干擾HNRNPAB對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖與分化的作用研究

楊 光，楊 旭，訾晶晶，于建杰，郭 宏，丁向彬，劉新峰,2*，張林林*

(1.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁育與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2.寧夏大學(xué) 西部特色生物資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，銀川 750021)

動(dòng)物的肌肉發(fā)育包括胚胎期和出生后肌纖維的增殖和肥大兩個(gè)方面，是一個(gè)長(zhǎng)期發(fā)展的生物過(guò)程并由眾多基因協(xié)作調(diào)控。部分品種的牛(如比利時(shí)藍(lán)牛)，其肌肉增大是由于肌肉纖維顯著增多，而胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGFs)則能夠促進(jìn)成肌細(xì)胞的增殖；小鼠在缺失肌生成抑制素基因(-8)后，肌肉纖維數(shù)量增多，進(jìn)而增強(qiáng)其骨骼肌質(zhì)量。骨骼肌是肌肉的重要組成部分，存在于生物體的各種組織中，也是呼吸、代謝等生理過(guò)程中不可或缺的組成要素。骨骼肌的生長(zhǎng)發(fā)育伴隨著眾多基因的共同調(diào)控，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞是肌源性干細(xì)胞，在動(dòng)物機(jī)體受到損傷時(shí)，可以增殖、分化為新的肌纖維、形成新的肌肉組織。在畜牧生產(chǎn)過(guò)程中，動(dòng)物的產(chǎn)肉性能是決定經(jīng)濟(jì)指標(biāo)的重要因素之一。從不同層面研究肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有助于了解和提升動(dòng)物的產(chǎn)肉性能。

核不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hnRNPs)是一類(lèi)由RNA聚合酶Ⅱ產(chǎn)生并且與轉(zhuǎn)錄物結(jié)合的核蛋白，是一類(lèi)參與了多種重要生命活動(dòng)的RNA結(jié)合蛋白。HNRNPs家族成員約有20多個(gè)，按分子量大小命名從A到U，主要成員包括 hnRNPA、hnRNPA/B、hnRNPC 等，hnRNPs的生物學(xué)功能較為廣泛，它能夠利用其自身特有的結(jié)構(gòu)同前體mRNA相結(jié)合，以?xún)烧邚?fù)合體的形式參與mRNA的剪接、翻譯、mRNA的穩(wěn)定以及轉(zhuǎn)錄等調(diào)控過(guò)程，還有少部分未命名的成員由于表達(dá)較少并且不具備與前體mRNA結(jié)合的能力從而負(fù)責(zé)協(xié)助其他hnRNPs完成部分生物學(xué)功能。hnRNP蛋白能夠進(jìn)行翻譯后修飾，從而使生物活性及亞細(xì)胞定位發(fā)生改變。其在基因表達(dá)調(diào)控中同樣發(fā)揮重要作用，研究表明許多hnRNPs參與癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，例如hnRNP A1在肺癌樣本中的表達(dá)顯著增加，并與腫瘤的增殖有關(guān)；hnRNP A2/B1可以顯著提升癌細(xì)胞的增殖從而促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞的侵襲；hnRNP C能夠調(diào)節(jié)乳腺癌的致癌基因等。在肌肉發(fā)育方面，hnRNP A1能夠調(diào)控小鼠肌肉相關(guān)基因的表達(dá)和選擇性剪接，從而影響肌肉收縮；降低小鼠骨骼肌中hnRNP A1的表達(dá)能夠通過(guò)抑制糖原合成影響該組織的代謝特性和胰島素敏感性；hnRNP H在胚胎間充質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)，并且在胚胎間充質(zhì)細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化時(shí)，hnRNP H的表達(dá)顯著降低，表明hnRNP H在平滑肌的生成調(diào)節(jié)中具有重要作用；hnRNP L對(duì)肌源性分化具有重要作用，并能夠作為潛在的治療靶點(diǎn)調(diào)節(jié)肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良病等；HNRNPAB作為hnRNPs家族的核心蛋白，由兩段RNA識(shí)別基序、一段RGG盒以及兩段富含甘氨酸結(jié)構(gòu)域的輔助區(qū)域構(gòu)成，其中的RNA識(shí)別基序約由90～100個(gè)氨基酸組成，能夠與Pre-mRNA的3′非翻譯(3′UTR)區(qū)域結(jié)合，而富含甘氨酸的區(qū)域在核定位功能上具有重要作用。HNRNPAB在生物學(xué)功能上主要參與調(diào)控mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝及剪切等過(guò)程，并且與諸多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。但HNRNPAB參與動(dòng)物骨骼肌發(fā)育的研究鮮有報(bào)道?；诖耍狙芯坷门９趋兰⌒l(wèi)星細(xì)胞體外誘導(dǎo)成肌分化模型，通過(guò)干擾牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)，研究HNRNPAB對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外成肌分化的作用，為進(jìn)一步挖掘影響牛肌肉發(fā)育的基因奠定一定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要材料

牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞由天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁育與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分離凍存。

1.2 主要儀器

熒光顯微鏡(Leica)；CO培養(yǎng)箱(SANYO)；脫色搖床(IKA)；酶標(biāo)儀(Thermo-scientific)；垂直電泳槽(Bio-Rad)；LightCycle 96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Roche)；PowerPac Basic電泳儀；ChemiDocImaging System(Bio-Rad)等。

1.3 主要試劑

胎牛血清(FBS)和馬血清(HS)(Gibco, USA)；PBS 緩沖液、0.25%胰蛋白酶(Solarbio, 北京)；DMEM高糖培養(yǎng)基(Hyclone, USA)；EDU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(銳博，廣州)；RNA快速提取試劑盒(艾德萊，北京)；BCA試劑盒(康為世紀(jì)，北京)；PAGE凝膠快速制備試劑盒(雅酶生物，上海)；鼠抗GAPDH，羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗(中杉金橋，北京)；兔抗 HNRNPAB(Abcam, USA)；PrimeScript II 1 st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa，大連)等。

1.4 方 法

1.4.1 牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代及誘導(dǎo)分化 牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外誘導(dǎo)成肌分化模型的建立參考天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁育與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建立的方法，液氮中取出細(xì)胞，37 ℃水浴快速搖晃使細(xì)胞復(fù)蘇，用等體積的增殖培養(yǎng)基(20%FBS+80%DMEM)中和，立刻轉(zhuǎn)移到離心管中離心10 min(1 000 r·min)，離心后棄上清，加入3 mL增殖培養(yǎng)基重懸，均勻接種于60 mm細(xì)胞培養(yǎng)板，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%，細(xì)胞量約為1×10時(shí)傳代，用胰酶進(jìn)行消化，增殖培養(yǎng)基中和以終止消化，差速離心收集沉淀，加入增殖培養(yǎng)基重懸后接種于6孔和24孔板中培養(yǎng)，24 h后收取增殖期細(xì)胞(GM期細(xì)胞)。細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%后，換分化培養(yǎng)基(2%HS+98%DMEM)進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化，培養(yǎng)24、48、72 h后收取分化期第1(DM1)、2(DM2)、3(DM3)天的細(xì)胞。

1.4.2干擾效果檢測(cè) 根據(jù)的CDS區(qū)序列設(shè)計(jì)干擾RNA(序列為：CCAAAGAGGTTTATCAACA)，由廣東銳博公司合成。將細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板和6孔板中，設(shè)置試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組3個(gè)重復(fù)，細(xì)胞融合度達(dá)80%，細(xì)胞量約為1×10時(shí)參考Lipofectamine3000說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染si-HNRNPAB及對(duì)照。轉(zhuǎn)染24 h后收取增殖期(GM)細(xì)胞，同時(shí)更換增殖培養(yǎng)基為分化培養(yǎng)基，換分化培養(yǎng)基24、72 h后分別收取分化第1天(DM1)和第3天(DM3)的細(xì)胞。通過(guò)qRT-PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測(cè)GM期、DM1期和DM3期的干擾效果。

1.4.3 EdU染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖 按Cell-LightEdU Apollo 567 In Vitro Kit說(shuō)明操作EdU染色試驗(yàn)，于96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24 h后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，利用熒光顯微鏡檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，每組設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，熒光顯微鏡拍照存圖，每孔至少采集5個(gè)不同視野。

