丁燕霞

(浙江大學(xué)實驗動物中心，浙江 杭州 310058)

實驗動物是整個生命科學(xué)研究不可或缺的工具，實驗動物質(zhì)量的好壞直接影響著實驗結(jié)果。屏障設(shè)施是實驗動物穩(wěn)定生存的環(huán)境條件，是質(zhì)量合格的依據(jù)，同時也是實驗結(jié)果得以保障的基礎(chǔ)。浙江大學(xué)實驗動物中心的實驗動物屬于無特定病原體動物(SPF)，這意味著屏障設(shè)施在使用過程中要嚴格控制微生物，防止因為人員流動、動物接收、物品傳遞等過程帶來微生物污染，影響實驗動物質(zhì)量。無特定病原體動物屏障設(shè)施消毒與一般實驗動物比較更具嚴格的要求，其措施更應(yīng)符合科學(xué)規(guī)范[1]。

1 屏障設(shè)施常見的消毒方法

消毒是指用物理化學(xué)或生物的方法清除或殺滅環(huán)境或媒介物上除芽孢以外的所有病原微生物的過程[2]。常見的消毒方式如下。

1.1物品和動物消毒 進入屏障設(shè)施內(nèi)的物品種類繁多，有飼養(yǎng)生產(chǎn)相關(guān)的飼料、消毒劑，也有實驗相關(guān)的藥品、細胞、儀器設(shè)備等，根據(jù)物品的種類和性狀采取以下三種不同的消毒方式。

1.1.1高壓蒸汽滅菌器消毒對于物品消毒的原則為凡是能高溫高壓的物品均采用高壓蒸汽滅菌器消毒，如飼養(yǎng)相關(guān)的墊料、飲水、IVC籠具、工作服、實驗相關(guān)的記錄紙、手術(shù)器械、離心管、動物轉(zhuǎn)運盒等，均在121 ℃，30 min條件下高溫高壓處理達到消毒滅菌目的。

1.1.2紫外傳遞窗消毒法對于一些不能高溫高壓的物品則首先采取消毒液對物品表面消毒，后經(jīng)由傳遞窗紫外照射10 min后傳入屏障設(shè)施。根據(jù)不同的物品采取不同的消毒液消毒方式：拖鞋可以用消毒液浸泡消毒后傳入傳遞窗；實驗儀器，如跑步機、血糖儀等，組裝前需要用酒精擦拭消毒，之后放入傳遞窗消毒；一般的實驗用品及動物，如注射器、飼料等，用消毒液對物品表面噴霧消毒后放入傳遞窗。

1.1.3化學(xué)消毒法包括熏蒸和擦拭消毒法，屏障設(shè)施使用過程中會遇到更換IVC籠架、小推車、高效過濾器、呼吸麻醉機等，而這些大型物品無法通過傳遞窗進入屏障，一般會采用熏蒸消毒法和擦拭消毒法。IVC，小推車，高效過濾器等物品在進入屏障設(shè)施前可以在專用房間里用高錳酸鉀和甲醛進行熏蒸消毒，消毒結(jié)束待氣體排出后，經(jīng)由大物品通道進入屏障設(shè)施；大型實驗儀器，則采用75%酒精擦拭表面后，在緩沖間用紫外線消毒十分鐘后傳入屏障設(shè)施。

1.2人員消毒 人員不能和物品一樣做到徹底消毒，所以人員采用隔離衣物包裹消毒[3]。人員按相關(guān)操作規(guī)程進入規(guī)定實驗區(qū)域外圍后，在門口更換一更拖鞋，進入一更脫掉外套，存放貼身物品，對手噴霧消毒后進入二更，按規(guī)定穿戴好隔離服和口罩后，隔離服穿戴完畢后要求頭發(fā)、隨身衣物不外露，手套包裹在衣袖內(nèi)，經(jīng)由風(fēng)淋室風(fēng)淋30 s后進入屏障設(shè)施，更換二更拖鞋，之后進入相應(yīng)的飼養(yǎng)間操作。

1.3環(huán)境消毒及消毒劑選擇 屏障設(shè)施在啟用后，受到實驗動物和實驗人員的影響，環(huán)境中的微生物增加，因此消毒成為了維持屏障內(nèi)環(huán)境的唯一手段。消毒劑是指能殺滅傳播媒介上的微生物并達到消毒要求的制劑，屏障設(shè)施內(nèi)消毒要注重消毒劑的選擇，消毒劑消毒效果的好壞直接影響著屏障設(shè)施內(nèi)的生物潔凈度。

1.3.1屏障設(shè)施內(nèi)消毒劑選擇的一般原則如下：(1)安全、低殘留，對設(shè)備或表面盡可能無腐蝕性，對產(chǎn)品無毒，無污染；(2)宜與常規(guī)使用的清潔劑相容，水中溶解度高；(3)消毒作用時間長；(4)符合需要控制微生物的類型和數(shù)量。

1.3.2選擇消毒劑時要注意消毒液的類型，消毒液的選擇和使用是整個過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。屏障設(shè)施綜合考慮以上因素，選用季銨鹽類(百毒殺消毒液)、過氧化物類(過氧乙酸消毒液)、含氯消毒劑(三氯異氰尿酸、次氯酸鈉)三類消毒劑進行每月交替輪流使用[4-5]。

