王智慧

（莘縣檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東聊城 252400）

因?yàn)樘烊簧靥崛≈苽渌璧墓に囅鄬?duì)復(fù)雜且成本更高，自身穩(wěn)定性也比合成色素要低，當(dāng)前食品工業(yè)生產(chǎn)中普遍選擇合成色素[1-4]?，F(xiàn)階段針對(duì)食用色素的檢測(cè)技術(shù)方法有薄層色譜法、分光光度法、高效液相色譜法等，然而上述技術(shù)手段往往運(yùn)用在飲料、糖類、果汁等簡(jiǎn)單基質(zhì)的檢測(cè)中，對(duì)部分蛋白質(zhì)含量相對(duì)更高以及基質(zhì)更加復(fù)雜的樣品難以發(fā)揮出較好的檢測(cè)效果，同時(shí)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)活動(dòng)的可操作性不強(qiáng)[5-7]。本研究選擇高效液相色譜法對(duì)食品中的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、赤蘚紅、亮藍(lán)以及胭脂紅這6類人工合成色素含量實(shí)施檢測(cè)，同時(shí)對(duì)提取劑等前處理方法予以改善。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

檸檬黃、日落黃、莧菜紅、亮藍(lán)、胭脂紅和赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)品。

甲醇、乙醇、乙腈，均為色譜純；甲酸、無水乙醇、氨水，均為分析純；色素提取液A：乙醇和乙腈以V∶V=2∶1的比例混合，添加2 mL氨水與60 mL水混合制成；實(shí)驗(yàn)用水均為一級(jí)超純水。

高效液相色譜儀（島津LC-20AT，配紫外檢測(cè)器）；超聲波清洗器（KQ 3200）；萬分之一電子天平（Ar224cn）；固相萃取小柱（ProElut PwA-2，150 mg/6 mL）；智能超聲波清洗機(jī)（TTL-121）；高壓泵；自動(dòng)進(jìn)樣器；色譜工作站（LabSolutions島津）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52AA）。

1.2 儀器條件

色譜柱型號(hào)：Inspire C18，150 mm×4.6 mm，5 μm；流動(dòng)相A、B分別為乙腈和乙酸銨水溶液（0.02 mol·L-1）；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長：254 nm；進(jìn)樣量：10 μL。流動(dòng)相梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

（1）提取熟肉、糕點(diǎn)等固體樣品色素。稱取約2.0 g樣品，均勻粉碎后精密稱取1.000 g置于離心管（50 mL）內(nèi)，添加色素提取液A 30 mL后，振蕩2 min，混勻后置于超聲波清洗機(jī)（提前升溫至50 ℃），持續(xù)30 min超聲處理后，于6 000 r·min-1條件下離心處理4 min。量取上清液置于雞心瓶（50 mL）內(nèi)，移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，當(dāng)上清液蒸發(fā)至約15 mL時(shí)，添加甲酸3 mL，混勻，待用。

（2）凈化、洗脫。固相萃取小柱用5 mL甲醇、5 mL甲醇（10%）依次活化；移入待凈化液，摒棄流出液；移入5 mL甲醇，摒棄流出液；移入5 mL氨水甲醇溶液（15%），收集流出液，50 ℃下氮吹至干，加水定容為1 mL，待測(cè)。

1.3.2 配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

用電子天平精密稱取各標(biāo)準(zhǔn)色素品，轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶并用少量水溶解后，用水定容，混勻，配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度均為1 000 mg·L-1，置于4 ℃條件下，待用。

1.3.3 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

各色素儲(chǔ)備液分別移取1 mL置于棕色安瓿瓶（25 mL）內(nèi)，混勻并用水配制混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為100 mg·L-1。依次用甲醇稀釋配制系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度分別為 0.5 mg·L-1、1.0 mg·L-1、5.0 mg·L-1、10.0 mg·L-1、20.0 mg·L-1、30.0 mg·L-1和 50.0 mg·L-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

以本方法色譜條件為根據(jù)，對(duì)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液進(jìn)行分析，色素質(zhì)量濃度（mg·L-1）與峰面積分別作為橫坐標(biāo)（X）和縱坐標(biāo)（Y），線性擬合，獲取標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及相關(guān)系數(shù)?；?倍信噪比確定檢出限，相關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。各色素線性關(guān)系良好，該方法檢出限為0.31～0.89 mg·kg-1，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 6～0.999 9，表明該方法檢出限較低、線性范圍良好，在檢測(cè)食品中人工合成色素時(shí)具備一定的靈敏性優(yōu)勢(shì)。

表2 各色素的出峰時(shí)間、線性方程、檢出限及相關(guān)系數(shù)

2.2 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

選擇空白樣品，按照 5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、15 mg·kg-1的加標(biāo)水平添加6種人工色素，各水平重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表3可知，6種合成色素平均回收率為92.6%～100.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%～1.8%，表明該方法準(zhǔn)確度與精密度良好。

表3 回收率和精密度結(jié)果

2.3 討論

2.3.1 分析方法選擇

由于檢測(cè)人工合成色素實(shí)驗(yàn)中使用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀涉及較高的設(shè)備檢測(cè)成本，在日常檢測(cè)工作中適用性不高[8]。本文選擇高效液相色譜儀對(duì)食品中6種人工合成色素進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，方法更加便捷。

2.3.2 流動(dòng)相選擇

GB 5009.35—2016中規(guī)定以甲醇和乙酸銨（0.02 mol·L-1）作為流動(dòng)相，有效分離6種人工合成色素[9]。本研究在翻閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，最終確定流動(dòng)相為乙腈和乙酸銨（0.02 mol·L-1）進(jìn)行梯度洗脫[10]。同時(shí)，檢測(cè)波長依舊選擇254 nm。6種人工合成色素保留時(shí)間及分離度見表4。

表4 6種人工合成色素分離度

3 結(jié)論

綜上所述，本文采取高效液相色譜法對(duì)食品中6種人工合成色素同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，采取固相萃取小柱（ProElut PwA-2）凈化樣品，方法操作簡(jiǎn)單且快速，能夠獲取準(zhǔn)確性較高的測(cè)定結(jié)果。本研究中設(shè)計(jì)的色譜分離條件在分離6種人工合成色素方面較為高效。綜合而言，本研究中建立的方法靈敏度高、樣品處理簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短以及檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，適用于食品中多種人工合成色素的同時(shí)檢測(cè)。