基于免疫生物傳感器的大田軟海綿酸檢測研究進展

唐恒坤， 吳惠娟， 楊敏儀， 陳 睿， 高燁宏， 王榮智， 汪世華

(福建農林大學生物農藥與化學生物學教育部重點實驗室， 福建福州 350002)

大田軟海綿酸(okadaic acid，OA)是一種強效的聚醚類海洋毒素，作為腹瀉性貝毒的主要成員，可引起明顯的胃腸功能紊亂，出現嘔吐、腹瀉和惡心等癥狀(Manitaet al，2017)，具有神經毒性、肝臟毒性和細胞毒性(Kamatet al， 2013)。 該毒素主要由毒性甲藻產生，經食物鏈的傳遞，在貝類的消化腺中積累(Fernandezet al，2002；馮振洲，2010)，特別是在藻類水華嚴重的海域(Nascimentoet al，2005)。 當攝入這些被污染的貝類后，會威脅人類健康(EFSA，2008)。鑒于這些危害，我國對海洋產品的OA 含量制定了標準:若100 g 樣品中OA 含量大于16 μg，則被認定為有害，人類不宜食用(中國國家標準化管理委員會，2016)。

目前主要的檢測方法有小鼠生物測定法(MBAs)(Vieiteset al，1996)、液相色譜-質譜法(LC-MS)(Ciminielloet al，2006)、蛋白磷酸酶抑制劑實驗法(PPIA)、細胞毒性實驗法(Dellaet al，1999)、免疫生物傳感器法(Le Berreet al，2015)等。 傳感器是信號轉化的工具，由響應原件和報告原件組成，響應原件與被檢測物相互作用，完成信號輸入、信號產生，并將這些信號“可視化”輸出。 輸出的形式有光信號、電信號、聲信號等。 理想的傳感器能將監(jiān)測到的微量輸入信號準確地轉化成高強度的輸出信號。 因此，研究人員不斷地更新迭代出豐富多樣的響應原件和基于不同原理多學科交叉的報告原件。 免疫生物傳感器作為當前較熱門的傳感器，它的響應原件是抗體，基于抗原抗體的高親和力、高特異性相互作用，將抗原抗體反應傳遞給報告原件，最終轉化成各種形式的輸出信號，實現對目標物(抗原)定性或定量檢測(Hayatet al，2012b)。 與傳統(tǒng)方法相比，免疫生物傳感器在滿足檢測標準的情況下，檢測結果準確靈敏，便攜快速，不需要昂貴的儀器設備和專業(yè)的操作人員，也不會被生物倫理問題困擾。 近年來，隨著新材料(如納米材料)、磁珠技術、電化學方法、芯片傳感器、聲波平臺等技術的快速發(fā)展，加速了傳感器中報告原件的開發(fā)，新的免疫生物傳感器方法也如雨后春筍般應運而生。

我國海洋經濟蓬勃發(fā)展，海洋活動頻繁，部分海域出現富營養(yǎng)化，藻類瘋長，因此OA 檢測成為海洋生產活動中不可或缺的一部分，鑒于免疫生物傳感器的優(yōu)勢，近年來開發(fā)了很多這類的檢測方法。 傳統(tǒng)的OA 免疫生物傳感器檢測方法主要由酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)(Heet al，2016)、免疫層析技術(Liuet al，2014)，簡單的電化學方法(Campàset al，2008)等組成，但隨著OA 檢測要求的提高，需要開發(fā)出更新穎的方法。 因此，本文綜述了傳統(tǒng)OA 免疫生物傳感器檢測技術的改良和創(chuàng)新，及近些年剛起步的基于表面等離子共振和聲波平臺免疫傳感器法，著重介紹了這些方法的原理及創(chuàng)新之處，可為未來OA 檢測方法進一步開發(fā)提供參考。

1 酶聯(lián)免疫吸附試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗憑借其高靈敏度、準確性、視覺效果直觀、可同時檢測大量樣品且結果易于分析等優(yōu)點，成為檢測 OA 的常規(guī)方法(Heet al，2016；Wanget al，2017)。 有報道顯示，傳統(tǒng)間接競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(icELISA)的檢測限(limit of detection，LOD)達到了12 pg·mL-1，檢測上限為750 pg·mL-1(Wanget al，2017)。 隨著OA 檢測的需求逐漸增加，傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附試驗被不斷地改良，改良的目標主要聚焦于放大顯色酶的發(fā)光信號，采用的方法主要使用化學發(fā)光試劑、磁珠、生物素-親和素等。

