彭思佳， 陳寶艷， 梁靖誼， 潘兆豐， 楊云虹， 謝秋月， 孫曉峰**

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 第一臨床醫(yī)學(xué)院， 廣東 廣州 510000； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 產(chǎn)科， 廣東 廣州 510000)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)是指妊娠后首次發(fā)生的糖代謝異常性疾病[1]。GDM的發(fā)病率逐年增加，世界發(fā)病水平為9.3%～25.5%[2]。過去各國學(xué)者在GDM的診斷方法和標(biāo)準(zhǔn)、應(yīng)對哪些人群進(jìn)行干預(yù)、對何種程度的糖代謝異常進(jìn)行管理等問題上爭議不斷，因此美國國立衛(wèi)生研究院對高血糖與妊娠不良結(jié)局關(guān)系開展了全球性多中心、前瞻性的研究，解決了長期以來備受爭議的診療標(biāo)準(zhǔn)問題。2010年國際妊娠合并糖尿病組織推薦將75 g糖耐量試驗(oral glucose tolerance test, OGTT)作為GDM診斷的工具，雖然診斷標(biāo)準(zhǔn)得到明確，但GDM的治療方式依然有限，主要通過嚴(yán)格控制飲食、加強運動及胰島素干預(yù)來達(dá)到治療目的。然而，即使GDM患者孕期血糖控制達(dá)標(biāo)，仍有出現(xiàn)孕產(chǎn)期相關(guān)的母兒不良妊娠結(jié)局的可能[3]。目前GDM發(fā)病機制尚未完全明確，主要發(fā)病原因包括胰島素抵抗、脂肪細(xì)胞因子失衡、炎癥因子釋放及遺傳因素[4]，很少涉及胎盤組織的病理變化。胎盤是連接母體與胎兒的橋梁，具有物質(zhì)交換、防御、合成等多種重要功能，是維持胎兒生長發(fā)育的重要器官[5-6]。有研究表明，子癇、先兆流產(chǎn)、妊娠高血壓綜合征及胎兒發(fā)育遲緩等疾病與胎盤結(jié)構(gòu)或功能異常密切相關(guān)，但機制尚不十分明確[7]。免疫細(xì)胞浸潤模式在腫瘤方面已有大量的研究，但是在妊娠期疾病中卻鮮有報道。目前，精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)將現(xiàn)代科技與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)相結(jié)合后取得了高效精準(zhǔn)的效果，運用基因芯片可檢測同一樣本時間點內(nèi)所有基因的差異表達(dá)，對表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，已成為研究人類疾病發(fā)病機制的重要方法之一。本研究通過對基因芯片數(shù)據(jù)庫(gene expression omnibus，GEO)中GDM孕婦和無孕期合并癥孕婦配對樣本的差異關(guān)鍵基因進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析，利用評估鑒定22種免疫細(xì)胞相對含量的CIBERSORTx算法對GDM胎盤組織免疫浸潤進(jìn)行研究，預(yù)測相關(guān)免疫細(xì)胞調(diào)控方式，并收集分娩后的GDM胎盤組織和非GDM胎盤組織進(jìn)行驗證，為GDM的診斷和治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究資料

1.1.1生物信息學(xué)資料 以“gestational diabetes mellitus”“GDM”“placenta”為關(guān)鍵詞在美國國家生物技術(shù)信息中心(national center for biotechnology information, NCBI)的GEO數(shù)據(jù)庫檢索GDM胎盤基因組樣本，結(jié)合樣品質(zhì)量、納入數(shù)量等情況，最終選擇數(shù)據(jù)集GSE70493作為本研究的目標(biāo)數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集包含從32例GDM病例和31例無孕產(chǎn)期并發(fā)癥的妊娠婦女分娩后收集的共63個胎盤組織標(biāo)本資料。

1.1.2胎盤組織 收集GDM患者和非GDM患者的胎盤組織各3例，每塊組織約0.5 cm×1 cm。將組織塊置入無RNA酶的EP管內(nèi)，用剪刀剪成碎塊用于生物信息學(xué)結(jié)果的驗證。

1.2 研究方法

1.2.1差異基因分析 使用GEO數(shù)據(jù)庫中的在線分析工具GEO2R(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r/)對所研究數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析，以矯正P<0.01，|logFC≥1|的標(biāo)準(zhǔn)篩選出差異基因(DEGs)，正值與負(fù)值分別代表上調(diào)和下調(diào)。導(dǎo)出數(shù)據(jù)后在GEO數(shù)據(jù)庫中檢索對應(yīng)測序平臺GLP17586(Affymetrix Human Transcriptome Array 2.0)的注釋文件，下載并整理格式后對獲得的差異基因進(jìn)行注釋，以便進(jìn)行下一步分析。將注釋后的DEGs導(dǎo)入R語言(版本3.6.2)，調(diào)取ggplot2包繪制差異基因火山圖。

