劉悅越，英志芳，趙榮榮，范行良，王劍鋒，李長貴

中國食品藥品檢定研究院，北京 102629

脊髓灰質(zhì)炎（簡稱脊灰）是由脊灰病毒感染引起的急性傳染病，嚴重者可癱瘓甚至死亡，全球免疫接種疫苗是消滅脊灰的唯一解決方案［1］。幾十年來，口服脊灰減毒活疫苗（oral polio vaccine，OPV）一直是免疫接種的支柱，是根除野生型脊灰病毒工作的重要組成部分。OPV能夠在胃腸道中復(fù)制，誘導(dǎo)腸道黏膜免疫，并在個體隨后接觸活病毒時減少病毒脫落，有效建立免疫屏障，且具有產(chǎn)能高、價格便宜、使用方便等優(yōu)點［2］。我國自上世紀60年代開始使用OPV，其在消滅脊灰的進程中發(fā)揮了重要作用。我國已于2000年7月證實自1994年10月起無本土野病毒引起的脊灰病例［3］。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）基于全球消滅Ⅱ型脊灰野毒株，且Ⅱ型OPV可能回復(fù)突變引起傳染性循環(huán)疫苗衍生脊灰病毒（circulating vaccine-derived poliovirus，cVDPV）的問題，建議全球停止使用三價OPV（trivalent OPV，tOPV），轉(zhuǎn)換為含Ⅰ型和Ⅲ型減毒株的二價OPV（bivalent OPV，bOPV）及滅活脊灰疫苗（inactivated poliomyelitis vaccine，IPV）聯(lián)合使用［4］。我國已于2016年5月完成轉(zhuǎn)換工作。

目前獲得批準上市的bOPV為口服液體疫苗和糖丸兩種劑型，市場上使用的主要為口服液體疫苗。依據(jù)《中國藥典》三部（2015版）及企業(yè)注冊標準，中國食品藥品檢定研究院（簡稱中檢院）對企業(yè)質(zhì)檢記錄摘要進行審核，并對每批疫苗進行部分關(guān)鍵項目的檢定。本文對2016—2020年用于國內(nèi)計劃免疫的bOPV的批簽發(fā)及質(zhì)量情況進行分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 2016—2020年bOPV批簽發(fā)概況

2016—2020年中檢院共簽發(fā)538批，4.46億劑bOPV用于我國計劃免疫接種，見表1。

表1 2016—2020年bOPV的批簽發(fā)量

在批簽發(fā)過程中，所有批次bOPV均進行資料審核及無菌檢查，另隨機抽取一定比例的樣品進行鑒別試驗、總病毒滴度、Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度等項目檢測。2016—2020簽發(fā)的538批bOPV檢定結(jié)果均符合規(guī)定。

2 2016—2020年bOPV質(zhì)量分析

2.1 鑒別試驗bOPV的鑒別試驗質(zhì)量標準為病毒型別應(yīng)準確無誤，即疫苗經(jīng)Ⅰ型和Ⅲ型混合脊灰病毒特異性免疫血清中和后，接種至敏感細胞培養(yǎng)，細胞應(yīng)無病變出現(xiàn)。2016—2020年簽發(fā)的538批bOPV檢定結(jié)果均符合規(guī)定。

2.2 病毒滴度 病毒滴度是顯示疫苗中活病毒含量的有效性指標。質(zhì)量標準規(guī)定每劑疫苗總病毒滴度應(yīng)不低于6.12 lgCCID50，其中Ⅰ型應(yīng)不低于6.0 lgCCID50，Ⅲ型應(yīng)不低于5.5 lgCCID50。2016—2020年538批bOPV企業(yè)自檢結(jié)果與中檢院檢測結(jié)果的一致性較好，除2020年Ⅲ型病毒滴度均值相差4.15%外，其他型均值差異均＜2%。同一型別不同年度的病毒滴度較為穩(wěn)定，其中總病毒滴度中檢院檢測結(jié)果均值為6.68～6.77 lgCCID50／劑，Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度中檢院檢測結(jié)果均值分別為6.54～6.64和5.96～6.26 lgCCID50／劑。見圖1。

