲醛購于天津南開允公合成技術(shù)公司，貨號：30525-89-4；Triton X-100，Thermo Fischer Scientific公司，貨號：8511；BSA，美國Sigma公司，貨號：A1933；BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)，CatNo. P00125，Lot No. 052319190910，碧云天生物技術(shù)有限公司；iNOS抗體，p-p44/42(ERK1/2) (Thr202/Tyr204)抗體，美國CST公司，貨號：4370S；p-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)抗體，美國CST公司，貨號：9211S；p-NF-κB p65 (Ser536)抗體，美國Abcam公司，貨號：3033S；IκBα (E130)抗體，美國Abcam公司，貨號：ab32518；Hoechst 33342核染料，日本東仁化學(xué)公司，貨號：H342；熒光二抗Alexa Fluor 546 goat anti-mouse IgG或Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit IgG，Thermo Fischer Scientific 公司，貨號：A11035或A11030。RNAprep pure Cell kit(DP430)，Lot U9012；FastKing gDNA Dispelling RT SuperMix(KR118)，Lot W9318；SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)(FP205)，Lot U9208，購自天根生物技術(shù)有限公司。COX Fluorescent Inhibitor Screening Assay Kit，批號：0520422，購自Cayman Chemical Company。

1.2 儀器CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，Thermo Fischer Scientific公司，型號：LS-C0150；多功能酶標(biāo)儀，瑞士TECAN公司，型號：SPARKTM20M；Molecular Devices，Spectramax M2, CA, USA；Cellomics Arrayscan高內(nèi)涵細(xì)胞分析系統(tǒng)，Thermo Fischer Scientific公司。

1.3 方法

1.3.1細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞活力的檢測 RAW 264.7細(xì)胞(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)，購自國家實驗細(xì)胞資源共享服務(wù)平臺(China infrastructure of cell line resource)，細(xì)胞采用含10%胎牛血清，100 kU·L-1青霉素和鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是飽和濕度，37 ℃，5% CO2。細(xì)胞呈對數(shù)增長時進(jìn)行傳代，調(diào)整細(xì)胞濃度至2×108個·L-1，接種100 μL于96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞達(dá)到80% 融合時撤去血清繼續(xù)培養(yǎng)12 h，然后加入AESN(終濃度為100、20、4、0.8、0.16 μmol·L-1)和陽性對照藥吲哚美辛(INDO，10 μmol·L-1)孵育48 h，培養(yǎng)結(jié)束時每孔加入MTS溶液10 μL，于37 ℃繼續(xù)孵育1.5 h，采用微孔板檢測儀M2檢測490 nm處的光吸收值。

細(xì)胞存活率/%=(ODsample-ODblank)/(ODcontrol-ODblank)×100%。

1.3.2AESN對細(xì)胞上清中炎癥介質(zhì)一氧化氮(NO)水平的影響 將RAW 264.7細(xì)胞以2×104個/孔的密度接種在96孔板中，孵育18 h后換上無血清的RPMI 1640培養(yǎng)液。設(shè)空白對照組，LPS模型組，AESN給藥組(20、4、0.8、0.16 μmol·L-1)以及陽性對照藥吲哚美辛(INDO，10 μmol·L-1)組，給藥組分別加入相應(yīng)濃度的AESN和INDO，空白對照組與模型組加入同體積無血清RPMI 1640培養(yǎng)液，孵育1 h后，除空白對照組外，各組加入終濃度為1 mg·L-1的LPS繼續(xù)孵育24 h，培養(yǎng)結(jié)束時取100 μL上清，參照文獻(xiàn)[6]將細(xì)胞上清與Griess試劑等體積混合，10 min后檢測OD540的值。

1.3.3AESN對炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β釋放的影響 將RAW 264.7細(xì)胞以2×104個/孔的密度接種在96孔板，分組、加藥及加LPS同“1.3.2”，加入LPS孵育24 h后，收集細(xì)胞上清，按照ELISA試劑盒說明書的方法檢測TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。

