• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      大黃魚TRAF6的克隆及表達分析

      2022-09-14 04:44:36陳英王藝?yán)?/span>鄒鵬飛
      生物技術(shù)通報 2022年8期
      關(guān)鍵詞:大黃魚內(nèi)含子外顯子

      陳英 王藝?yán)?鄒鵬飛

      (集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海海水健康養(yǎng)殖重點實驗室,廈門 361021)

      腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(tumor necrosis factor receptor associated factors,TRAFs)是Toll樣受體(toll-like receptors,TLRs)、NOD樣受體(NODlike receptors,NLRs)、RIG-I樣 受 體(RIG-I like receptors,RLRs)介導(dǎo)信號通路的重要接頭蛋白,在宿主的固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中具有重要作用[1-5]。TRAFs可以介導(dǎo)核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和干擾素調(diào)節(jié)因子(interferon regulatory factor,IRF)的激活,調(diào)控宿主的免疫應(yīng)答與炎癥反應(yīng)[1,3]。

      目前在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)了7個TRAF(TRAF1-7)成員,其共同特征是都有高度保守的C-末端TRAF結(jié) 構(gòu) 域(除 了TRAF7在C-末 端 包 含7個WD40)[6]。TRAF結(jié)構(gòu)域分為TRAF-N(coiled-coil domain)和TRAF-C(beta-sandwich domain,MATH domain),主要參與蛋白質(zhì)之間的相互作用[7]。TRAFs(TRAF1除外)含有一個額外的N端結(jié)構(gòu)域,由一個環(huán)指結(jié)構(gòu)域(RING finger domain)和若干個鋅指結(jié)構(gòu)域(zinc fingers domain)組成[1]。TRAF2、TRAF3、TRAF5和TRAF6的環(huán)指結(jié)構(gòu)域具有E3泛素連接酶活性,可通過K63關(guān)聯(lián)的多聚泛素化介導(dǎo)蛋白質(zhì)泛素化,激活下游信號通路[8-12]。

      TRAF6蛋白作為TRAF家族的重要成員,參與腫瘤壞死因子受體超家族信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,也在IL-1/TLR 家族信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程發(fā)揮重要作用,因而獲得廣泛關(guān)注[13-16]。哺乳動物中的相關(guān)研究表明,一些TLR家族成員(如TLR3/4)可通過與β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域接頭蛋白(Toll/interleukin-1 receptor(TIR)domain containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)相互作用,招募并激活TRAF3和TRAF6[17]。TLR家族其他成員(TLR1/2/4/5/6/7/8/9)和白介素-1受體(interleukin-1 receptor,IL-1R)超家族成員(IL-1/18/33R)可通過招募接頭蛋白髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88),激活I(lǐng)L-1受體相關(guān)激酶1或4(interleukin-1 receptor associated kinase-1/4,IRAK1/4),從而激活TRAF6[18-20]。同時,TRAF6還可以通過TLR7/8/9-MyD88途徑激活下游IRF7[21-22]。

      近年來,TRAF6的同源基因在硬骨魚類中被克隆和鑒定,包括青魚(Mylophyngodon piceus)[23]、花 鱸(Lateolabrax maculatus)[24]、草 魚(Ctenopharyngodon idellus)[25]、 鯽(Carassius auratus)[26]、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[27]等。其中對青魚相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)TRAF6(bcTRAF6)在RIG-I/MAVS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起正調(diào)控作用[23];花鱸TRAF6可以抑制哈氏桿菌(Vibrio harveyi)和無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)誘導(dǎo)的細胞凋亡[24];草魚TRAF6可與IRF5相互作用,激活I(lǐng)RF5并誘導(dǎo)IFN1表達上調(diào)[25];鯽TRAF6的mRNA表達水平在聚肌苷酸胞苷酸(Poly I:C)、鞭毛蛋白(flagellin)和嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激下顯著上調(diào)[26];而虹鱒TRAF6的基因沉默顯著抑制了LPS誘導(dǎo)的MAPKs和NF-κB相關(guān)信號通路的激活[27]。上述研究結(jié)果共同說明硬骨魚類TRAF6在響應(yīng)病原入侵、激活免疫相關(guān)信號通路、啟動機體免疫應(yīng)答等過程中的重要作用。

