基于量子點(diǎn)技術(shù)的非洲豬瘟抗體現(xiàn)場快速檢測試劑盒（QAIS）研究

非洲豬瘟（African swine feve，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染家豬和野豬引起的一種急性、發(fā)熱和高傳染性疾病，死亡率可達(dá)100%，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為需要通報(bào)的動(dòng)物疫病，被我國列為一類動(dòng)物疫病。我國作為世界上生豬養(yǎng)殖與豬肉制品消費(fèi)第一大國，2018 年8 月以來爆發(fā)的非洲豬瘟疫情給我國生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前世界范圍內(nèi)尚無有效疫苗或藥物治療方法，因此早期快速檢測是預(yù)防和控制非洲豬瘟最重要的手段之一。

目前，基于TaqMan 的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RTqPCR）和酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA）是廣泛使用的ASFV 診斷方法，也是歐盟參考實(shí)驗(yàn)室和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）所推薦的診斷方法。這兩種診斷方法的實(shí)施必須借助于實(shí)驗(yàn)室的特殊儀器及專業(yè)技術(shù)人員操作來完成，不能廣泛應(yīng)用于養(yǎng)豬場的現(xiàn)場快速檢測。近年來，隨著非洲豬瘟出現(xiàn)亞急性或慢性感染，基于金納米顆粒、乳膠微球或熒光染料微球的橫向流動(dòng)免疫分析方法等被用于實(shí)時(shí)檢測血清中的ASFV抗體，但其靈敏度和穩(wěn)定性還需要進(jìn)一步提高，而且不能準(zhǔn)確定量血清中ASFV 抗體含量。因此，目前沒有一個(gè)ASFV 血清學(xué)診斷技術(shù)產(chǎn)品能夠滿足早期、敏感、定量現(xiàn)場診斷的需求。

近日，在《Analytica Chimica Acta》刊登了題為“Rapid and ultra-sensitive detection of African swine fever virus antibody on site using QDM based-ASFV immunosensor (QAIS)”的研究論文，該文章報(bào)道了一種針對ASFV 血清抗體的量子點(diǎn)熒光檢測試紙條，配合手持式熒光免疫分析儀，可實(shí)現(xiàn)對ASFV 抗體進(jìn)行快速、靈敏、特異、簡便、定量的現(xiàn)場檢測。該產(chǎn)品為養(yǎng)殖場提供了快速準(zhǔn)確監(jiān)測非洲豬瘟的解決方案。

本研究中QDM 與ASFV 抗原P30 和P54 通過化學(xué)反應(yīng)制備的雙重探針經(jīng)過優(yōu)化后顯著提高了ASFV 血清抗體量子點(diǎn)熒光檢測試紙條的檢測敏感性，其檢測限可達(dá)到1∶64 000，高于目前市售的阻斷ELISA 試劑盒和膠體金檢測試紙條50 倍～500 倍。該產(chǎn)品與豬的其他病原，如PRRSV、PRV、PCV2、FMDV、CSFV、HPS（2 型、8 型、10 型）、Mhp、Mhs、Mf、SIV（H3N2）的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清無交叉反應(yīng)，具有良好的特異性。本試紙條對151 份臨床樣本（113 份ASF 陰性血清，38 份ASF 陽性血清）的雙盲檢測結(jié)果，其符合率達(dá)到98.7%。該試紙條對ASFV 抗體全程檢測僅需25 min，比常規(guī)ELISA 檢測縮短1 個(gè)多小時(shí)，并且在室溫或37 ℃條件下保存4 周后的檢測結(jié)果依舊穩(wěn)定，批內(nèi)和批間重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)（CV 值）均小于8.7%。因此本試紙條具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，配合手持熒光免疫分析儀可以滿足豬舍現(xiàn)場檢測的要求。