1.3.4AESN對iNOS蛋白表達(dá)的影響 細(xì)胞接種、分組及給藥同“1.3.2”，藥物孵育1 h后，除空白對照組外，每孔加入終濃度為1 mg·L-1的LPS繼續(xù)孵育24 h，孵育結(jié)束棄去上清，按照100 μL/孔加入4%多聚甲醛室溫固定20 min，棄去，并用PBS清洗3次；再按照100 μL/孔加入0.25% Triton X-100打孔液室溫作用15 min，PBS清洗3次；再加入100 μL/孔3% BSA封閉液封閉45 min后，棄去封閉液，加入Anti-iNOS抗體(1 ∶1 000稀釋)，4 ℃孵育過夜，次日用PBS清洗3次，加入含Hochest 33342的山羊抗兔熒光二抗(1 ∶800稀釋)，室溫避光孵育2 h，PBS清洗3次，于Cellomics Arrayscan高內(nèi)涵細(xì)胞分析系統(tǒng)檢測分析。

1.3.5AESN對NF-κB通路、MAPK信號通路的影響 細(xì)胞接種、分組同“1.3.2”，提前加入化合物AESN(0.16、0.8、4、20 μmol·L-1)和陽性藥吲哚美辛(10 μmol·L-1)孵育4 h，其它組別平行加入10 μL/孔PBS；向細(xì)胞中加入終濃度1 mg·L-1LPS孵育15 min檢測IκBα的降解、孵育30 min檢測p-p65核內(nèi)表達(dá)，孵育45 min檢測p-p38、p-ERK1/2核內(nèi)的表達(dá)。細(xì)胞處理結(jié)束后，按照100 μL/孔加入4%多聚甲醛室溫固定20 min，棄去并用PBS清洗3次；再按照100 μL/孔加入0.25 % Triton X-100打孔液室溫作用15 min，PBS清洗3次；再加入100 μL/孔3% BSA封閉液封閉45 min后，棄去封閉液，分別加入：anti-IκBα抗體、anti-p-p65抗體、anti-p-p38抗體、anti-p-ERK1/2抗體，以上抗體均按1：1 000稀釋，4 ℃孵育過夜；次日用PBS清洗3次后加入含Hochest 33342的山羊抗兔(或抗鼠)熒光二抗(1：800稀釋)，室溫避光孵育2 h，PBS清洗3次，于Cellomics Arrayscan高內(nèi)涵細(xì)胞分析系統(tǒng)檢測分析。

1.3.6AESN對TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA表達(dá)的影響 將處于對數(shù)生長期的RAW 264.7細(xì)胞按照2×106個/皿接種于直徑為6 cm的一次性無菌平皿中，設(shè)空白對照組，LPS模型組，AESN給藥組(20、4、0.8、0.16 μmol·L-1)，以及陽性對照藥吲哚美辛(INDO，10 μmol·L-1)組，每組每個濃度3個重復(fù)，藥物孵育1 h后，除空白對照組外，各組加入終濃度為1 mg·L-1的LPS繼續(xù)孵育24 h，棄上清，按照RNA prep pure Cell kit(DP430)培養(yǎng)細(xì)胞總RNA提取試劑盒說明書的方法提取細(xì)胞總RNA，對提取的總RNA樣品進(jìn)行定量并保存于-80 ℃。按照FastKing gDNA Dispelling RT SuperMix(KR118)，cDNA第一鏈合成預(yù)混試劑合成cDNA并保存于-20 ℃。設(shè)計并合成特異引物如Tab 1。

