杭州地區(qū)獻(xiàn)血者紅細(xì)胞意外抗體檢出率及分布情況的回顧性分析

吳亞玲 凌霞 俞廣舒 石潔 董杰 祝宏

紅細(xì)胞相合或者相容性輸注是保障臨床用血安全的基礎(chǔ)，其中關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是準(zhǔn)確鑒定獻(xiàn)血者血液的血型和意外抗體，這有助于提升血液安全[1,2]。研究顯示部分獻(xiàn)血者血液中存在意外抗體，它們可引起血型鑒定困難和交叉配血不合等情形，從而延誤患者治療；此外，輸注存在意外抗體的血漿，可引起潛在輸血不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)[2,3]。因此，降低獻(xiàn)血者意外抗體引起的潛在風(fēng)險(xiǎn)具有重要的臨床意義，其中的方法之一是在血站對(duì)獻(xiàn)血者血液進(jìn)行意外抗體篩選[3～5]，并根據(jù)篩選情況對(duì)血液進(jìn)行相應(yīng)的處理。本次研究回顧性分析了我中心獻(xiàn)血者意外抗體檢出率及分布情況。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018 年1 月至2020 年12 月來(lái)浙江省血液中心參與無(wú)償獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者標(biāo)本，所有標(biāo)本經(jīng)過(guò)知情同意后留取EDTA 抗凝全血待用。本次研究經(jīng)過(guò)本中心倫理委員會(huì)審批。

1.2 ABO 血型檢測(cè) 采用血型血清學(xué)技術(shù)進(jìn)行ABO 血型的正定型、反定型[6]?？笰、抗B 試劑來(lái)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司；反定型A、B 細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)室自配，采用已知A、B 血型的3 人以上同型血液混合配制。正定型、反定型操作在Beckman Coulter PK7300 全自動(dòng)血型儀上進(jìn)行，嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并根據(jù)V 型板中凝集或不凝集情況，由儀器判讀軟件直接指定獻(xiàn)血者ABO血型。

1.3 RhD血型檢測(cè) 采用血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)[7]，抗D（IgM 型）試劑來(lái)自英國(guó)Alba 生物技術(shù)有限公司。在Beckman Coulter PK7300 全自動(dòng)血型儀上進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.4 意外抗體的篩選 所有標(biāo)本采用Beckman Coulter PK7300 微孔板法（鹽水介質(zhì)法原理）進(jìn)行意外抗體篩選，篩選細(xì)胞為3 人以上的O 型混合紅細(xì)胞（自制）；RhD陰性標(biāo)本同時(shí)采用微柱凝膠卡法（抗人球蛋白法原理）進(jìn)行意外抗體篩選，篩選細(xì)胞來(lái)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司。

1.5 意外抗體的確認(rèn) 對(duì)ABO 血型正反定型不一致或者意外抗體篩選陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行意外抗體確認(rèn)。方法包括鹽水試管法和微柱凝膠卡法[2,7]，譜細(xì)胞來(lái)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司和荷蘭Sanquin 公司。依據(jù)獻(xiàn)血者血漿與譜細(xì)胞反應(yīng)的格局，判定抗體的特異性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。設(shè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 獻(xiàn)血者意外抗體分布情況 2018～2020 年共篩選獻(xiàn)血者354 286 例，意外抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者133 例，陽(yáng)性率為0.04%。常見(jiàn)的意外抗體為抗M、抗D、冷凝集素，分別為33 例（24.81%）、30 例（22.56%）、28 例（21.05%）。其他檢出抗體包括抗D+抗C 為6 例（4.51%）、抗E 為5 例（3.76%）、抗Lea+抗Leb、抗P1 各為3 例（分別占2.26%）、抗N 為2 例（1.50%）、抗c、抗Lea、抗Leb各為1 例（分別占0.75%）。此外有20 例（15.04%）獻(xiàn)血者標(biāo)本發(fā)現(xiàn)存在同種抗體，因樣本量不足未能分析出抗體特異性。

2.2 無(wú)意外抗體和有意外抗體兩組獻(xiàn)血者血型和性別分布情況見(jiàn)表1

由表1 可見(jiàn)，在ABO 血型中，無(wú)意外抗體獻(xiàn)血者的A 型血比例低于有意外抗體獻(xiàn)血者（χ2=10.13，P＜0.05），而O 型比例則高于有意外抗體獻(xiàn)血者（χ2=10.60，P＜0.05）。在Rh 血型中，無(wú)意外抗體獻(xiàn)血者RhD-型比例低于有意外抗體獻(xiàn)血者（χ2=66.49，P＜0.05）。男性、女性獻(xiàn)血者中意外抗體陽(yáng)性率分別為0.02%（46/206702）、0.06%（87/147584），女性獻(xiàn)血者的意外抗體陽(yáng)性率高于男性獻(xiàn)血者（χ2=30.90，P＜0.05）。

2.3 有意外抗體的獻(xiàn)血者年齡分布 133 例有意外抗體的獻(xiàn)血者年齡范圍為18～57 歲，其中18～20 歲為19 例（14.29%）、21～25 歲為14 例（10.53%）、26～30 歲 為10 例（7.52%）、31～35 歲 為30 例（22.56%）、36～40 歲為22 例（16.54%）、41～45 歲為9 例（6.77%）、46～50 歲為17 例（12.78%）、51～55 歲為10 例（7.52%）、56～57 歲為2 例（1.50%）。

