UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定寧夏枸杞中香豆素類和苯丙酸類9個(gè)成分的含量△

康志欣，袁雪琴，張春陽，楊孟可，王衛(wèi)華，劉賽*，徐常青*

1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；

2.清華大學(xué) 藥學(xué)技術(shù)中心，北京 100084

寧夏枸杞Lycium barbarumL.為茄科枸杞屬（LyciumL.）落葉灌木，其干燥成熟果實(shí)（枸杞子）、干燥根皮（地骨皮）、干燥嫩葉（天精草）、干燥花蕾（長生草）均可入藥[1-2]，是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，隨著市場需求不斷擴(kuò)大，其種植規(guī)模[3]及出口總量正逐年遞增[4]。由于寧夏枸杞適應(yīng)性強(qiáng)，具有耐鹽堿、耐干旱和耐貧瘠等優(yōu)良特性，被作為寧夏、青海、甘肅等西北地區(qū)產(chǎn)業(yè)扶貧、鄉(xiāng)村振興、改善生態(tài)環(huán)境的先鋒樹種[5-6]。

香豆素類成分是植物界普遍存在的一類次生代謝物質(zhì)[7]，通過苯丙烷途徑合成[8]，在植物體內(nèi)易受到環(huán)境脅迫（生物或非生物脅迫）誘導(dǎo)合成[9]。近年研究發(fā)現(xiàn)，東莨菪內(nèi)酯和秦皮素等香豆素類成分及其糖基化合物東莨菪苷、秦皮苷、秦皮甲素等在植物適應(yīng)環(huán)境中具有非常重要的生態(tài)功能，主要體現(xiàn)在3 個(gè)方面：1）在植物養(yǎng)分吸收利用方面，香豆素類成分可通過螯合三價(jià)鐵離子等方式幫助植物吸收鐵營養(yǎng)，在緩解堿性土壤導(dǎo)致的鐵營養(yǎng)缺乏中起著至關(guān)重要的作用[10]；2）在植物-微生物互作方面，香豆素類成分被證實(shí)可以介導(dǎo)多種微生物互作，是植物與微生物及環(huán)境進(jìn)行信息交流的關(guān)鍵信號(hào)物質(zhì)，其中東莨菪內(nèi)酯被證明具有選擇性抗菌作用，可以維系健康的根際微生物環(huán)境[11]；3）香豆素類成分是重要的酚類植保素及信號(hào)分子[12-14]，在植物遭受病、蟲害時(shí)可大量合成和積累，在植物抗病[15-16]、抗蟲[17-19]等響應(yīng)生物脅迫中也具有重要作用。同時(shí)，香豆素類成分具有抗凝血[20]、抗癌[21]、抗病毒[22]和抗炎[23]等多種藥理作用，是一類具有重要藥理活性的化合物，近年越來越受到關(guān)注[24]。