      大黃魚(Larimichthys crocea)屬硬骨魚綱鱸形目石首魚科黃魚屬,是我國東部和南部沿海地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類[28]。近年來,隨著網(wǎng)箱養(yǎng)殖密度和養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大,養(yǎng)殖條件惡化,經(jīng)常面臨著刺激隱核蟲病、弧菌病、假單胞菌病、黏孢子蟲病、虹彩病毒病等疾病的侵襲[29-32]。然而,目前有關(guān)大黃魚的病原識別及免疫激活的相關(guān)基礎(chǔ)研究依然較匱乏,有必要開展大黃魚基礎(chǔ)免疫學(xué)的相關(guān)研究。因此,本研究以大黃魚為實驗對象,克隆了大黃魚TRAF6基因,利用GFP熒光示蹤質(zhì)粒揭示了其亞細胞定位,同時通過熒光定量PCR檢測了TRAF6在健康大黃魚各組織以及在不同病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)刺激下的表達水平,初步解析了TRAF6在抗感染免疫中的作用。研究結(jié)果將為深入解析TRAF6在宿主固有免疫應(yīng)答中的功能及其介導(dǎo)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的分子機制提供參考。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      選取健康大黃魚(體長18 cm±1.5 cm,體重60 g±15 g,8月齡),購自福建寧德富發(fā)水產(chǎn)有限公司。實驗前,大黃魚在25℃的循環(huán)海水系統(tǒng)中暫養(yǎng)兩周。

      實驗所用人胚腎細胞系(HEK 293T)購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心(武漢大學(xué)保藏中心),使用含10%胎牛血清(Invitrogen-Gibco)、100 U/mL青霉素(P)和鏈霉素(S)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM),培養(yǎng)于37℃、5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中。

      1.2 方法

      1.2.1 生物信息學(xué)分析 利用BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)對核苷酸和蛋白質(zhì)序列進行分析;通過ORF finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)預(yù)測基因的開放閱讀框(Open Reading Frame,ORF);利用在線軟件(http://www.bio-soft.net/sms/index.HTML)推算蛋白質(zhì)分子量;利用NCBI基因組數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/)檢索脊椎動物TRAF6的基因序列,進一步使用Splign(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sutils/splign/splign.cgi)對基因結(jié)構(gòu)進行分析。

      1.2.2 體內(nèi)免疫刺激 為研究TRAF6在健康大黃魚體內(nèi)的組織分布情況,將6條健康大黃魚用0.01%丁香酚麻醉后,取鰓、肝、脾、頭腎、體腎、腸、心、腦、皮膚和肌肉,將其分別保存于RNAlater中,同時取血液保存于Trizol中,用于后續(xù)總RNA的提取。為了研究大黃魚TRAF6在不同免疫刺激下的表達特征,將魚分成五組并分別腹腔注射變形假單胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)懸浮液(5 × 105CFU/mL)、脂多糖(LPS)(L3024,Sigma,來自大腸桿菌 O111:B4,0.5 mg/mL)、肽聚糖(PGN)(69554,來自枯草芽孢桿菌,Sigma,1 mg/mL)、聚肌胞苷酸(Poly I:C,P9582,Sigma,1 mg/mL)和PBS溶液(對照組)各100 μL。注射6、12和24 h后每組隨機選取6尾大黃魚,分別采集鰓、頭腎、脾、腸、血液組織以備后續(xù)總RNA的提取等實驗。

      1.2.3 總RNA提取和cDNA合成 使用Eastep?Super總RNA提 取 試 劑 盒(Promega)從 上 述 器官/組織樣本中取綠豆粒大小組織塊(20-40 mg)用于提取總RNA,其中,血液樣品取300 μL使用TIANGEN?RNAsimple總RNA提取試劑盒(天根生化科技(北京)有限公司)提取總RNA。用瓊脂糖凝膠電泳和OD260/280分析測定RNA的質(zhì)量和濃度。每個樣品取1 μg總RNA與不含RNase的DNase I(Thermo ScientificTM)反應(yīng),隨后使用第一鏈cDNA合成試劑盒(RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit,#K1622,Thermo ScientificTM)將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA并保存于-80℃冰箱中,用于目的基因克隆或?qū)崟r熒光定量PCR分析。