1.2.2基因本體(gene ontology，GO)功能及KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析 為了評估DEGs的功能及所富集的通路，將注釋后的DEGs名稱上傳至DAVID數(shù)據(jù)庫(https://david.ncifcrf.gov/home.jsp)，使用該網(wǎng)站的基因ID(Identity Document)轉(zhuǎn)換工具(Gene ID Conversion Tool，https://david.ncifcrf.gov/conversion.jsp)將DEGs名稱轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)基因名(official gene symbol)，然后將轉(zhuǎn)換后的基因名上傳至Metascape數(shù)據(jù)庫(http://metascape.org/gp/index.html#/main/step1)，限定物種為H species，分析DEGs中生物過程(biological processes, BP)、細(xì)胞成分(cellular components, CC)和分子功能(molecular functions, MF)類別中富集的GO項和KEGG通路，最后以P<0.05為閾值對所得到的超幾何分布進(jìn)行篩選。

1.2.3構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)(protein-protein interaction，PPI) 利用蛋白相互作用檢索工具STRING數(shù)據(jù)庫(ver.11.5，https://string-db.org/)分析DEGs與其他基因之間的功能相互作用。將DEGs上傳至STRING數(shù)據(jù)庫，設(shè)置置信度評分閾值為>0.4進(jìn)行分析計算，下載分析完成的網(wǎng)絡(luò)模型，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape(版本號3.9.0，http://www.cytoscape.org/)中繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖。使用Cytoscape中的CentiScaPe(版本號2.2)工具分析PPI網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，根據(jù)自由度(貢獻(xiàn)度)≥均值的標(biāo)準(zhǔn)選擇后續(xù)分析基因，分別根據(jù)自由度和中介中心性數(shù)值由大到小對所有節(jié)點進(jìn)行排序，篩選出各組中排名前10位的差異基因，并在其中挑選出同時滿足自由度和中介中心性值都在前10位的基因作為關(guān)鍵差異基因。

1.2.4胎盤免疫細(xì)胞浸潤模式的評估 利用基于547個條形碼基因表達(dá)值對樣品中22個免疫細(xì)胞比例進(jìn)行估計的CIBERSORTx反卷積算法工具(https://cibersortx.stanford.edu/)對人類免疫細(xì)胞亞型表達(dá)矩陣進(jìn)行去卷積分析，模擬計算出數(shù)據(jù)集樣品中包括T細(xì)胞、原始和記憶B細(xì)胞、靜止和活化NK細(xì)胞(natural killer cell)在內(nèi)的22種免疫細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄特征矩陣，計算次數(shù)設(shè)置為100次。將計算結(jié)果導(dǎo)入R語言中，利用R語言中的ggplo2包和Bioconductor(https://www.bioconductor.org/)包進(jìn)行統(tǒng)計分析并繪制兩組樣本中每種免疫細(xì)胞的表達(dá)豐度熱圖、對比條狀圖及箱線圖。

1.2.5逆轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法對GDM胎盤組織關(guān)鍵差異基因的驗證 用TRIzol試劑(Invitrogen，美國)提取2種胎盤組織的總RNA。取總RNA 1 μg，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(艾科瑞生物，中國)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。按照SYBR Green PCR試劑盒(艾科瑞生物，中國)說明配置含cDNA、引物、SYBR的混合體系，在Bio-Rad CFX96 PCR儀中完成PCR擴增。反應(yīng)條件為：95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s、60 ℃ 40 s共40個循環(huán)，65 ℃ 5 s，0.5 ℃ 60 s。使用β-actin作為內(nèi)參照，使用2-ΔΔCt法計算2種胎盤組織的基因補體C3 (complement 3，C3)、人類白細(xì)胞抗原B(major histocompatibility complex class I B，HLA-B)、HLA-C、C-X-C基序趨化因子10(C-X-C motif chemokine ligand 10，CXCL10) mRNA的相對表達(dá)水平。引物序列見表1。

表1 C3、CXCL10、HLA-B及HLA-C基因的PCR引物序列Tab.1 PCR primer sequences for C3, CXCL10, HLA-B, and HLA-C genes

1.2.6Western blot法對GDM胎盤組織關(guān)鍵差異蛋白的驗證 取胎盤組織碎塊，加入適量RIPA裂解液(碧云天，中國)，4 ℃下使用勻漿15 s，置于冰上裂解20 min， 4 ℃、14 000 r/min離心10 min，吸取上清，用BCA蛋白濃度檢測試劑盒(Biosharp，中國)檢測蛋白濃度；使用小型垂直凝膠蛋白電泳系統(tǒng)(Bio-Red，美國)分離總蛋白至聚偏二氟乙烯膜(MILLIPORE，美國)，洗膜、一抗(艾比瑪特生物科技，中國)孵育、過夜，化學(xué)發(fā)光法顯色。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 GDM關(guān)鍵DEGs分析