前期研究發(fā)現(xiàn)，枸杞各部位如根[25-26]、葉[25]、果實(shí)[27-28]、種子[29]中均可檢出香豆素類成分，尤其是東莨菪內(nèi)酯和東莨菪苷，是枸杞子、地骨皮、天精草中重要的有效成分[30-32]，東莨菪內(nèi)酯被認(rèn)為是枸杞子中抑制前列腺癌細(xì)胞PC3 增殖效果最好的活性成分[33]，東莨菪苷則被認(rèn)為是枸杞葉中抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa 增殖的主要活性成分[32]。此外，寧夏枸杞生長在西北鹽堿土壤環(huán)境中[34-35]，且生長過程病蟲種類多、為害嚴(yán)重[36-37]，推測(cè)香豆素類成分在其適應(yīng)各種生物及非生物脅迫，尤其對(duì)根系營養(yǎng)吸收、適應(yīng)鹽堿脅迫、調(diào)節(jié)根際微生物群落及協(xié)助植株抗病蟲等方面具有重要作用。本研究采用超高效液相色譜-質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定了寧夏枸杞中5個(gè)香豆素類化合物（東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷、秦皮素、秦皮苷和秦皮甲素）、3 個(gè)與香豆素合成有關(guān)的苯丙酸類化合物（咖啡酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸）及1 個(gè)東莨菪苷的同分異構(gòu)體（綠原酸）共9 個(gè)成分，并對(duì)該方法進(jìn)行方法學(xué)考察。同時(shí)還比較了同一種植基地有機(jī)種植（不使用任何化學(xué)合成的肥料、農(nóng)藥、生長調(diào)節(jié)劑等物質(zhì)）和常規(guī)種植寧夏枸杞不同部位中各成分含量的差異，以期為寧夏枸杞中香豆素類成分研究提供便捷的檢測(cè)方法，同時(shí)為高品質(zhì)枸杞定向培育及寧夏枸杞資源開發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Elion LC?型超高效液相色譜儀串聯(lián)Triple Quad 5500+型三重四極桿質(zhì)譜儀（美國AB SCIEX 公司）；XP 26型分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；5810 R型冷凍高速離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；MVM25型多管振蕩器（QLab 公司）；WD-9415C 型超聲波清洗器（北京市六一儀器廠）；MILLI-Q 型超純水機(jī)（德國Merck Millipore 公司）；JSP-100 型高速多功能粉碎機(jī)（永康市金穗機(jī)械制造廠）；WGL-230B 型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

樣品于2021年7月采自寧夏中衛(wèi)市中寧縣鳴沙鎮(zhèn)璽贊生態(tài)枸杞莊園（常規(guī)種植：N37.46°，E105.93°；有機(jī)種植：N37.47°，E105.95°），經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所徐常青研究員鑒定為寧夏枸杞Lycium barbarumL.（寧杞7號(hào)）。

在有機(jī)和常規(guī)2 種種植方式的試驗(yàn)地內(nèi)各任選30 株寧夏枸杞（其中每10 株為1 個(gè)生物學(xué)重復(fù)，共3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)），分別采收青果、中果、紅果、葉片和根，每份樣品取鮮樣20～50 g，其中青、中、紅果為按照果實(shí)顏色及大小劃分的不同成熟度果實(shí)，葉片為葉長≥5.00 cm 的功能葉，根為挖開植株后截取的部分植株根系（以主根為主），清洗表面泥土等雜質(zhì)后用手術(shù)刀刮取根皮為待測(cè)樣品，見圖1。

圖1 寧夏枸杞紅果、中果、青果、葉片和根樣品

對(duì)照品東莨菪內(nèi)酯（批號(hào)：Z13O11X126864）、秦皮素（批號(hào)：Y07D9Q77007）、秦皮苷（批號(hào)：Y13N11Q130724）、秦皮甲素（批號(hào)：KA0422CA14）均購于上海源葉生物科技有限公司，純度≥98%；對(duì)照品東莨菪苷（批號(hào)：CHB201131）、咖啡酸（批號(hào)：CHB201217）、阿魏酸（批號(hào)：CHB201105）、對(duì)香豆酸（批號(hào)：CHB210106）、綠原酸（批號(hào)：CHB201114）均購于成都克洛瑪生物科技有限公司，純度≥98%；乙腈（批號(hào)：210280）、甲醇（批號(hào)：211218）、甲酸（批號(hào)：207052）、異丙醇（批號(hào)：205316）、乙酸銨（批號(hào)：191008）均為色譜純，購于Fisher Chemical 公司；二甲基亞砜（分析純，批號(hào)：111115，西隴化工股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 UPLC-MS/MS分析條件