1.1 化學發(fā)光免疫分析

人們發(fā)現將一些特殊的化學試劑添加到ELISA 反應體系中會增強顯色信號，這就是化學發(fā)光免疫分析。 近年來報道的方法之一是使用化學發(fā)光試劑(如吖啶類化合物)代替標記在抗原或抗體上的顯色酶，通過顯色底物的光強與被測抗原或抗體含量的關系進行檢測(周宜開等，1996)。 另一種方法是將增強劑(如酚類及其衍生物、苯基硼酸衍生物等)添加到顯色底物中以增強發(fā)光強度，這種嘗試較多(Dotsikaset al，2007)。 如使用羥基苯烯酸作為增強劑的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測OA，檢測限可達1.232 ng·kg-1(王權，2011)。 而聯(lián)合使用3-(10′-吩噻嗪基)-丙烷-1-磺酸鹽與4-嗎啉吡啶作為增強劑的直接競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測 OA 時，檢測限可達0.01 ng·mL-1(Vdovenkoet al，2012，2013)。 從結果來看，這兩種基于不同競爭方法的ELISA 的檢測限并沒有顯著降低。 因此，未來的研究可以集中在這些試劑對酶聯(lián)免疫吸附試驗系統(tǒng)其他方面的影響，特別是試劑對改善顯色酶和顯色底物穩(wěn)定性的作用。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗中磁珠的使用

傳統(tǒng)ELISA 固定抗原或抗體的方式通常是將抗原或抗體直接吸附在酶標孔底部，這種方法雖然操作簡單，但是需要漫長的吸附時間才能達到滿意的吸附率，而且孔底面積也限制了方法改良的空間。 近年來磁珠載體已經廣泛用于固定抗體或抗原(Dominguezet al，2012)，磁珠通過磁場的作用被附著在酶標孔中，憑借其易于分離、接觸面積大、表面功能多樣性強及良好的生物相容性等優(yōu)點被廣泛利用(Qiet al，2009；Zhanget al，2010)。 其中開發(fā)的熱點集中在賦予磁珠功能性用以負載抗原或抗體，如蛋白G 涂層磁珠(Hayatet al，2012a)、鏈霉素修飾磁珠(Dominguezet al，2012)等。 碳殼磁珠是最近被報道的磁珠，它因糖基化修飾而獲得羥基豐富的表面，這些羥基易于被環(huán)氧樹脂激活，成為了檢測OA 過程中的免疫測定載體，該方法采用了直接競爭法，大量的羊抗鼠抗體被固定在磁珠表面，集中放大了反應信號，樣品中的OA 和OA 偶聯(lián)辣根過氧化物酶復合物(OA-HRP)競爭游離的抗OA 抗體(Panget al，2019)，檢測限達到0.35 μg·L-1，半抑制濃度(IC50)達到 3.27 μg·L-1。 磁珠的意義在于豐富了抗原或抗體固定化的方式，不僅能放大信號，更能將酶聯(lián)免疫吸附試驗方法朝著快速檢測、便攜檢測的方向推進，同時磁珠的多功能性在本文后續(xù)的幾個方法中也被提到。

1.3 生物素-親和素系統(tǒng)對信號的放大作用

常規(guī)的顯色反應是通過辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase， HRP)完成，單純增加辣根過氧化物酶的數量也許可以放大發(fā)光信號，也就是將更多的辣根過氧化物酶偶聯(lián)到二抗上，恰好生物素-親和素系統(tǒng)可以起到這種作用。 近年來也有報道將生物素-親和素系統(tǒng)融入了酶聯(lián)免疫吸附試驗方法中檢測OA，起到了不錯的效果。 與以往酶聯(lián)免疫吸附試驗不同的是，HRP 沒有直接標記在二抗上，而是標記在了親和素上，生物素結合到了二抗上，借助生物素與親和素“一對多”的結合，讓更多的辣根過氧化物酶結合到二抗上，最終放大了顯色信號，檢測限達到0.04 μg·L-1(邱先鑫，2017)。 這與以往的“一個辣根過氧化物酶結合一個二抗”相比，“多個辣根過氧化物酶結合一個二抗”具有明顯的信號放大的優(yōu)勢，但目前的研究中，實現上述結合方式采取的方法是分步進行的，即二抗結合完OA 單抗后，結合了辣根過氧化物酶的親和素才來結合二抗上的生物素，這種方法延長了孵育時間，未來開發(fā)的方向是商品化的“二抗-親和素-生物素-辣根過氧化物酶”復合物，即革新了傳統(tǒng)的二抗，縮短反應時間，又放大反應信號。