1.4.4 熒光定量 PCR 檢測(cè)基因表達(dá) 24孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，收取細(xì)胞后按照試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，RNA濃度檢測(cè)合格后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，利用PrimeScript II 1 st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行cDNA第一鏈的合成，稀釋cDNA 5倍后進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)的mRNA表達(dá)水平、7、1(增殖標(biāo)志因子)和、(分化標(biāo)志因子)的mRNA表達(dá)水平。熒光定量PCR體系(總20 μL)：cDNA 2 μL，上、下游引物各 0.5 μL，Mix 10 μL，RNase free water 7 μL。熒光定量PCR 程序：95 ℃預(yù)變性60 s；95 ℃變性10 s；61 ℃退火20 s；72 ℃延伸15 s，40 個(gè)循環(huán)；熔解曲線：95 ℃ 10 s；65 ℃ 60 s；97 ℃ 1 s；冷卻：37 ℃ 30 s。qRT-PCR反應(yīng)引物詳情見(jiàn)表1。

表1 qRT-PCR 引物信息Table 1 qRT-PCR primers information

1.4.5 Western blot 檢測(cè)蛋白表達(dá) 6孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，待轉(zhuǎn)染處理48、96 h后，加入含1% PMSF的RIPA 裂解液收集蛋白，4 ℃超速離心10 min后取上清液保存于-80 ℃。根據(jù)BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度后對(duì)蛋白進(jìn)行變性，根據(jù)蛋白濃度利用Western blot檢測(cè)HNRNPAB、Pax7(增殖標(biāo)志因子)、MyoG、MyHC(分化標(biāo)志因子)的蛋白表達(dá)量。

1.4.6 統(tǒng)計(jì)分析 qRT-PCR及Western blot結(jié)果用檢驗(yàn)分析(SPSS和Image Lab),EDU細(xì)胞增殖試驗(yàn)采用檢驗(yàn)分析(ImageJ軟件進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù))，“*”表示差異顯著(<0.05)，“**”表示差異極顯著(<0.01)，“N.S.”表示差異不顯著(>0.05)。

2 結(jié) 果

2.1 牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化前后 HNRNPAB表達(dá)譜分析

為鑒定HNRNPAB是否在成肌分化前后具有關(guān)鍵作用，通過(guò)qRT-PCR對(duì)進(jìn)行時(shí)間序列表達(dá)分析，結(jié)果顯示，隨著牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化時(shí)間的延長(zhǎng)，的mRNA表達(dá)水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且在誘導(dǎo)分化第1天的mRNA表達(dá)量最高(圖1A)，分化期HNRNPAB的蛋白水平表達(dá)量較增殖期(分化前)相比極顯著降低(<0.01)，表明HNRNPAB可能具有調(diào)控牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化的作用(圖1B、C)。

A.HNRNPAB時(shí)間序列mRNA表達(dá)譜；B.HNRNPAB成肌分化前后蛋白表達(dá)水平；C.Western blot量化結(jié)果A.HNRNPAB time-series mRNA expression profile; B.Protein expression levels of HNRNPAB before and after myogenic differentiation; C.Western blot quantification results圖1 牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化前后HNRNPAB表達(dá)量Fig.1 Expression of HNRNPAB in bovine skeletal muscle satellite cells before and after myogenic differentiation

2.2 干擾HNRNPAB表達(dá)對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響

構(gòu)建牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞抑制表達(dá)模型，對(duì)牛骨骼肌細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染si-HNRNPAB處理24 h后，EdU細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，qRT-PCR檢測(cè)增殖期細(xì)胞中和增殖標(biāo)志因子7、1的mRNA水平變化，Western blot檢測(cè)細(xì)胞中HNRNPAB與Pax7蛋白表達(dá)水平變化。轉(zhuǎn)染si-HNRNPAB后，HNRNPAB的mRNA水平與蛋白表達(dá)水平均極顯著降低(<0.01)，增殖標(biāo)志因子7和1的mRNA表達(dá)水平極顯著降低(<0.01，圖2B)，Pax7的蛋白表達(dá)水平極顯著上升(<0.01，圖2C、2D)，EdU陽(yáng)性細(xì)胞率極顯著上升(<0.01,圖2E、2F)。結(jié)果顯示，干擾后降低了牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖標(biāo)志因子的轉(zhuǎn)錄水平，升高了Pax7的蛋白表達(dá)水平。