      1.2.4 實時熒光定量PCR 使用羅氏LightCycler?480實時熒光定量PCR儀,Go Taq?qPCR Master Mix試劑(Promega,Madison,美國),在384孔板上進行實時定量PCR實驗。反應(yīng)體系為10 μL:2 ×SYBR Green Master Mix 5 μL,正 向 引 物0.5 μL(4 μmol/L),反向引物0.5 μL(4 μmol/L),cDNA模板1 μL(100 ng/μL),無核酸酶水3 μL。PCR反應(yīng)條件如下:95℃預(yù)變性5 min;95℃變性20 s,58℃退火20 s,72℃延伸15 s,在81℃進行讀板,共40個循環(huán);72℃延伸10 min,16℃反應(yīng)5 min。將靶基因的相對表達量使用內(nèi)參基因β-actin進行校正,并使用比較Ct方法(2-??Ct)進行分析。采用t檢驗確定各處理組間的顯著性差異水平,其中*表示差異顯著P< 0.05,**表示差異極顯著P< 0.01。引物序列見表1。

      1.2.5 質(zhì)粒構(gòu)建 克隆大黃魚TRAF6的ORF序列并構(gòu)建至pMD19-T載體上測序鑒定,使用限制性內(nèi)切酶將含有目的基因的pMD19-T質(zhì)粒及真核表達質(zhì)粒pTurboGFP-N進行酶切,并將大黃魚TRAF6的ORF序列插入至pTurboGFP-N載體中,構(gòu)建大黃魚TRAF6的GFP熒光示蹤質(zhì)粒。上述質(zhì)粒構(gòu)建體均通過測序驗證,所用引物序列見表1。

      表1 本研究所用引物Table 1 Primers used in this study

      1.2.6 亞細胞定位分析 將HEK 293T細胞(每孔2× 105個細胞)傳代培養(yǎng)于6孔板中(已放入細胞爬片)過夜,使用Lipofectamine?3000 轉(zhuǎn)染試劑將5 μg pTurbo-TRAF6-GFP和pTurboGFP-N(對照)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染于HEK 293T細胞。轉(zhuǎn)染約24 h后,細胞爬片用PBS洗滌并用4%多聚甲醛室溫固定10 min,再加入TritonX-100透化處理10 min,繼續(xù)用PBS洗滌一次后用4, 6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色封片2 h。使用激光共聚焦顯微鏡(德國萊卡)觀察細胞并拍照。

      2 結(jié)果

      2.1 大黃魚TRAF6基因的克隆與序列分析

      根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的序列信息(GenBank accession No. XM_019273436.2),利 用Primer 5設(shè)計特異性引物,以大黃魚脾臟cDNA為模板克隆并獲得大黃魚TRAF6的ORF全長,命名為Lc-TRAF6(GenBank accession No. OL333599)。Lc-TRAF6ORF由1 725個核苷酸組成,編碼574個氨基酸(aa)。蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)Lc-TRAF6由N端RING finger結(jié)構(gòu)域(80-118 aa)、zinc fingers結(jié)構(gòu)域(138-187 aa,214-271 aa),coiled-coil結(jié)構(gòu)域(361-398 aa)和C端MATH-TRAF6結(jié)構(gòu)域(405-530 aa)構(gòu)成(圖1)。

      圖1 大黃魚TRAF6與其他脊椎動物TRAF6氨基酸序列比對Fig. 1 Multiple alignment of Lc-TRAF6 with TRAF6 in other vertebrates

      將Lc-TRAF6與其他脊椎動物TRAF6氨基酸序列進行比較分析,結(jié)果顯示,不同魚類之間的TRAF6相似性較高,其中Lc-TRAF6的氨基酸序列與斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)TRAF6的相似性為94%,與紅鰭東方鲀(Takifugu rubripes)的相似性為87%,與虹鱒的相似性為78%,與草魚的相似性為75%,與斑馬魚(Denio rerio)和斑點叉尾鮰(Ictalurus punetaus)的相似性為74%。而與鳥類和哺乳動物TRAF6相比,相似性水平有所下降,與 雞(Gallus gallus)、人(Homo sapiens)和 小 鼠(Mus musculus)的相似性分別為66%、65%和64%(表2)。

      表2 Lc-TRAF6與其它脊椎動物TRAF6氨基酸序列相似性比較Table 2 Comparison of amino acid sequence similarity between Lc-TRAF6 and TRAF6 in other vertebrates