2 免疫層析技術

免疫層析是常用的快速檢測技術，它是一類成本低、材料工具制備簡單的色譜技術，檢測結果可在10 min 左右肉眼觀察，僅需觀察檢測線和控制線的顯色情況即可得出結果(Liuet al，2014)。 由于免疫標記物(色原體)的存在，原本不可觀察的抗原抗體反應得以可視化，抗原或抗體通過靜電吸附或共價結合等方式連接色原體，這些色原體可以是納米顆粒、膠團等，這樣就實現了反應的可視化及定位，使檢測結果直觀可見。 其中，膠體金免疫層析技術有很悠久的應用歷史，也是目前比較常用的，金顆粒作為色原體，在其表面形成雙離子層，通過靜電結合吸附抗體，保留了抗體完整的生物學特性(Luet al，2012)。 膠體金免疫層析檢測OA 的報道中，其肉眼觀察到的檢測限為1 ng·mL-1(Wanget al，2017)。 目前優(yōu)化免疫層析技術的主要方向是增大色原體的比表面積，使更多的抗體負載到色原體上，提高靈敏度，例如納米花免疫層析的優(yōu)化，以膠體金顆粒為金種子，采用對苯二酚還原法，使金粒子在金種子表面生長形成側枝，最終得到更大粒徑的顆粒(Tanget al，2022)。 OA 的檢測為了達到這個目的，使用了另一種增大粒徑的方法——膠體金-納米二氧化硅法，該技術的色原體以納米二氧化硅為基底，大量吸附膠體金顆粒，再由膠體金顆粒吸附抗體，從而增加了抗體載量，檢測限為15.5 ng·mL-1，試紙條在常溫儲藏下仍然保持良好的穩(wěn)定性(李晨望， 2016)。 傳統(tǒng)的膠體金免疫層析技術很早就被開發(fā)出來了，在長期的應用中被不斷優(yōu)化，目前能完全勝任OA 的快速檢測，后來新開發(fā)的免疫層析方法雖然在檢測原理(主要是色原體的更換)上有創(chuàng)新之處，但檢測結果并沒有實質性的進展，而且工序復雜、成本提高，不利于商品化推廣。 未來免疫層析的研究工作可以基于那些經過長期優(yōu)化過的傳統(tǒng)方法，以生產、應用為導向進行開發(fā)。

3 電化學法

免疫傳感器的輸出信號不僅局限于上述的光學信號、視覺信號，針對多樣的使用場景，使用了更豐富的信號形式，其中，電化學信號憑借其實時性、易量化、靈敏度高等特點被越來越多的人關注。 基于電化學法的免疫傳感器是將抗原抗體反應轉化成易于檢測的電化學信號，通常將抗體或抗原固定在電極(如絲網印刷電極)上，采用直接競爭或間接競爭的方法檢測樣品中的 OA，電化學信號由酶標記的二級抗體標簽產生(Campàset al，2008；Zouet al，2016)，為了更直接地檢測抗原抗體之間的相互作用，使用無標簽化的電化學免疫傳感器成為近期開發(fā)的熱點。 這種傳感器一般使用伏安法，利用[Fe(CN)6]3-/4-溶液的差異脈沖實現去標簽化，此類檢測方法成本更低、響應更快、更易于制備。 例如，有報道采用蛋白G 磁珠修飾的金電極結合抗OA 抗體，基于伏安法在鐵氰化物溶液中利用直接競爭法檢測OA，檢測限為0.5 μg·L-1(Hayatet al，2012b)。 多樣性電極選擇及輸出信號的多樣化描述，使伏安法成為非常令人感興趣的研究方向。 其中石墨烯伏安法和電化學阻抗法是近期比較新穎的方法，這些方法嘗試了創(chuàng)新性的電極材料并采用多種模型相結合的方式來描述所檢測到的電化學信號。