2.4 有意外抗體的獻(xiàn)血者獻(xiàn)血次數(shù)情況 獻(xiàn)血次數(shù)范圍為1～40 次，1 次獻(xiàn)血比例占比45.86%，最多的獻(xiàn)血者獻(xiàn)血次數(shù)為40 次。具體獻(xiàn)血次數(shù)分布如下：1 次獻(xiàn)血為61 例（45.86%），2 次獻(xiàn)血為18 例（13.53%），3 次獻(xiàn)血為12 例（9.02%），4 次獻(xiàn)血為9 例（6.77%），5 次獻(xiàn)血為7 例（5.26%），6 次和7 次獻(xiàn)血均為5 例（3.76%），9 次、10 次、12 次、13 次獻(xiàn)血均為2 例（1.50%），11 次、14 次、15 次、17 次、18 次、19 次、36 次、40 次均為1 例（0.75%）。

3 討論

意外抗體曾被稱(chēng)為不規(guī)則抗體，是指正常ABO血型中抗A、抗B 之外的血型抗體。篩選獻(xiàn)血者血液中的意外抗體，可避免這種抗體引起的輸血不良反應(yīng)，有助于提升血液安全[3～5]。目前，國(guó)外部分國(guó)家強(qiáng)制性要求對(duì)獻(xiàn)血者血液進(jìn)行意外抗體篩選，但國(guó)內(nèi)法規(guī)并不要求開(kāi)展篩選，在實(shí)際工作中部分血站從血液安全角度出發(fā)，已開(kāi)始對(duì)獻(xiàn)血者血液進(jìn)行意外抗體篩選[2，5，8～10]。本次研究報(bào)道的意外抗體檢出率明顯低于朱紅芹等[11]報(bào)道的江蘇南京獻(xiàn)血人群意外抗體檢出率（0.15%）和Solanki 等[4]報(bào)道的印度人群檢出率（0.17%），這可能與獻(xiàn)血人群組成和特性以及篩選方法等有關(guān)。

本次研究發(fā)現(xiàn)獻(xiàn)血者中常見(jiàn)的意外抗體為抗M、抗D、冷凝集素?？筂 屬于MNS 血型系統(tǒng)的抗體[12]，大多屬于IgM 性質(zhì)[13]；部分抗M、抗N 在37 ℃有生物活性，可能引起直接和延遲輸血反應(yīng)?？笵屬于Rh血型系統(tǒng)的抗體，可引起新生兒溶血病和輸血反應(yīng)[14]。本次研究中所有抗D 獻(xiàn)血者均為女性，這可能與其胎母免疫刺激有關(guān)[7]。冷凝集素是冷反應(yīng)型的紅細(xì)胞抗體，屬于IgM 型性質(zhì)，通常情況下低效價(jià)冷凝集素沒(méi)有臨床意義。當(dāng)冷凝集素效價(jià)過(guò)高[15]，可以導(dǎo)致交叉配血不合。此外應(yīng)注意到本次研究中有20 例標(biāo)本同種抗體特異性不明，這主要是由于標(biāo)本量不足而引起。目前，血站針對(duì)存在意外抗體的獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的血液采取不同的處理策略，全血捐獻(xiàn)者通常紅細(xì)胞制備成洗滌紅細(xì)胞供臨床使用，含有抗體的血漿進(jìn)行報(bào)廢處理；而單采血小板獻(xiàn)血者根據(jù)其意外抗體的特性，選擇保留或者屏蔽獻(xiàn)血者的方式。

個(gè)體受到紅細(xì)胞抗原免疫刺激后可產(chǎn)生意外抗體，主要途徑包括輸血、移植和妊娠等，部分個(gè)體存在天然的意外抗體。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)女性獻(xiàn)血者的意外抗體陽(yáng)性率高于男性獻(xiàn)血者，這可能與女性存在妊娠的免疫刺激有關(guān)；從ABO 血型分布角度，A 型血比例略高，其原因有待于進(jìn)一步分析。本次研究中絕大多數(shù)獻(xiàn)血者是第一次獻(xiàn)血時(shí)發(fā)現(xiàn)存在意外抗體，但是有超過(guò)1/2 的獻(xiàn)血者存在2 次或多次獻(xiàn)血，提示獻(xiàn)血者意外抗體產(chǎn)生存在動(dòng)態(tài)過(guò)程，因此宜每次獻(xiàn)血時(shí)均篩選意外抗體。

綜上所述，本次研究回顧性分析了杭州地區(qū)獻(xiàn)血者意外抗體情況，發(fā)現(xiàn)意外抗體主要為抗M、抗D、冷凝集素；女性獻(xiàn)血者的意外抗體陽(yáng)性率高于男性獻(xiàn)血者，而無(wú)意外抗體獻(xiàn)血者和有意外抗體獻(xiàn)血者的ABO 血型分布、RhD-型比例存在差異。但本次研究由于采用鹽水介質(zhì)法原理進(jìn)行意外抗體篩選，存在漏檢IgG 型意外抗體的風(fēng)險(xiǎn)。此外有15.04%標(biāo)本未能分析出抗體特異性，可能影響抗體種類(lèi)的分布數(shù)據(jù)。今后將改進(jìn)篩選的方法，不斷完善意外抗體篩選策略。