      將Lc-TRAF6與紅鰭東方鲀、斑馬魚、雞、小鼠和人TRAF6的cDNA序列與其對應(yīng)的基因序列進行比較,對其基因的外顯子和內(nèi)含子組成進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Lc-TRAF6基因序列由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成,其外顯子與內(nèi)含子結(jié)構(gòu)與紅鰭東方鲀最為相似,而斑馬魚與鳥類和哺乳動物基因組結(jié)構(gòu)更為相似,均包含6個外顯子和5個內(nèi)含子(圖2)。在所檢測的物種中,紅鰭東方鲀TRAF6基因序列長度最短,為2 700 bp,小鼠最長,為14 395 bp;脊椎動物TRAF6基因在第2-5個外顯子十分保守,其長度分別為151、159、72和78 bp,但內(nèi)含子差異很大,其中最長的內(nèi)含子有4 860 bp,而最短的內(nèi)含子僅有71 bp(圖2)。

      圖2 Lc-TRAF6與其他脊椎動物TRAF6基因結(jié)構(gòu)比較Fig.2 Genomic structure comparison of gene Lc-TRAF6 with TRAF6 in other vertebrates

      2.2 大黃魚TRAF6的亞細胞定位

      為了解析Lc-TRAF6的亞細胞定位,將GFP熒光示蹤質(zhì)粒pTurbo-TRAF6-GFP和pTurboGFP-N分別轉(zhuǎn)染HEK 293T細胞并用DAPI進行細胞核染色。激光共聚焦顯微鏡分析結(jié)果表明TRAF6-GFP融合蛋白主要分布在胞漿,且在靠近細胞核的部位呈現(xiàn)點狀聚集現(xiàn)象,轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pTurboGFP-N的細胞其GFP熒光蛋白在全細胞中均有分布(圖3)。

      圖3 Lc-TRAF6的亞細胞定位分析Fig.3 Subcellular localization analysis of Lc-TRAF6

      2.3 大黃魚TRAF6的表達分析

      通過實時熒光定量PCR技術(shù)檢測了Lc-TRAF6mRNA在健康大黃魚11種器官/組織中的表達情況。結(jié)果表明Lc-TRAF6mRNA在所有檢測器官/組織中普遍表達,但是在不同器官/組織中的Lc-TRAF6mRNA的表達水平存在差異,其中在血液中表達量最高,其次是鰓、肌肉、頭腎、脾、心、肝、腸、體腎、皮膚,在腦中表達量最低(圖4)。

      圖4 Lc-TRAF6的組織表達分析Fig. 4 Tissue expression analysis of Lc-TRAF6

      為了進一步解析Lc-TRAF6基因在宿主免疫反應(yīng)中的作用,我們通過實時熒光定量PCR技術(shù)檢測Lc-TRAF6在Poly I:C、LPS、PGN刺 激 下 和P.plecoglossicida感染后鰓、脾臟、頭腎、血液和腸中的表達情況。結(jié)果表明,Lc-TRAF6在Poly I:C刺激下其表達水平顯著上調(diào):鰓在刺激6 h時Lc-TRAF6的表達水平相較于對照組上調(diào)了2.5倍(圖5-A),脾在刺激12 h和24 h時Lc-TRAF6的表達水平相較于對照組分別上調(diào)了6.8倍和1.9倍(圖5-B),頭腎在6 h和12 h 時Lc-TRAF6的表達水平相較于對照組分別升高了2.8倍和3.2倍(圖5-C),腸在刺激24 h時Lc-TRAF6的表達水平相較于對照組上調(diào)了2.8倍(圖5-D),外周血中在刺激12 h時Lc-TRAF6的表達水平相較于對照組上調(diào)了3.0倍(圖5-E)。LPS 刺激能顯著誘導(dǎo)Lc-TRAF6的表達水平上調(diào):鰓在LPS刺激6 h時Lc-TRAF6的表達水平為對照組的1.9倍(圖5-A),脾在LPS刺激12 h時Lc-TRAF6的表達水平為對照組的4.0倍(圖5-B),在LPS刺激24 h時頭腎、腸和血表達水平較對照組分別高了1.9倍、2.2倍和2.0倍(圖5-C-E)。在 PGN感染刺激下,Lc-TRAF6的表達水平也顯著上調(diào):鰓和腸在刺激6 h時Lc-TRAF6的表達水平較對照組分別上調(diào)了1.8倍和2.2倍(圖5-A和5-D),頭腎在刺激12 h和24 h時Lc-TRAF6的表達水平較對照組分別上調(diào)1.8倍和1.6倍(圖5-C),脾和血在刺激12 h時Lc-TRAF6的表達水平較對照組分別上調(diào)3.9倍和4.2倍(圖5-B和5-E)。同時,在P. plecoglosicida感染刺激下也能顯著誘導(dǎo)大黃魚 TRAF6 表達上調(diào):鰓在刺激6 h時Lc-TRAF6表達水平是對照組的1.9倍(圖5-A),脾在12 h時Lc-TRAF6表達量為對照組的6.5倍,頭腎在24 h時Lc-TRAF6表達水平是對照組的1.8倍(圖5-C),腸組織在刺激6、12、24 h時Lc-TRAF6表達水平分別是對照組的2.8倍、2.2倍和1.9倍(圖5-D),外周血中刺激12 h 時Lc-TRAF6的表達量最高,為對照組的2.9倍(圖5-E)。此外,在不同病原相關(guān)分子模式刺激6 h時鰓中Lc-TRAF6表達量均上調(diào)(圖5-A);而脾臟和血液中Lc-TRAF6表達量峰值均出現(xiàn)在12 h時(圖5-B和5-E)。