使用SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)(FP205)熒光定量預(yù)混試劑，反應(yīng)體系為20 μL。反應(yīng)條件為：預(yù)變性95 ℃，15 min；40 cycles of：變性95 ℃，10 s；退火60 ℃，20 s；延伸72 ℃，32 s。qRT-PCR相對定量結(jié)果計算方法采用SybrGreen ER熒光檢測系統(tǒng)，對目的基因進(jìn)行相對定量分析，采用看家基因β-actin作為內(nèi)參照對Ct值進(jìn)行歸一化處理，基因表達(dá)差異計算方法采用2-△△Ct法。

1.3.7AESN對COX-1、COX-2酶活性的影響 AESN對COX-1、COX-2活性的抑制作用按照試劑盒COX fluorescent inhibitor screening assay kit方法進(jìn)行操作，并計算半數(shù)抑制濃度IC50。

2 結(jié)果

2.1 AESN對RAW264.7細(xì)胞活力的影響由Fig 1可見，AESN孵育48 h后，與空白對照組細(xì)胞活力相比較，AESN在0.16～20 μmol·L-1以及10 μmol·L-1吲哚美辛均未出現(xiàn)細(xì)胞增殖或毒性作用，僅在100 μmol·L-1出現(xiàn)明顯的細(xì)胞毒性作用(P<0.01)。因此，后續(xù)實驗選定0.16、0.8、4、20 μmol·L-1作為AESN的實驗劑量。

Fig 1 Effects of AESN on cell

2.2 AESN對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的影響實驗結(jié)果顯示，給予1 mg·L-1LPS刺激24 h后，與Control組相比，LPS模型組NO、TNF-α、IL-6、IL-1β分泌量明顯增加(Fig 2 A～D，P<0.01)，AESN各劑量給藥組對NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌量均具有明顯抑制作用且呈劑量依賴性(Fig 2 A～D，P<0.05,P<0.01)。陽性對照藥吲哚美辛(10 μmol·L-1)也能夠明顯抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌(Fig 2 A～D，P<0.05或P<0.01)，作用不如AESN的20 μmol·L-1劑量組明顯。

2.3 AESN對TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA表達(dá)的影響實驗結(jié)果顯示，給予1 mg·L-1LPS刺激24 h后，與Control組相比，LPS模型組TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA表達(dá)水平明顯增加(Fig 3 A～D，P<0.01)，AESN各劑量給藥組對TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS mRNA表達(dá)水平均具有明顯抑制作用(Fig 3 A～D，P<0.01)。陽性對照藥吲哚美辛(10 μmol·L-1)也能夠明顯抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的mRNA表達(dá)水平(Fig 3 A～D，P<0.05,P<0.01)，作用不如AESN劑量組明顯。

2.4 AESN對iNOS蛋白表達(dá)的影響由Fig 4可見，給予1 mg·L-1LPS刺激24 h后，與Control組相比，LPS模型組iNOS蛋白熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.01)，AESN各劑量給藥組均能明顯減弱iNOS蛋白表達(dá)熒光強(qiáng)度(P<0.01)。陽性對照藥吲哚美辛(10 μmol·L-1)也能夠明顯減弱iNOS蛋白的熒光強(qiáng)度(P<0.01)，作用不如AESN 20 μmol·L-1劑量組明顯。

Fig 4 Effects of AESN on iNOS protein expression induced by LPS in RAW 264.7 cells

2.5 AESN對NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)作用由Fig 5可見，給予1 mg·L-1LPS刺激15 min時，LPS模型組IκBα蛋白與Control組相比顯著降解(Fig 5B、D，P<0.01)，LPS刺激30 min時，LPS模型組p-p65核轉(zhuǎn)位明顯增加(Fig 5A、C，P<0.01)，而AESN在0.16～20 μmol·L-1對IκBα蛋白降解和p-p65核轉(zhuǎn)位具有明顯抑制作用(P<0.01)，并呈劑量依賴性；吲哚美辛(10 μmol·L-1)也能夠抑制IκBα降解及p-p65核轉(zhuǎn)位(P<0.01)，但作用不如AESN的20 μmol·L-1劑量組明顯。

