河南省土壤肥料站 程傳凱
氨基酸水溶肥料作為肥料行業(yè)的新成員,除具有水溶肥料易溶解、易吸收等優(yōu)點外,還具有調(diào)節(jié)植物生長和土壤酸堿度的特點。近年,河南省針對氨基酸水溶肥料進行了大量作物田間試驗,加上水肥一體化技術(shù)的推廣和春季“一噴三防”項目的大力推動,使農(nóng)民真正看到良好的效果。但在氨基酸水溶肥料快速發(fā)展的同時,由于大家對氨基酸肥料缺乏了解,再加上氨基酸水溶肥料生產(chǎn)對設(shè)備場地的要求相對較低,導(dǎo)致氨基酸水溶肥料產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊,在一定程度上限制了氨基酸肥料的發(fā)展。河南省土壤肥料站作為肥料質(zhì)量監(jiān)督的重要一環(huán),有必要引進氨基酸水溶肥料檢測儀器,開展氨基酸水溶肥料檢測工作。
氨基酸水溶肥料檢測標(biāo)準(zhǔn)——《水溶肥料 游離氨基酸含量的測定》(NY/T 1975-2010)是氨基酸水溶肥料檢測的主要依據(jù),標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)提到使用液相色譜法中的氨基酸自動分析儀法(柱后衍生法)和柱前衍生法兩種方法測定水溶肥料中游離氨基酸的含量。而自動分析儀法是最終仲裁法。本文主要以柱后衍生法為基礎(chǔ),以德國塞卡姆全自動氨基酸分析儀為主要檢測儀器,分析檢測過程中常見的幾種故障和解決方法。
由于全自動氨基酸分析儀在運行中主要靠泵推動試劑進行檢測,一旦氣泡進入泵頭,將造成液體流速不穩(wěn)甚至完全停止,泵壓來回變化或泵壓降低,圖譜錯亂甚至無峰。分析產(chǎn)生原因主要有以下幾點:首先,試劑更換或者添加試劑時沒有及時排氣泡;其次,全自動氨基酸分析儀的自動化程度較高,且單針運行時間約為1 h,如果樣品較多,儀器分析的時間將會延長,某一種試劑在運行中耗盡并且沒有得到補充,那么密封氮氣將會隨管路進入儀器。
通過與工程技術(shù)人員溝通、整理操作規(guī)程,檢測人員在每次運行儀器前要檢查各個試劑余量,確保能夠滿足當(dāng)前批次使用,然后在每次更換或添加試劑后及時進行管路排除氣泡操作,確保管路中沒有氣泡。
全自動氨基酸分析儀為了降低后期使用成本,除能夠使用原廠茚三酮試劑外,還提供了氨基酸分析所需茚三酮試劑的配比方法。檢測人員在實際化驗中可以根據(jù)廠家提供的試劑配置方案自行配置,從而大大節(jié)約試劑成本。由于茚三酮容易氧化變質(zhì),根據(jù)化驗需要自行配置茚三酮試劑,可防止剩余試劑因為放置時間過長而變質(zhì)。但是,由于精密度高,儀器對試劑的要求非常高,使用純度達不到要求的茚三酮試劑極易發(fā)生氧化造成變質(zhì)失效,且由于這種試劑所含雜質(zhì)較多易造成儀器在運行時堵塞毛細管,使儀器內(nèi)壓力過大損壞反應(yīng)單元。
1.檢測人員配置茚三酮溶液時要使用大廠出品的茚三酮,品質(zhì)有保證;使用0.45 mm 孔徑濾膜進行過濾,去除雜質(zhì),減少堵塞毛細管的概率。
2.在檢測過程中出現(xiàn)的反應(yīng)顏色或者壓力異常,很有可能是由于茚三酮溶液變質(zhì)造成的。遇到這種情況應(yīng)立即終止儀器運行,檢查管路,運行管路清洗程序。如果仍然不能使壓力降低,原因就能夠確定為管路已經(jīng)堵塞,需要把反應(yīng)池兩頭的毛細管反接,進行反沖。
由于Cys 對pH 最敏感,所以配置的鉀鈉緩沖液對pH 的要求非常高。鉀鈉緩沖液的pH 要為5.51±0.03。pH 偏高就會造成Cys 出峰提前與Ala 粘連或重疊;相反,如果pH 偏低,Cys 則與Val 粘連或重疊,無法正常積分。而影響pH 最主要的因素是溫度,由于配置鉀納緩沖溶液時使用乙酸,一旦溫度過高,乙酸容易揮發(fā)造成pH的變化。
通過實際驗證,配置鉀鈉緩沖液要在低溫條件下使用磁力攪拌,并且使用保鮮膜覆蓋燒杯以免造成乙酸揮發(fā)。溶解試劑應(yīng)避免使用超聲波震蕩儀,因為超聲波震蕩儀在工作時會產(chǎn)生一定熱量,容易造成鉀鈉緩沖溶液pH 的變化。
實際操作中會出現(xiàn)個別樣品茚三酮試劑濃度較高,常規(guī)清洗程序和洗液不能夠徹底去除管路內(nèi)殘留的茚三酮試劑。儀器如果不連續(xù)使用,容易在管路內(nèi)部殘留茚三酮試劑沉淀,堵塞管路。
通過多次摸索和試驗,提高異丙醇洗液濃度至50%,并且把自動清洗程序連續(xù)運行2 遍,能夠較好地保證儀器正常運行。