      圖5 Poly I:C、LPS、PGN和P. plecoglossicida刺激下Lc-TRAF6的表達分析Fig. 5 Expression analysis of Lc-TRAF6 under Poly I:C,LPS,PGN,and P. plecoglossicida stimulation

      3 討論

      TRAF6是TLR信號通路中的關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,泛素化后的TRAF6激活TAK1,繼而使IKK和MAPK磷酸化,分別激活NF-κB和AP-1[33]。哺乳動物TRAF6包含4個保守結(jié)構(gòu)域,包括RING finger結(jié)構(gòu)域、一系列zinc finger結(jié)構(gòu)域、一個coiled-coil區(qū)域和一個MATH結(jié)構(gòu)域。與哺乳動物TRAF6相似,Lc-TRAF6也包含經(jīng)典結(jié)構(gòu)域,包括一個RING finger結(jié)構(gòu)域、兩個zinc finger結(jié)構(gòu)域、一個coiled-coil結(jié)構(gòu)域和一個MATH結(jié)構(gòu)域。

      TRAF6基因結(jié)構(gòu)分析表明,魚類TRAF6基因由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成,魚類和哺乳動物TRAF6基因外顯子的大小部分相似,同時斑馬魚和哺乳動物TRAF6基因只包括6個外顯子和5個內(nèi)含子,上述結(jié)果表明TRAF6基因可能在脊椎動物的演化中出現(xiàn)了差異。

      大黃魚TRAF6-GFP融合蛋白在HEK 293T細胞中主要分布于胞漿,且在靠近細胞核的部位呈現(xiàn)出點狀聚集的現(xiàn)象。其他硬骨魚類TRAF6的亞細胞定位結(jié)果顯示,斜帶石斑魚TRAF6-GFP融合蛋白的綠色熒光主要分布在人宮頸癌細胞(HeLa)細胞質(zhì)中,未見亮綠色斑點[12]。草魚TRAF6-GFP位于草魚腎細胞(Ctenopharyngodon idellakidney cell line,CIK)細胞質(zhì)中,細胞核周圍由亮綠色斑點包圍[25]?;|TRAF6-GFP融合蛋白主要分布在HEK 293T細胞質(zhì)中,細胞核周圍也可見亮綠色斑點[24],與大黃魚TRAF6-GFP分布情況極為相似,提示硬骨魚類TRAF6可能具有結(jié)合囊泡或形成聚集體的機制[34]。

      大黃魚TRAF6在不同組織和器官中廣泛表達,其中在血液中表達量最高,其次是鰓、脾、頭腎等,在腦中表達最低。其他硬骨魚類TRAF6表達分析結(jié)果顯示,TRAF6分別在草魚頭腎[35]、鯽肌肉[26]、尼羅羅非魚脾臟[36]、虹鱒和青魚肝臟[27,37]表達量最高。上述結(jié)果表明硬骨魚類TRAF6的組織表達特征可能因物種不同而存在一定的差異。