3.1 石墨烯伏安法

電極材料是電化學法的重要組成部分。 近年來，新型電極材料石墨烯(graphene)因其特殊的電子特性(Novoselovet al，2004)和機械特性(Leeet al，2008)常被當作轉導原件應用于電化學生物傳感器中，其電子轉移率快和導電性高(Linet al，2009)的特點有利于提高電化學傳感器的靈敏性。 但是各種生物受體(如抗原、抗體)在石墨烯電極表面的固定成為了這項技術的關鍵， 有檢測OA 的報道利用4-羧基苯基重氮陽離子對石墨烯修飾的絲網印刷電極進行電化學修飾，并通過酰胺鍵的共價結合將抗OA 抗體固定在石墨烯表面，檢測過程大致為，樣品中的 OA 與 OA 偶聯(lián)雞蛋清白蛋白復合物(OA-OVA) 競爭固定化抗體，采用基于[Fe(CN)6]3-/4-下降的方波伏安法監(jiān)測競爭反應的結果，檢測限為19 ng·L-1，即使在基質背景的干擾下也能獲得良好的回收率(Eissaet al，2012)。 這項技術仍在逐步成熟中，目前生物受體的固定化方法研究較少，之前報道過基于石墨烯的電化學免疫傳感器在檢測腫瘤標志物、藥物中的應用，采用吡啶化合物與末端活性基團的π-π 堆疊或胺基反應來固定生物受體，但這些方法還未應用于OA 檢測中，未來可以開發(fā)更多生物受體的固定化方法，并應用于石墨烯伏安法，充分發(fā)揮其電極的優(yōu)勢。

3.2 電化學阻抗法

除了電極材料的優(yōu)化外，研究者也關注了輸出電信號的探測方式及描述方法的多樣性問題。 上述的伏安法一般是由氧化還原探針[Fe(CN)6]3-/4-介導的傳感器電阻的變化響應抗原抗體的結合情況，電化學阻抗法就是對這個過程的優(yōu)化，和之前描述的伏安法有交集，但側重點不同，它更側重于多樣化的電信號探測和處理。 電化學阻抗免疫傳感器經過優(yōu)化后減少了基質背景的干擾，操作更簡單，自動化程度更高且電學測量的結果更直觀。 由于電極-電解質交界處的屬性特點，在電極表面形成的生物復合物的過程可以被感知(Kharitonovet al，2000)，往往使用法拉第阻抗譜(EIS)探測這種信號，通常和各種等效電路配合工作。 當電極表面的復合物形成時(如抗原抗體的結合)，這些等效電路參數的變化就可作為對比信號(Katzet al，2003；Suni，2008)。 Hayatet al(2012a)利用電化學阻抗法檢測了OA，通過重氮偶聯(lián)反應機制將抗OA 抗體固定到絲網印刷碳電極上，抗原抗體在電極表面的結合導致電子傳遞電阻增加，循環(huán)伏安法和法拉第電化學阻抗譜描述了該過程，此外還引入了電子轉移電阻、歐姆電阻、沃伯格阻抗和恒定相位元件這類的等效電路進行性能建模，檢測限為0.3 μg·L-1，即使在貽貝樣品基質的干擾下也能得到理想的回收率。 還有研究使用電子轉移能力強的聚硫氨酸(PTh)(Liuet al，2008)修飾的三維納米電極組合作為電極，也得到了較好的效果，檢測限低至2.65×10-12g·mL-1(Liet al，2020)。 阻抗譜和等效電路的多樣化為這個方法提供了更多的優(yōu)化方向，電極材料的電子轉移能力也至關重要，這個特性也要作為前面提到的電極材料選擇依據之一。 電信號的定量能力對比其他方法更占優(yōu)勢，雖然它對設備的要求比較高，但是相較于儀器分析法專業(yè)的色譜質譜儀，還是可以被大多數的檢測實驗室接受。 電化學阻抗法今后的開發(fā)中可以聚焦于電信號探測方法和信號建模的繼續(xù)優(yōu)化，在現有的硬件條件下達到更精確的定量分析。