2.6 AESN對MAPK信號通路的調(diào)節(jié)作用免疫熒光結(jié)果(Fig 6)顯示，給予1 mg·L-1LPS刺激45 min時，p-p38和p-ERK1/2核轉(zhuǎn)位明顯增加(P<0.01)，AESN在0.16～20 μmol·L-1對p-p38、p-ERK1/2核轉(zhuǎn)位具有明顯地抑制作用(P<0.01)，呈現(xiàn)劑量依賴性；陽性藥吲哚美辛(10 μmol·L-1)對p-p38、p-ERK1/2的核轉(zhuǎn)位也具有抑制作用(P<0.01)，作用不如AESN的20 μmol·L-1劑量組明顯。

2.7 AESN對COX-1、COX-2活性的影響由Tab 2可見，七葉內(nèi)酯在4～100 μmol·L-1濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性地抑制COX-1酶活性，對COX-1半數(shù)抑制濃度IC50為28.1 μmol·L-1。由Tab 3可見，七葉內(nèi)酯在0.8～20 μmol·L-1濃度范圍內(nèi)可呈劑量依賴性地抑制COX-2酶活性，對COX-2的半數(shù)抑制濃度IC50為2.3 μmol·L-1。

Tab 2 Effect of AESN on activity of

Tab 3 Effect of AESN on activity of

3 討論

炎癥反應(yīng)是一種復(fù)雜的防御反應(yīng)[6]，由多種細(xì)胞因子參與，適度的炎癥有利于機(jī)體健康，而過度的炎癥會引起不良反應(yīng)，從而導(dǎo)致疾病甚至死亡[7]。在免疫反應(yīng)發(fā)生過程中，巨噬細(xì)胞作為機(jī)體重要的免疫細(xì)胞和炎癥效應(yīng)細(xì)胞，在誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6-9]。脂多糖是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的重要組成部分，具有抗原性，當(dāng)革蘭氏陰性細(xì)菌崩裂時釋出，是很強(qiáng)的致熱原，近年來在動物和細(xì)胞實驗中被廣泛用來誘導(dǎo)炎癥的發(fā)生。LPS進(jìn)入機(jī)體后，可以被巨噬細(xì)胞的TLR4識別并結(jié)合，啟動細(xì)胞內(nèi)NF-κB、MAPK等信號通路，促使下游通路得到激發(fā)，導(dǎo)致多種炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、GM-CSF等以及炎癥介質(zhì)NO、PGE2過量表達(dá)和分泌，引起機(jī)體損傷[10-14]。因此，抑制巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子是緩解炎癥反應(yīng)的重要環(huán)節(jié)。此外，LPS刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量iNOS，iNOS與炎癥密切相關(guān)[10-11]，可誘導(dǎo)NO的產(chǎn)生，過量的NO將導(dǎo)致細(xì)胞損傷、組織壞死，進(jìn)而促進(jìn)炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展，而且其產(chǎn)生能活化自身的環(huán)氧合酶COX，其中COX-2是誘生型表達(dá)的酶，與炎癥性疾病關(guān)系密切[13]。因此，本研究選用LPS誘導(dǎo)小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞RAW264.7急性炎癥模型探討七葉內(nèi)酯的抗炎作用機(jī)制。

據(jù)報道[11-12]，目前已有許多中藥復(fù)方、單味中藥、中藥有效部位和有效成分均具有明顯的抗炎作用。本研究在確定天山堇菜七葉內(nèi)酯對RAW 264.7細(xì)胞安全濃度范圍的基礎(chǔ)上，從細(xì)胞、基因、蛋白水平深入探討其對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)，天山堇菜七葉內(nèi)酯可明顯降低LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β水平，明顯降低TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的mRNA表達(dá)水平，對iNOS的蛋白表達(dá)也具有明顯抑制作用，說明天山堇菜七葉內(nèi)酯具有較好的抗炎作用，其抗炎作用與抑制炎癥細(xì)胞因子的生成密切相關(guān)。