2.1.1 色譜條件 Waters XSelect HSS T3 色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.5μm），以乙腈（含0.5 mmol·L-1乙酸銨+0.05%甲酸，A）-水（含0.5 mmol·L-1乙酸銨+0.05%甲酸，B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～2.0 min，0～20%A；2.0～5.0 min，20%A；5.0～8.0 min，20%～60%A；8.0～10.0 min，60%～100%A；10.0～12.0 min，100%A；12.0～12.1 min，100%～0A；12.1～16.0 min，0A）；流速為0.3 mL·min-1；柱溫為35 ℃；進(jìn)樣量為5 μL。

2.1.2 質(zhì)譜條件 正、負(fù)離子模式切換電噴霧離子源（ESI），毛細(xì)管電壓為5.5 kV/-4.5 kV，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），氣簾氣壓力為206.84 kPa，噴霧氣（GS1）壓力為379.21 kPa，輔助加熱氣（GS2）壓力為413.69 kPa，離子源溫度為550 ℃。9 個(gè)成分質(zhì)譜條件見表1。

表1 寧夏枸杞中香豆素類和苯丙酸類9個(gè)成分的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷、秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素、咖啡酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸和綠原酸，溶于甲醇（微量二甲基亞砜）中制備成質(zhì)量濃度為2 mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取9 個(gè)化合物的對(duì)照品儲(chǔ)備液，用20%甲醇配制成質(zhì)量濃度為1.00 μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 樣品烘干，打粉過篩（60 目），再次將粉末烘至恒重。精密稱取樣品50.00 mg，加入80%甲醇配制成50.00 mg·mL-1的母液。渦旋3 min（2500 r·min-1），超聲提取20 min（100 Hz，200 W，20 ℃），渦旋3 min（2500 r·min-1），離心10 min（8 ℃、13 000 r·min-1，離心半徑為9.57 cm），取上清液加入適量20%甲醇稀釋后（稀釋倍數(shù)參考線性范圍，保證待測(cè)樣品測(cè)定值符合線性范圍），再次離心10 min（8 ℃、13 000 r·min-1，離心半徑為9.57 cm），上清液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性考察 取混合對(duì)照品溶液及供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下條件進(jìn)樣，即可得各待測(cè)成分的總離子流色譜（TIC）圖，進(jìn)行離子對(duì)選擇后得到各成分的提取離子色譜（XIC）圖，見圖2。

圖2 混合對(duì)照品溶液和寧夏枸杞供試品溶液的XIC圖

2.3.2 線性關(guān)系和檢測(cè)限、定量限考察 精密吸取2.2.1 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用20%甲醇梯度稀釋為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00、100.00、200.00、500.00、1 000.00 ng·mL-1的16 個(gè)不同質(zhì)量濃度混合對(duì)照品溶液。按照2.1 項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以信噪比（S/N）=10 的進(jìn)樣質(zhì)量濃度為定量限（LOQ），以S/N=3的進(jìn)樣質(zhì)量濃度為檢測(cè)限（LOD），結(jié)果見表2。

表2 寧夏枸杞中香豆素類和苯丙酸類9個(gè)成分的回歸方程、線性范圍、LOD和LOQ

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2.1項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用20%甲醇分別配制25.00、250.00 ng·mL-12個(gè)質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷、秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素、咖啡酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸和綠原酸在25.00 ng·mL-1時(shí)峰面積的RSD 分別為1.80%、4.52%、2.44%、1.55%、0.48%、1.52%、2.68%、1.30%、6.10%；在250.00 ng·mL-1時(shí)峰面積的RSD 分別為0.30%、2.49%、0.75%、0.96%、1.15%、2.23%、0.84%、1.09%、2.11%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，分別于進(jìn)樣室（10 ℃）和室溫（22 ℃）保存，將進(jìn)樣室內(nèi)的供試品溶液依次于0、2、4、8、16、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，室溫下的供試品溶液放置24 h 后進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷、秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素、咖啡酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸和綠原酸峰面積的RSD分別為1.26%、1.89%、5.22%、1.77%、1.71%、2.12%、3.07%、1.27%、1.75%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取6 份同一批樣品，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷、秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素、咖啡酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸、綠原酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為81.40、368.67、0.22、0.35、0.04、43.58、53.07、12.87、180.33 μg·g-1，RSD 分別為0.90%、2.23%、4.44%、7.11%、2.24%、2.63%、1.34%、1.36%、1.52%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 將2.2.1項(xiàng)下2.00 mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液分別用80%甲醇稀釋成東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷、秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素、咖啡酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸和綠原酸質(zhì)量濃度依次為20.00、20.00、0.20、0.20、0.02、20.00、20.00、2.00、20.00 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。精密稱取已知含量的樣品粉末12份，其中6份按照目標(biāo)成分約100%的含量精密加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按2.2.2項(xiàng)下方法同時(shí)制備樣品供試品溶液及加標(biāo)樣供試品溶液，在2.1 項(xiàng)下條件測(cè)定分析，計(jì)算回收率及RSD，見表3。

