孫萬奎，胡 冰

(涼州區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心，甘肅 武威 733000)

本試驗選取乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺聯(lián)合造模的方法，通過測定不同組小鼠給藥前后體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)及全血中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的含量，進而分析生當(dāng)歸水煎液的補血作用及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

當(dāng)歸由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)提供。

1.2 藥物、試劑

環(huán)磷酰胺(注射型)、乙酰苯肼、山東阿膠漿、雙蒸水、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒(南京建成)等。

1.3 實驗器械與儀器

小鼠代謝籠、剖檢常用器械、血細(xì)胞全自動分析儀、超聲波清洗機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、分析天平、電熱套、離心機、燒杯、圓底燒瓶、電子天平、冰箱(海爾)、移液槍等。

1.4 動物

清潔級雄性昆明小鼠80只，每組20只，體重20±2 g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)提供。

2 實驗方法

2.1 當(dāng)歸水煎液的制備

生當(dāng)歸25 g，加入2倍蒸餾水，浸泡2 h，然后加熱煮沸2次，1 h/次，混合兩次水煎液，紗布過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮為0.5 g生藥/mL，即濃縮到50 mL。

按此方法制備150 mL水煎液。

2.2 分組與造模

實驗小鼠隨機分為4組：正常對照組、陽性對照組(0.4 mL/20 g，每隔24 h灌阿膠漿1次)、模型組、生當(dāng)歸水煎液組，每組20只小鼠。生當(dāng)歸水煎液組劑量均為10 g/kg(按生藥量計算，每日一次，每只小鼠早上灌胃0.4 mL)，模型組小鼠和正常對照組均灌給相同量的蒸餾水，每24 h一次，連續(xù)9 d。模型組、陽性對照組、生當(dāng)歸水煎液組在灌藥的第2天和第5天注射(皮下)乙酰苯肼生理鹽水溶液20 mg/kg、40 mg/kg，從第5天起,每天注射(腹腔)環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液40 mg/kg，連續(xù)注射(腹腔)4 d。正常對照組同時注射相同量的生理鹽水。

2.3 血液的采集、檢測及免疫機能的檢測

2.3.1 血液的采集 各組于最后一次給藥24 h后，摘除眼球取血同時收集血液，并在標(biāo)記后按照葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒進行檢測。

2.3.2 血液中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒檢測 血液在標(biāo)記后按照葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒進行檢測。

2.3.3 免疫器官的采集及機能檢測 小鼠用脫頸椎法處死，然后采集脾臟和胸腺并稱取重量，計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，脾臟指數(shù)=脾重(mg)/鼠重(g)×10；胸腺指數(shù)=胸腺重(mg)/鼠重(g)×10。

2.3.4 數(shù)據(jù)處理 用Spss17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析，各組數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，比較各組間差異的顯著性。

3 結(jié)果與分析

3.1 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶結(jié)果及分析

按上述方法測定其葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的含量，結(jié)果見表1，圖1。從表1、圖1可以看出，與正常組比較，模型組高鐵血紅蛋白還原率明顯降低，具有顯著差異(P<0.05)，而正常血紅蛋白是亞鐵血紅蛋白，可被氧化成為高鐵血紅蛋白，當(dāng)G-6-PD的含量正常時，通過戊糖旁路形成的NADPH可作為輔酶，在遞氫體參與下，高鐵血紅蛋白被還原成血紅蛋白。但紅細(xì)胞內(nèi)缺少G-6-PD時，高鐵血紅蛋白不能被還原，由此可以說明環(huán)磷酰胺和乙酰苯肼?lián)p傷小鼠血液系統(tǒng)較明顯，使得小鼠血虛，進一步說明血虛小鼠建模是正確的。相比較模型組，陽性對照組與生當(dāng)歸水煎液組小鼠的高鐵血紅蛋白還原率明顯升高，特別是生當(dāng)歸水煎液組具有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P<0.05)，表明生當(dāng)歸水煎液可以顯著改善乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺對小鼠血液的破壞作用，具有一定的補血功效。

表1 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶檢測結(jié)果

圖1 高鐵血紅蛋白還原率

3.2 不同組小鼠的體重和臟器指數(shù)的結(jié)果

從表2、圖 2可知，在聯(lián)合造模之后，模型組、陽性對照組、生當(dāng)歸水煎液組的小鼠都出現(xiàn)了不同程度的血虛證，外觀表現(xiàn)為：精神不振，聚堆不愿走動，乏力疲倦，食欲減退，被毛無光澤，耳部皮膚蒼白，小鼠血虛證表現(xiàn)最明顯的為模型組，隨給藥天數(shù)的增加，模型組小鼠恢復(fù)較慢，其它兩組逐漸恢復(fù)，回復(fù)較明顯的為生當(dāng)歸水煎液組。由表3可見，模型組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)降低，與正常組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明小鼠血虛模型建立成功;相比較模型組，陽性對照組和生當(dāng)歸水煎液組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)升高，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，表明生當(dāng)歸水煎液可以改善血虛小鼠體重及免疫器官功能的損傷作用。

表2 各組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)檢測結(jié)果

圖2 各組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)檢測結(jié)果

4 討論

近年來，關(guān)于血虛證動物模型研究較多，造模方法也各不相同 。實驗中小鼠給予環(huán)磷酰胺和乙酰苯肼聯(lián)合造模后，模型組、陽性對照組、生當(dāng)歸水煎液組的恢復(fù)主觀情況，即小鼠的外觀表現(xiàn)、進食和皮毛色澤等，客觀情況，即生化指標(biāo)分析表現(xiàn)不同，證明小鼠血虛模型在此次實驗中建立成功。正常情況下，高鐵血紅蛋白可以被還原為血紅蛋白。但紅細(xì)胞內(nèi)G-6-PD缺少時，則不能被還原。本實驗顯示血虛小鼠的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶含量顯著升高，從而顯示小鼠體內(nèi)的高鐵血紅蛋白顯著降低，而血紅蛋白含量顯著升高，由此表明生當(dāng)歸水煎液的補血機制可能與提高血紅蛋白的含量有關(guān)。

胸腺和脾臟都是重要的免疫器官，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，筆者以小鼠胸腺、脾臟作為免疫器官的試驗指標(biāo)，研究生當(dāng)歸水煎液對小鼠機體免疫功能的影響。結(jié)果表明生當(dāng)歸水煎液可以使血虛小鼠的胸腺、脾臟指數(shù)提高，并對小鼠的胸腺和脾臟的免疫活性有增強作用，對免疫抑制的血虛小鼠的免疫力有改善作用，可見還有增強機體的免疫的功能。

綜上所述，生當(dāng)歸水煎液對血虛小鼠具有一定的補血作用，其補血機制可能與提高血紅蛋白的含量有關(guān)；同時，它還可能增強機體免疫機能。