4 表面等離子共振技術

從簡單的物理層面來看，抗體與抗原的結合實則是一個“沉積”的過程，只有檢測混合物中含有抗原(目標檢測物)這種“沉積”才能發(fā)生，表面等離子共振技術(SPR)可以完美地捕捉這種“沉積”，近年來它也逐步加入了免疫傳感器的隊伍，例如使用表面等離子共振系統(tǒng)與抗原抗體反應相結合開發(fā)出的免疫傳感器。 表面等離子共振傳感器是很強大的傳感分析工具，通過靈敏的表面等離子共振傳感器芯片可以對分析物進行實時檢測，且具有穩(wěn)定性好、檢測快速、對樣品劑量要求低等優(yōu)勢(Hoaet al，2007)，在分子互作、藥物分析等領域已經廣泛使用。早期開發(fā)出的基于表面等離子共振的OA 檢測方法，是將OA 通過OA-N-羥基琥珀酰亞胺酯的方式固定在一個胺類表面等離子共振芯片表面，將OA 抗體和樣品混合注入系統(tǒng)，采用類似間接競爭法檢測出樣品中的OA 含量，檢測限為126 ng·g-1。 值得注意的是，在超過50 次重復使用后，仍沒有觀察到表面等離子共振芯片有明顯的活性損耗，可重復使用的特性成為了表面等離子共振方法的一個優(yōu)勢(Llamaset al，2007)。 與前面這種直接將抗體加入到流動體系內相比，Gariboet al，(2014)做了進一步的優(yōu)化，以蛋白G 涂層的磁珠作為固定化載體，將抗體偶聯(lián)在其上，與之前完全游離的抗體相比，這種結合了抗體的可動磁珠可以放大SPR 信號還能節(jié)省抗體，樣品中的OA 與固定在表面等離子共振芯片表面的OA 競爭磁珠(抗體)，檢測限達12 μg·kg-1。 這種方法集合了表面等離子共振的優(yōu)勢和磁珠的特性，雖然檢測限沒有顯著的降低，但是抗基質效應干擾能力很強。 總的來說，目前開發(fā)的基于表面等離子共振的OA 檢測法顯著的亮點是實時檢測，重復使用，而且由于核心原件(表面等離子共振芯片)是一個封閉的表面，相比于電化學法依靠與檢測物混合的氧化還原探針作為信號探測裝置而言，表現出了更好的穩(wěn)定性和可重復性，但是傳統(tǒng)表面等離子共振設備比較昂貴，需要專業(yè)的操作人員，這類傳感器的使用仍然停留在實驗室階段。 目前也在嘗試開發(fā)便攜式表面等離子共振設備，未來可以將之前的檢測模式轉移到便攜式表面等離子共振設備上，繼承之前的優(yōu)良特性。

5 聲波技術的引入

生物傳感器中的表面生成聲波技術(surface generated acoustic wave ，SGAW)在液體介質中檢測目標物時表現出很高的靈敏度。 表面生成聲波傳感器的工作原理是:壓電晶體光學拋光表面處的金屬電極，由于反壓電現象，向壓電材料發(fā)射聲波并且在基底傳播，傳感器表面的生物化學作用發(fā)生時(如抗原抗體的結合)會導致這些聲波的特性(如傳播速度、振幅或諧振頻率)發(fā)生變化。 這些變化可以被電子裝置檢測，從而提示生物化學反應的特征。 以表面生成聲波為基礎，衍生出了很多平臺，其中有報道采用愛波平臺(love wave platform)(Rocha-Gasoet al，2009) 開發(fā)了OA 檢測方法。 簡單來說，愛波平臺的裝置特點是，傳播過程中波的能量被薄導向層限制，波的傳播速度減慢，當傳感器表面發(fā)生變化時，波會受到強烈干擾，在強烈干擾下輸出給響應器的信號更明顯，即提高了靈敏性。

被報道的OA 檢測法工作流程是，先在敏感膜上沉積抗OA 單克隆抗體，再注入樣品，樣品中的OA 會結合OA 單抗，接著注入可作用于OA 其他表位的OA 多抗，OA 多抗的加入會引起頻率偏移，從而檢測到樣品中的OA，整個過程類似三明治酶聯(lián)免疫吸附試驗，報道沒有給出明確的檢測限，但僅需提供10 g 的貝類組織就可用于檢測OA(Fournelet al，2012)。 研究者Zouet al(2017)又做了進一步調整，他采用了間接競爭法，將OA 偶聯(lián)牛血清白蛋白復合物(OA-BSA)固定在敏感膜上，注入樣品和抗OA 抗體后，固定化的OA 和游離的OA 競爭抗體，當抗體結合到OA-BSA 上時產生頻率偏移，也許這個信號還不夠強，需要接著在OA-BSA-抗體復合物上增加沉積，于是用偶聯(lián)了膠體金顆粒(AuNPs)的羊抗鼠二級抗體結合到復合物上，這種“沉積”使頻率偏移的信號得以加強，檢測限可達到5.5 ng·mL-1，檢測實際樣品時，其結果與商品化的ELISA 試劑盒吻合。 利用聲波平臺檢測OA 的報道并不多，像剪切水平表面聲波(shear horizontal surface acoustic wave)、表面橫波(surface transverse wave)、撓性板波(flexural plate wave) 等平臺還沒有報道過，而且已研究的結果也沒有像傳統(tǒng)方法那般全面透徹。 未來可以嘗試更多的聲波平臺，最終選擇一種最適宜OA 檢測的平臺，充分發(fā)揮聲波平臺的優(yōu)勢，開發(fā)出高靈敏度、實時、多通道的表面生成聲波生物傳感器。