表3 寧夏枸杞中香豆素類和苯丙酸類9個(gè)成分的加樣回收率結(jié)果

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)同一種植基地采集的30 份不同種植方式下寧夏枸杞不同部位樣品中9 個(gè)成分含量進(jìn)行分析，繪制柱形圖。其中不同部位樣品方差分析采用單因素ANOVA 法，方差齊時(shí)用S-N-K 進(jìn)行兩兩比較，方差不齊時(shí)用Games-Howell 進(jìn)行兩兩比較；不同種植方式樣品方差分析采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)法。

2.5 不同種植方式下寧夏枸杞不同部位中香豆素類和苯丙酸類成分含量測(cè)定

2.5.1 寧夏枸杞不同部位各成分含量 各成分在寧夏枸杞不同部位含量分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3），東莨菪內(nèi)酯、秦皮素、秦皮甲素主要分布于青果和葉片中，其中以東莨菪內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為242.33～396.00 μg·g-1，且隨果實(shí)成熟其質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低，有機(jī)青果中東莨菪內(nèi)酯（396.00 μg·g-1）質(zhì)量分?jǐn)?shù)是有機(jī)紅果（9.07 μg·g-1）的43.7 倍。秦皮苷、東莨菪苷主要分布于根皮和葉片中，其中東莨菪苷含量最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為63.20～460.00 μg·g-1，且隨果實(shí)成熟其質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低，有機(jī)青果中東莨菪苷（70.07 μg·g-1）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)是有機(jī)紅果（0.15 μg·g-1）的467.6 倍。苯丙酸類成分分布規(guī)律不一致，咖啡酸主要分布于根皮中，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11.73～51.23 μg·g-1；阿魏酸和對(duì)香豆酸主要分布于果實(shí)中，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11.63～291.00 μg·g-1；綠原酸主要分布于葉片和青果中，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為49.00～1 726.67 μg·g-1。其中2個(gè)苯丙酸類化合物（阿魏酸和對(duì)香豆酸）在果實(shí)中的含量則隨果實(shí)成熟而升高，常規(guī)紅果中阿魏酸和對(duì)香豆酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為51.20、291.00 μg·g-1）分別比青果（質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為29.83、11.63 μg·g-1）中質(zhì)量分?jǐn)?shù)高1.7、25.0倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 不同種植方式下寧夏枸杞不同部位中香豆素類和苯丙酸類9個(gè)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)（, n=3）

2.5.2 不同種植方式下寧夏枸杞各成分含量 不同種植方式下寧夏枸杞中香豆素類成分含量整體表現(xiàn)為有機(jī)種植高于常規(guī)種植，其中東莨菪內(nèi)酯、秦皮素、東莨菪苷、秦皮苷在青果、中果和葉片中均表現(xiàn)為有機(jī)種植時(shí)含量高于常規(guī)種植。東莨菪苷在根皮中含量及秦皮甲素在葉片中含量也呈現(xiàn)出有機(jī)種植顯著高于常規(guī)種植的特點(diǎn)。4個(gè)苯丙酸類成分在青果和根皮中也表現(xiàn)為有機(jī)種植時(shí)樣品含量更高的特點(diǎn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他部位中沒有明顯一致性規(guī)律。