      此外,大黃魚TRAF6的表達水平在Poly I:C、LPS、PGN和P. plecoglossicida刺激下均顯著上調(diào),且在脾、頭腎、腸、鰓和血液中的表達變化因免疫刺激和器官/組織的不同而存在差異。其他硬骨魚類中的相關(guān)研究顯示,花鱸TRAF6的表達水平在Poly I:C刺激和赤點石斑魚神經(jīng)壞死病毒(red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)感 染 后 顯著上調(diào)[38],鯽TRAF6在Poly I:C、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后其表達水平顯著上調(diào)[26],在小瓜蟲(Ichthyophthirius multifiliis)感染后,草魚TRAF6在皮膚、鰓、頭腎和脾臟中的表達水平均顯著上調(diào)[35]。上述結(jié)果表明硬骨魚類TRAF6參與了宿主的免疫反應(yīng),特別是在宿主響應(yīng)寄生蟲、細菌和病毒等病原入侵的過程中具有重要作用。

      值得注意的是,大黃魚TRAF6在鰓和脾臟組織中響應(yīng)不同PAMPs刺激的時間不盡相同。其中,鰓中TRAF6的表達水平在Poly I:C、LPS、PGN和P.plecoglossicida刺激6 h時其表達水平顯著上調(diào),表明鰓可能參與了病原體入侵的早期反應(yīng)。鰓是魚與外界密切接觸的黏膜器官,鰓相關(guān)淋巴組織(gillassociated lymphiof tissues,GIALT)中富含免疫分子和免疫效應(yīng)細胞,其中免疫分子包括抗菌肽、急性反應(yīng)物質(zhì)等,免疫效應(yīng)細胞包括淋巴細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞和抗體分泌細胞等[39-40]。當(dāng)機體被病原刺激后,鰓相關(guān)淋巴組織會啟動免疫細胞及免疫分子參與免疫反應(yīng),誘導(dǎo)TRAF6等免疫相關(guān)信號分子的表達,激活免疫相關(guān)信號通路。而脾臟中TRAF6表達水平在不同PAMPs刺激12 h時達到峰值,且脾臟中TRAF6的表達上調(diào)幅度均大于鰓中,表明脾臟可能主要參與了病原體入侵的中期反應(yīng),這與鯉感染嗜水氣單胞菌12 h時TRAF6基因的表達模式相似[41]。

      4 結(jié)論

      大黃魚TRAF6基因ORF全長1 725 bp,編碼一個含574 aa的蛋白,由RING finger結(jié)構(gòu)域、兩個zinc finger結(jié)構(gòu)域、coiled-coil結(jié)構(gòu)域和MATHTRAF6結(jié)構(gòu)域組成。大黃魚TRAF6主要分布在細胞質(zhì)中,且在細胞核周圍存在點狀聚集。大黃魚TRAF6廣泛表達于健康大黃魚中不同器官/組織中,在血液中表達水平最高,在腦中最低;在Poly I:C、LPS、PGN刺激和P. plecoglossicida感染下黏膜免疫組織(鰓和腸)、外周免疫組織(脾和頭腎)和血液中TRAF6表達水平顯著上調(diào),表明大黃魚TRAF6參與宿主的免疫應(yīng)答。

      猜你喜歡
      大黃魚內(nèi)含子外顯子
      外顯子跳躍模式中組蛋白修飾的組合模式分析
      線粒體核糖體蛋白基因中內(nèi)含子序列間匹配特性分析
      外顯子組測序助力產(chǎn)前診斷胎兒骨骼發(fā)育不良
      28元/斤的輝煌不再!如今大黃魚深陷價格“泥沼”,休漁期或初現(xiàn)曙光
      不同方向內(nèi)含子對重組CHO細胞中神經(jīng)生長因子表達的影響
      更 正
      外顯子組測序助力產(chǎn)前診斷胎兒骨骼發(fā)育不良
      內(nèi)含子的特異性識別與選擇性剪切*
      寧德迎來大黃魚豐收季
      膳食鋅對飼料引起的大黃魚銅中毒癥的保護作用
      飼料博覽(2016年5期)2016-04-05 14:30:30
      昌吉市| 留坝县| 佳木斯市| 公安县| 昭苏县| 衡水市| 时尚| 唐山市| 彰武县| 始兴县| 涟水县| 马鞍山市| 休宁县| 临海市| 石狮市| 文安县| 富川| 彭阳县| 海晏县| 泸西县| 荆州市| 富宁县| 东源县| 雅江县| 宣恩县| 郁南县| 洪雅县| 贵溪市| 泸西县| 文水县| 阿克苏市| 巴中市| 东海县| 临清市| 含山县| 大化| 上杭县| 罗江县| 兰西县| 纳雍县| 偏关县|