6 小結與展望

目前，隨著檢測技術的發(fā)展， 基于免疫生物傳感器的OA 檢測方法呈現多樣性的趨勢。從檢測限的角度，檢測限作為檢測方法繞不開的話題，大家都在追求更低的檢測限，但比較本文各方法的檢測限及我國OA 國家檢測標準時發(fā)現，大多數方法都滿足了國家標準，特別是用于快速檢測水產樣品的方法，檢測限只要達標即可，無需花費過多的精力去追求極低的檢測限，當然針對實驗室科研分析的檢測中檢測限越低越理想。 就定性定量檢測而言，由于檢測的目的不同，如果僅要求報告陰性或陽性，那么傳統(tǒng)的ELISA 或膠體金免疫層析就能滿足要求，但如果檢測的目的是確定檢測物中具體的OA 含量，那么電化學法、表面等離子共振技術或聲波平臺技術便更適合，這些方法的檢測結果以數據的形式直觀顯示，比傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附試驗定量來的更快速、準確、直接。 就便攜性而言，無論是免疫層析試紙條或酶聯(lián)免疫吸附試驗中的磁珠，都在縮短檢測時間、簡化檢測步驟，實現就地檢測、便捷檢測，那么未來可以繼續(xù)將檢測便攜化的思路發(fā)展下去，可以將本文提到的電化學法或聲波平臺技術等設備簡化便于攜帶，即便是在實驗室內，便攜檢測方法也能提高工作效率。 就檢測方法的可重復性及經濟性而言，可重復性是未來開發(fā)中急于解決的問題，如基于表面等離子共振技術或聲波平臺的方法有很好的重復性，正常操作的情況下可以使用很久，但是像免疫層析、ELISA 試劑盒的方法幾乎是一次性的，如果要商品化推廣，那么成本控制也要考慮，可以通過尋找廉價的等效新材料并且精細化生產來降低生產成本。 現在普遍存在檢測性能過剩的情況，高性能意味著高成本(要使用更優(yōu)良的抗體、免疫探針、電極、磁珠等)，因此要根據檢測目的制定個性化的檢測方案，“讓錢花在刀刃上”。

未來基于免疫傳感器的OA 檢測法可以朝著三個方向努力，其一是抗體優(yōu)化，抗體是免疫傳感器的核心，只有高親和力、高特異性、穩(wěn)定性強的抗體才能讓檢測方法更出彩，抗體性能的進化是優(yōu)化檢測方法的重要一環(huán)，而近年來的報道中很少有這方面的工作。 其二是完善體系，很多報道僅僅選取一類方法中的一個分支用于OA 檢測，不成體系，只有廣泛嘗試并形成體系，才能在對比中找到這類方法中最適合檢測OA 的方法，但這需要研究人員更多的投入，是一個長期的工程。 其三是商品化生產，隨著目前全世界各地水體污染嚴重化，OA 檢測的需求也越來越高，無論是就地檢測或實驗室檢測，都需要商品化的耗材、試劑，這些產品的存儲時間、保存條件或便捷性等特性也成為接下來開發(fā)過程中要考慮的問題。

本文介紹的幾種基于免疫傳感器的OA 檢測法不僅對傳統(tǒng)方法進行了改良還嘗試了與前沿技術的融合，大多數方法以原理創(chuàng)新為出發(fā)點，進一步優(yōu)化了檢測限、靈敏度、基質效應、便捷性等檢測中備受關注的問題。 由于這些方法的檢測目的、使用場景等側重點各不相同，所以評判方法優(yōu)劣的標準也不是固定的，總之檢測要為需求服務。 這些工作也為將來OA 檢測體系的完善開辟了道路。