COX是花生四烯酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，是體外抗炎藥物篩選的重要靶點之一[14-16]。COX有3種同工酶，即：COX-1、COX-2、COX-3[14]。COX-1為結(jié)構(gòu)酶，主要起到內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定作用。COX-2為誘導(dǎo)酶，正常生理狀態(tài)下，COX-2活性極低，在相關(guān)因素誘導(dǎo)后被激活，它可以誘導(dǎo)促進(jìn)前列腺素等炎癥介質(zhì)的合成，介導(dǎo)炎癥與疼痛反應(yīng)，是炎癥發(fā)展過程中的關(guān)鍵酶之一[14-16]。本研究結(jié)果顯示，天山堇菜七葉內(nèi)酯可顯著抑制環(huán)氧酶COX-1的活性，其IC50為28.1 μmol·L-1，同時可明顯抑制環(huán)氧酶COX-2的活性，其IC50為2.25 μmol·L-1。由于COX-2與COX-1的IC50比值為0.08，比值在0.01～0.1區(qū)間范圍內(nèi)，則說明天山堇菜七葉內(nèi)酯對COX-2抑制的選擇性較強(qiáng)，可作為COX-2的選擇性抑制劑，從而抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展[15-16]，這也是七葉內(nèi)酯發(fā)揮抗炎作用的主要機(jī)制之一。

NF-κB是炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。靜息狀態(tài)下與其抑制物IκBα形成無活性的復(fù)合體存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)細(xì)胞受到LPS等刺激后其抑制物IκBα發(fā)生磷酸化降解，對NF-κB的抑制作用消失，NF-κB被激活，磷酸化后的NF-κB可轉(zhuǎn)至細(xì)胞核中促使下游基因轉(zhuǎn)錄，從而上調(diào)炎癥因子水平，加劇炎癥反應(yīng)[17]。本研究結(jié)果顯示，LPS 刺激RAW 264.7細(xì)胞15 min后，IκBα蛋白明顯降解，LPS刺激30 min后，p-p65核轉(zhuǎn)位明顯增加，細(xì)胞核中p-p65蛋白高表達(dá)，這與LPS刺激24 h后，NO、TNF-α，IL-6，IL-1β等炎癥因子的高表達(dá)是相一致的。而天山堇菜七葉內(nèi)酯對IκBα降解、p-p65核轉(zhuǎn)位具有明顯抑制作用，從而抑制下游炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，表明天山堇菜七葉內(nèi)酯發(fā)揮抗炎作用與抑制NF-κB信號通路密切相關(guān)。MAPKs信號通路也是經(jīng)典的炎癥信號通路之一，主要由p38、ERK1/2和JNK 3條信號通路組成，是參與炎癥反應(yīng)的主要組成部分[18]。當(dāng)細(xì)胞受LPS刺激后，p38、ERK1/2和JNK蛋白被磷酸化，轉(zhuǎn)移入核調(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)一步促進(jìn)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和翻譯，加劇炎癥反應(yīng)的程度。本研究發(fā)現(xiàn)，LPS 刺激RAW 264.7細(xì)胞45 min后，p-p38和p-ERK1/2核轉(zhuǎn)位明顯增加，即p38、ERK1/2蛋白磷酸化水平顯著升高，而天山堇菜七葉內(nèi)酯對p-p38、p-ERK1/2核轉(zhuǎn)位具有明顯地抑制作用，蛋白磷酸化水平顯著下降，并呈現(xiàn)濃度依賴性，提示天山堇菜七葉內(nèi)酯可通過抑制MAPKs信號通路，進(jìn)而抑制炎癥的繼續(xù)發(fā)展。

綜上所述，天山堇菜七葉內(nèi)酯具有較好的抗炎作用，其發(fā)揮抗炎作用的機(jī)制與抑制NF-κB/MAPK信號通路密切相關(guān)。