3 討論

3.1 方法學(xué)考察結(jié)果

寧夏枸杞次生代謝物質(zhì)種類眾多，基質(zhì)復(fù)雜，因此快速測(cè)定多個(gè)化合物具有一定的難度，本研究通過梳理文獻(xiàn)，優(yōu)化條件，成功建立了一次性定量測(cè)定多個(gè)物質(zhì)的方法，且具有快速、穩(wěn)定、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。本研究首次定量了寧夏枸杞中的秦皮素、秦皮苷和秦皮甲素，且可以實(shí)現(xiàn)東莨菪苷和其同分異構(gòu)體綠原酸的高效分離，但檢測(cè)方法在開發(fā)過程中也遇到了一些值得關(guān)注的問題：1）東莨菪苷與綠原酸相對(duì)分子質(zhì)量完全相同，且在負(fù)離子模式下其質(zhì)譜碎片、出峰時(shí)間完全一致，徐小昆等[38]用高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)丁公藤屬植物中這2 個(gè)成分時(shí)出峰時(shí)間也非常接近，提示在檢測(cè)這2 個(gè)成分時(shí)應(yīng)避免相互干擾而出現(xiàn)的假陽性結(jié)果。2）已有研究表明，擬南芥在堿性缺鐵環(huán)境下根皮會(huì)分泌大量東莨菪內(nèi)酯、東莨菪苷，少量秦皮素、秦皮苷和痕量秦皮甲素，雖然這些成分含量差異較大，但在植物鐵吸收中均有重要作用[9-10,39-40]。本研究雖在寧夏枸杞中檢出秦皮甲素，但其含量較東莨菪內(nèi)酯與東莨菪苷低2～4 個(gè)數(shù)量級(jí)，屬痕量成分，在檢測(cè)時(shí)因加入的枸杞提取液基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)，導(dǎo)致本方法中秦皮甲素回收率偏高，但符合《中華人民共和國藥典》2020年版（四部）“9101 分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”中對(duì)基質(zhì)復(fù)雜、組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于0.01%及多成分等分析的要求，同時(shí)建議后續(xù)以該物質(zhì)作為主要研究對(duì)象時(shí)采用內(nèi)標(biāo)法以減輕基質(zhì)干擾。

3.2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

基于本研究所建立的方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)寧夏枸杞樣品中香豆素類和苯丙酸類成分含量的定量檢測(cè)，其中東莨菪內(nèi)酯和東莨菪苷含量較高，而秦皮素、秦皮苷和秦皮甲素含量非常低，在枸杞這種復(fù)雜基質(zhì)內(nèi)討論秦皮素、秦皮苷和秦皮甲素的含量差異意義不大。本研究中幾種苯丙酸類成分含量分布無明顯一致性規(guī)律，推測(cè)這與此類成分不僅為香豆素類成分合成提供前體，還在其他物質(zhì)合成中扮演重要角色，且自身也具有一定生物活性有關(guān)[41]。

寧夏枸杞是藥食同源植物，主要以干燥成熟果實(shí)（枸杞子）入藥，深受廣大消費(fèi)者喜愛。本研究測(cè)得中寧縣寧夏枸杞成熟紅果中東莨菪內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為48.87 μg·g-1，東莨菪苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.96 μg·g-1，咖啡酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.41 μg·g-1，綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26.03 μg·g-1，均低于Jarouche等[28]購自悉尼市場的寧夏枸杞果實(shí)（商品）中東莨菪內(nèi)酯（330.00～2 170.00 μg·g-1）、咖啡酸（0～240.00 μg·g-1）及綠原酸（0～7 150.00 μg·g-1）。與徐飛等[42]采自中寧縣及購自寧夏藥材公司的果實(shí)中東莨菪內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)（27.50～57.30 μg·g-1）一致，而遠(yuǎn)低于其測(cè)定的東莨菪苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)（59.5～167.6 μg·g-1），推測(cè)這可能與果實(shí)成熟度有關(guān)，或與綠原酸干擾有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