A.HNRNPAB干擾效果分析；B.增殖標(biāo)志因子mRNA表達(dá)水平；C.增殖期HNRNPAB與Pax7蛋白表達(dá)水平；D.Western blot量化結(jié)果；E.EdU染色(200×)；F. EdU標(biāo)記指數(shù)A. Analysis of the interference effect of HNRNPAB; B. mRNA expression levels of proliferation marker factors; C. Protein expression levels of HNRNPAB and Pax7 in the proliferation phase; D. Western blot quantification results; E. EdU staining (200×); F. EdU labeling index圖2 干擾HNRNPAB對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響Fig.2 The effect of interfering with HNRNPAB on the proliferation of bovine skeletal muscle satellite cells

2.3 干擾HNRNPAB表達(dá)對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化的影響

轉(zhuǎn)染si-HNRNPAB處理牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞48、96 h后，qRT-PCR和Western blot檢測(cè)細(xì)胞中HNRNPAB以及分化標(biāo)志因子MyHC、MyoG的mRNA表達(dá)水平與蛋白表達(dá)水平的變化，顯微鏡觀察細(xì)胞成肌分化后的肌管形態(tài)。轉(zhuǎn)染si-HNRNPAB 48及96 h后，的mRNA表達(dá)水平極顯著降低(<0.01)，分化標(biāo)志因子、的mRNA表達(dá)水平均極顯著上升(<0.01，圖3A、3B)，轉(zhuǎn)染si-HNRNPAB 96 h后，HNRNPAB的蛋白表達(dá)水平極顯著降低(<0.01)，分化標(biāo)志因子MyoG、MyHC的蛋白表達(dá)水平顯著上升(<0.05，圖3C、3D)，倒置顯微鏡下觀察到干擾組與對(duì)照組相比，肌管明顯變粗且分化狀態(tài)明顯(圖3E)。結(jié)果顯示，干擾對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化有促進(jìn)作用。

A.分化第1天HNRNPAB與分化標(biāo)志因子mRNA表達(dá)水平；B.分化第3天HNRNPAB與分化標(biāo)志因子mRNA表達(dá)水平；C.分化第3天HNRNPAB與標(biāo)志因子蛋白表達(dá)水平；D.Western blot量化結(jié)果；E.誘導(dǎo)分化第3天，倒置顯微鏡下細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)(200×)A.The mRNA expression levels of HNRNPAB and differentiation marker factors on the first day of differentiation; B.The mRNA expression levels of HNRNPAB and differentiation marker factors on the third day of differentiation; C.The protein expression levels of HNRNPAB and marker factors on the third day of differentiation; D.Western blot quantification results; E.On the third day of induction of differentiation, the growth state of cells under an inverted microscope (200×)圖3 干擾HNRNPAB對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化的影響Fig.3 Effects of interfering with HNRNPAB on the differentiation of bovine skeletal muscle satellite cells

3 討 論

骨骼肌是哺乳動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的重要組成部分，在動(dòng)物機(jī)體的運(yùn)動(dòng)、產(chǎn)熱等方面發(fā)揮著不可小覷的作用。骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞對(duì)骨骼肌的生長(zhǎng)、修復(fù)、再生過(guò)程都具有調(diào)控作用。當(dāng)骨骼肌受損后，骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞被調(diào)控因子激活，隨后進(jìn)入增殖、分化進(jìn)程，最后形成新的肌纖維。骨骼肌的生長(zhǎng)發(fā)育不僅包括肌源性調(diào)節(jié)因子，許多轉(zhuǎn)錄因子也參與到調(diào)控進(jìn)程中。