圖1 bOPV各年度總病毒滴度以及Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度均值

以2018和2020年的疫苗成品病毒滴度為例進行趨勢分析，結(jié)果表明，不同批次間疫苗均一性較好。病毒總滴度中檢院檢測結(jié)果為6.42～6.92 lgCCID50／劑，均在±3倍標準差（standard de-viation，SD）范圍內(nèi)，除3批低于均值-2SD0.01外，其他均在±2SD范圍。Ⅰ型和Ⅲ型病毒滴度中檢院檢測結(jié)果分別為6.30～6.80和5.80～6.42 lgCCID50／劑，均在±2SD范圍內(nèi)。

2.3 抗生素殘留 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測疫苗成品中慶大霉素殘留量，結(jié)果顯示，2016—2020年538批bOPV均≤12 ng／劑，低于質(zhì)量標準50 ng／劑。其中10～12 ng／劑占2.4%，1～9 ng／劑占59.9%，＜1 ng／劑占37.7%。

圖2 2018—2020年bOPV病毒滴度趨勢分析

續(xù)圖2 2018—2020年bOPV病毒滴度趨勢分析

3 討論

自1988年世界衛(wèi)生大會通過根除脊灰的決議以來，除阿富汗和巴基斯坦外，所有國家均中斷了野生脊灰病毒的傳播［5］，尤其是Ⅱ型野病毒，自1999年以來未發(fā)現(xiàn)其引起的脊灰病例。OPV是推進脊灰消除進程的關(guān)鍵工具，但可能引起cVDPV，監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，超過90%的cVDPV病例由cVDPV2引起［6］。為消除cVDPV2帶來的風險，WHO建議將僅包含Ⅰ型和Ⅲ型脊灰減毒株的bOPV全球同步替代所有tOPV。全球155個使用tOPV的國家／地區(qū)均已完成從tOPV至bOPV的轉(zhuǎn)換［7］。

我國生產(chǎn)的bOPV基本延續(xù)tOPV的生產(chǎn)工藝，臨床研究表明，bOPV具有良好的安全性和免疫原性［8］。2016—2018年bOPV每年的簽發(fā)量均在1億劑次以上，保障了我國轉(zhuǎn)換后的計劃免疫用苗。2019年隨著國產(chǎn)IPV供應(yīng)日趨充足，且我國逐漸將“1劑IPV+3劑bOPV”的免疫策略替代為“2劑IPV+2劑bOPV”，因此，對bOPV的需求有所下降，從而批簽發(fā)量自2019年相應(yīng)減少。

根據(jù)《中國藥典》三部（2015版）及企業(yè)注冊標準要求，病毒滴度檢測采用微量細胞病變法。由于脊灰病毒在敏感細胞系培養(yǎng)可出現(xiàn)細胞病變，引起致細胞病變效應(yīng)，以不同稀釋度病毒接種細胞，出現(xiàn)50%細胞病變的最高病毒稀釋度即為病毒滴度［9］。本文分析結(jié)果表明，企業(yè)自檢結(jié)果與中檢院檢測結(jié)果均符合規(guī)定，各年度波動較小，保證了疫苗的有效性和生產(chǎn)穩(wěn)定性。

疫苗生產(chǎn)過程中，由于菌毒種引入和生產(chǎn)工藝要求，可能會帶入一定的抗生素，且后續(xù)工藝很難將其全部清除。為防止抗生素在易敏人群中引起過敏反應(yīng)，《中國藥典》三部（2015版）對疫苗中抗生物殘留有嚴格規(guī)定，脊灰疫苗的標準為不高于50 ng／劑。批簽發(fā)檢測結(jié)果顯示，bOPV抗生素含量明顯低于該標準限值，符合要求。

綜上所述，將2016—2018年bOPV的批簽發(fā)情況結(jié)合企業(yè)和中檢院的數(shù)據(jù)分析，表明通過實施批簽發(fā)，可較好地控制疫苗產(chǎn)品質(zhì)量，保障上市疫苗的安全性和有效性。