東莨菪內(nèi)酯為茄科植物的重要植保素[12]，是植物遭受病蟲侵害時(shí)產(chǎn)生的一類防御性次生代謝物質(zhì)，通常積累于植物亟須保護(hù)的幼嫩部位，如未成熟的果實(shí)中[43-44]。本研究結(jié)果顯示青果中東莨菪內(nèi)酯含量最高，并隨果實(shí)成熟含量降低，推測(cè)東莨菪內(nèi)酯是保護(hù)枸杞青果免受病蟲侵害的重要植保素物質(zhì)。

此外，有研究證實(shí)植物通常由根系合成香豆素糖苷化合物，傳輸至地上部分以香豆素糖苷形式儲(chǔ)存于細(xì)胞液泡中[8]，當(dāng)植物受到逆境脅迫時(shí)液泡中的香豆素糖苷可以快速轉(zhuǎn)化為香豆素苷元以應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫[11]，發(fā)揮殺蟲[19]、抗菌[16]等作用。本研究發(fā)現(xiàn)常規(guī)種植條件下寧夏枸杞根皮中東莨菪苷含量高于東莨菪內(nèi)酯，而在葉片中東莨菪內(nèi)酯含量高于東莨菪苷，推測(cè)這與枸杞葉片亟須抵抗枸杞木虱、枸杞癭螨、白粉病等病蟲害有關(guān)[45]，這與楊孟可等[46]研究發(fā)現(xiàn)枸杞癭螨為害后枸杞葉片中東莨菪內(nèi)酯含量顯著上升的研究結(jié)果一致。

有機(jī)種植是按照有機(jī)標(biāo)準(zhǔn)[47]生產(chǎn)，不使用人工合成的肥料、農(nóng)藥、生長調(diào)節(jié)劑等物質(zhì)，對(duì)于容易遭受病蟲為害的寧夏枸杞而言，有機(jī)生產(chǎn)方式下，因其營養(yǎng)相對(duì)匱乏，病蟲害更加嚴(yán)重。本研究顯示，有機(jī)種植方式下寧夏枸杞中香豆素類次生物質(zhì)含量均較高，因此，推測(cè)有機(jī)種植方式下寧夏枸杞通過根系合成分泌香豆素類成分以提高植株?duì)I養(yǎng)吸收能力，并通過提高葉片香豆素類成分含量應(yīng)對(duì)病蟲害。

4 小結(jié)

藥用植物的活性成分主要來自于植物逆境脅迫下所產(chǎn)生的次生物質(zhì)[48]，次生物質(zhì)種類及其含量通常還決定了藥材的質(zhì)量及道地性[49]。香豆素類次生代謝物質(zhì)在植物適應(yīng)環(huán)境中發(fā)揮著重要作用[40]，本研究在寧夏枸杞青果、中果、紅果、葉片及根皮中均檢測(cè)到多種香豆素類成分，其中以東莨菪內(nèi)酯及其糖基化合物東莨菪苷含量最高，這與目前植物界香豆素類物質(zhì)分布規(guī)律相符[10-11,50]，此外，東莨菪內(nèi)酯和東莨菪苷是枸杞子及地骨皮中具有抗癌作用的重要藥理活性成分[25,31,51]，因而本研究結(jié)果可以為寧夏枸杞藥用資源綜合開發(fā)利用提供參考，同時(shí)對(duì)深入研究香豆素類等物質(zhì)在寧夏枸杞環(huán)境適應(yīng)中的生態(tài)作用具有重要意義。