Pre-mRNA在成為成熟的mRNA的過(guò)程中需要多種蛋白質(zhì)的參與，大多蛋白質(zhì)會(huì)同RNA形成核糖核蛋白復(fù)合物。其中的核內(nèi)不均一核糖核蛋白復(fù)合物(hnRNP)家族成員約有20多個(gè)，除少數(shù)成員外，hnRNPs家族成員都含有RBD(RNA-binding domain)結(jié)構(gòu)域，除了基本的RBD結(jié)構(gòu)域還有其他輔助的結(jié)構(gòu)域(如富含甘氨酸、脯氨酸或酸性的結(jié)構(gòu)域)。有研究表明，hnRNP E1可以下調(diào)HPV16 E6癌基因的表達(dá)，從而抑制宮頸癌變。敲除小鼠中hnRNP-U的表達(dá)能夠?qū)е绿墙徒饧∪獾倪x擇性萎縮，發(fā)展為肌病。RNA結(jié)合基序蛋白X-連鎖蛋白(RBMX)通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制hnRNP A1介導(dǎo)的PKM可變剪接機(jī)制抑制轉(zhuǎn)移性膀胱癌(BCa)的發(fā)展和致瘤性。hnRNP C可以促進(jìn)新的異質(zhì)核RNA(hnRNAs，也稱(chēng)為pre-mRNAs)發(fā)展成為成熟mRNAs，并且可以穩(wěn)定mRNAs，控制其翻譯。它與一些癌癥基因和其他生物分子相互作用，其主要功能是調(diào)節(jié)癌基因的穩(wěn)定性和翻譯水平。hnRNP K能夠在轉(zhuǎn)錄水平上抑制肌細(xì)胞生成素的表達(dá)。綜上研究可知，hnRNP這個(gè)蛋白超家族具有廣泛的生物學(xué)功能，但大多表現(xiàn)為參與腫瘤的發(fā)生、癌癥的發(fā)展等。

HNRNPAB作為hnRNPs的主要家族成員之一，主要參與調(diào)控mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝、剪切及表達(dá)等過(guò)程。近年來(lái)，HNRNPAB也被發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)HNRNPAB影響了眾多細(xì)胞的增殖和分化，但和肌肉發(fā)育相關(guān)的研究還未見(jiàn)報(bào)道，所以本研究探索了HNRNPAB在牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化前后的表達(dá)量是否存在顯著差異，結(jié)果顯示隨牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，的mRNA表達(dá)水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且在誘導(dǎo)分化第1天表達(dá)量最高，蛋白表達(dá)水平在分化前后也具有顯著差異。暗示HNRNPAB可能具有調(diào)控牛骨骼肌細(xì)胞增殖、分化的作用；隨后通過(guò)干擾的表達(dá)分析其對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖分化的影響，結(jié)果顯示，干擾后細(xì)胞增殖標(biāo)志因子7和1的mRNA水平同對(duì)照組相比極顯著降低，Pax7的蛋白表達(dá)水平極顯著升高，EdU陽(yáng)性細(xì)胞率與對(duì)照組相比極顯著上升；干擾后分化標(biāo)志因子MyoG和MyHC的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平同對(duì)照組相比顯著升高，肌管數(shù)量和肌管直徑明顯大于對(duì)照組。由此可知，干擾對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖、分化具有相應(yīng)的影響，抑制HNRNPAB表達(dá)后會(huì)抑制牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖標(biāo)志因子的轉(zhuǎn)錄水平，提升Pax7的蛋白表達(dá)水平，同時(shí)促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化。類(lèi)似的，HNRNPAB對(duì)其他細(xì)胞的增殖、分化也有著一定的作用，Dang等發(fā)現(xiàn)，通過(guò)調(diào)控miR-M4-5p降低了的表達(dá)量后，促進(jìn)了原代雞胚成纖維細(xì)胞的增殖，說(shuō)明HNRNPAB具有抑制原代雞胚成纖維細(xì)胞增殖活性的作用。Taga等發(fā)現(xiàn)，在293T細(xì)胞或乳腺癌MCF-7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)的載體后，兩種細(xì)胞的增殖受到抑制作用，表明HNRNPAB可以抑制細(xì)胞增殖進(jìn)程。這可能是由于HNRNPAB在不同類(lèi)型的細(xì)胞中會(huì)發(fā)揮不同的作用，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。而對(duì)于本試驗(yàn)中干擾后增殖標(biāo)志因子的mRNA表達(dá)水平降低，Pax7的蛋白表達(dá)水平卻升高，可能是蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、翻譯效率或蛋白降解所導(dǎo)致，具體原因還需要通過(guò)進(jìn)一步試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

4 結(jié) 論

本研究利用牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外成肌誘導(dǎo)分化模型，探究hnRNPs家族核心蛋白HNRNPAB對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖分化的調(diào)控作用，結(jié)果顯示，干擾后抑制牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖標(biāo)志因子的轉(zhuǎn)錄水平，促進(jìn)Pax7的蛋白表達(dá)水平，并促進(jìn)了牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化。本研究可為進(jìn)一步深入探索HNRNPAB及其在動(dòng)物骨骼肌的發(fā)育分化調(diào)控機(jī)制等方面提供參考。