1.3.3根據(jù)不同房間區(qū)域，不同消毒方式，屏障內(nèi)不同物品采取不同的消毒頻率。如飼養(yǎng)間地面每天用消毒液浸泡的拖把拖地兩次；每天換籠工作結(jié)束后對房間進行噴霧消毒；房門及門把手每兩周擦拭消毒一次；飼養(yǎng)間墻面，天花板，房間回風(fēng)口初效清洗、房間置物架等是每月消毒一次；小鼠的IVC籠架每季度清洗消毒一次。

2 消毒管理過程中存在的問題

在日常的消毒管理中，由于人員混雜，實驗人員未選擇正確的消毒措施，導(dǎo)致物品消毒不徹底影響屏障環(huán)境；傳遞窗數(shù)量有限，實驗人員在物品未達到消毒時間時就拿出來使用，給屏障環(huán)境帶來了污染風(fēng)險；高壓蒸汽滅菌器在使用過程中發(fā)生故障，維修周期影響物品的消毒使用；飼養(yǎng)管理人員知識水平參差不齊，大部分都不具備實驗動物疫病防控知識，對屏障內(nèi)無菌操作和消毒工作的意識淡薄，導(dǎo)致消毒過程中不注意把控細節(jié)，忽略掉邊邊角角的消毒，造成設(shè)施內(nèi)飼養(yǎng)環(huán)境消毒不徹底，消毒頻率不足無法達到消毒效果；動物中心采購人員購買消毒劑的數(shù)量偏多，各區(qū)域領(lǐng)用不及時造成消毒劑過期；各飼養(yǎng)區(qū)域為操作方便，長時間使用同一類消毒物品導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生耐藥性，以及消毒液使用過程中不按說明書操作，不按規(guī)定比例隨意配制消毒液，影響消毒效果[6-7]。

3 改進措施

3.1加強消毒管理制度 中心制定了一系列的消毒管理制度來規(guī)范飼養(yǎng)員的操作，定期對屏障設(shè)施內(nèi)外環(huán)境、倉庫、空調(diào)機房等區(qū)域消毒。此外還做好滅蚊滅蠅、除蟲防野鼠等工作，避免有害生物傳播疫病。外來實驗動物進入屏障設(shè)施時，檢查是否具備質(zhì)量合格證，動物外包裝是否完好不漏氣；檢查合格后對動物的外包裝進行充分消毒后傳入屏障設(shè)施。

3.2規(guī)范消毒劑的使用 消毒劑的購買由獸醫(yī)清點庫存后定期把采購計劃告知采購部門，按照區(qū)域使用量采購，這樣從源頭上規(guī)范了消毒劑的輪換使用，同時也杜絕了消毒劑存放過期的情況。同時中心獸醫(yī)制定了一系列的消毒劑領(lǐng)用與監(jiān)督使用制度，配有消毒劑配制表，消毒試劑標(biāo)簽，規(guī)定每位飼養(yǎng)員配制好消毒劑后，在容器上貼標(biāo)簽，注明品名、濃度、用途、配制時間、有效期、配制人，做好配制記錄。獸醫(yī)每季度結(jié)合監(jiān)控回放和消毒劑配制記錄表抽查是否規(guī)范使用消毒劑，避免濫用消毒劑。

3.3加強傳遞窗使用管理 日常操作過程中，出現(xiàn)隱患最多的就是供實驗人員傳遞物品的傳遞窗，規(guī)范了傳遞窗的使用就等于進入屏障設(shè)施內(nèi)的物品消毒基本得到了保障。工作人員在傳遞窗上張貼了傳遞窗使用規(guī)范，在一定程度上減少了違規(guī)使用傳遞窗的操作；其次，工作人員會不定期在傳遞窗旁邊監(jiān)督實驗人員使用傳遞窗，如發(fā)現(xiàn)物品消毒方式不正確，及時制止并糾正；最后，對于違規(guī)使用傳遞窗的實驗人員，中心制定了違規(guī)人員處理辦法，進入屏障設(shè)施人員每人有初始12分的信用分，如嚴重違規(guī)，扣完12分，并取消進入屏障設(shè)施的資格[8]，2個月后方可重新參加培訓(xùn)獲得準入資格。

3.4設(shè)施設(shè)備的定期維護檢測 規(guī)范高壓滅菌器的使用，只有持有特種設(shè)備操作上崗證的工作人員才可以操作滅菌器。設(shè)施設(shè)備組做好安全檢查，重點檢查安全閥、蒸汽發(fā)生器、水位開關(guān)，鍋爐門蓋的密封圈等；設(shè)施設(shè)備的定期檢驗和維護，做好巡檢和維護記錄，確保設(shè)備的安全有效使用[9]。獸醫(yī)每季度用生物指示劑來檢測高壓滅菌器的滅菌效果，以保證進入屏障設(shè)施內(nèi)物品都能夠達到徹底消毒的目的。

4 結(jié)語

屏障環(huán)境設(shè)施運行的成本高，責(zé)任重大，消毒管理是設(shè)施運行中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。制定科學(xué)的消毒方案并嚴格實施，加強實驗操作人員的管理，進而提供給實驗動物一個科學(xué)，標(biāo)準的生存環(huán)境，以便獲得可靠的研究成果。同時加強對工作人員的教育培訓(xùn)，讓他們掌握消毒的基本知識，培養(yǎng)無菌操作意識，從而能夠更好的為實驗動物和實驗人員服務(wù)。