通過對GEO數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)集的檢索篩選，得到GDM胎盤基因表達(dá)譜測序數(shù)據(jù)集GSE70493，收集到32例GDM病例及31例無孕產(chǎn)期并發(fā)癥的妊娠婦女分娩后共63個胎盤組織數(shù)據(jù)；利用基于limma包構(gòu)建的在線分析工具GEO2R對數(shù)據(jù)集GSE70493進(jìn)行分析，剔除映射多個基因的探針數(shù)據(jù)，保留具有獨特基因的探針，最終篩選出207個DEGs，其中包括60個上調(diào)基因和147個下調(diào)基因，根據(jù)注釋文件對這些DEGs進(jìn)行注釋。將分析后的DEGs數(shù)據(jù)導(dǎo)入R中用于數(shù)據(jù)可視化分析，調(diào)用gglop2包繪制火山圖(圖1)。

注：圖中每個紅點代表一個P<0.05的上調(diào)DFG，每個藍(lán)點代表1個P<0.05的下調(diào)DEG，灰點代表無顯著差異基因。圖1 GDM關(guān)鍵DEGs分析Fig.1 Analysis of key DEGs in GDM

2.2 GDM關(guān)鍵DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)分析

經(jīng)STRING工具分析并由Cytoscape繪制得到的PPI網(wǎng)絡(luò)中，共有105個節(jié)點和235個基因?qū)?。通過CentiScaPe工具分析得到PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中各節(jié)點信息，計算出自由度值均值為4.74，符合自由度值≥4.74的基因共有39個，占所有節(jié)點的37.1%，根據(jù)自由度值及中介中心性值分別篩選前10位的節(jié)點(表2)。結(jié)果顯示，C3、HLA-B、HLA-C及CXCL10在自由度及中介中心性中均在前10位以內(nèi)，表明其在PPI中的重要程度較高。

表2 自由度值和中介中心性值排名前10的差異基因列表Tab.2 Top 10 DEGs rankey by degree and betweenness

2.3 GO功能富集分析與KEGG通路分析

使用Metascape數(shù)據(jù)庫對DEGs進(jìn)行GO功能富集分析后，共獲得富集的生物進(jìn)程20條，主要富集于免疫效應(yīng)(immune response)、機體防御反應(yīng)(regulation of immune response)、免疫反應(yīng)分子介質(zhì)生成與釋放(production of molecular mediator of immune response)、白細(xì)胞分化(leukocyte differentiation)、體液免疫反應(yīng)(humoral immune response)、免疫系統(tǒng)負(fù)向調(diào)節(jié)(negative regulation of immune system process)、MAPK級聯(lián)調(diào)控(regulation of MAPK cascade)等；獲得富集的細(xì)胞組成11種，主要分布在細(xì)胞膜外(side of membrane)、吞噬泡(lytic vacuole)、受體相關(guān)復(fù)合物(receptor complex)、主要組織相容性復(fù)合體蛋白復(fù)合物(MHC protein complex)、液泡膜(secretory granule membrane)等；獲得分子功能11種，主要涉及抗原結(jié)合(antigen binding)、泛素樣蛋白連接酶結(jié)合(ubiquitin-like protein ligase binding)、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分(extracellular matrix structural constituent)、免疫受體活化(immune receptor activity)、CXCR3趨化因子受體結(jié)合(CXCR3 chemokine receptor binding)等。通過KEGG通路富集分析，根據(jù)p值確定排名前20的信號通路，主要包括同種異體移植排斥通路(cytokine-cytokine receptor interaction)、移植無抗宿主病(graft-versus-host disease)、Ⅰ型糖尿病(type Ⅰ diabetes mellitus)、自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmune thyroid disease)、抗原加工和呈遞(chemokine signaling pathway)、細(xì)胞黏附分子(cell adhesion molecules, CAMs)以及Toll樣受體信號通路(toll-like receptor signaling pathway)。見圖2。

注：A為GO功能富集結(jié)果，B為KEGG通路結(jié)果，B中網(wǎng)格圖中橫軸為富集系數(shù)，縱軸為KEGG富集通路名稱，點狀標(biāo)記的直徑越大代表富集的基因數(shù)量越多，顏色越接近橙色代表顯著性越高，越接近藍(lán)色代表顯著性越低。直條圖中橫軸為生物進(jìn)程(綠色)/細(xì)胞組成(橙色)/分子功能(紫色)的名稱，縱軸為富集系數(shù)。圖2 GDM關(guān)鍵DEGs的KEGG及GO分析結(jié)果Fig.2 Results of KEGG and GO analysis about key DEGs of GDM

2.4 胎盤免疫細(xì)胞浸潤模式分析

從PPI、GO功能富集分析與KEGG通路分析中可以發(fā)現(xiàn)，免疫相關(guān)基因及免疫相關(guān)通路在GDM妊娠孕婦與非GDM妊娠孕婦胎盤組織中有明顯的差異。為了更深入探究GDM的病理變化，進(jìn)一步分析胎盤組織中的免疫環(huán)境、探究免疫相關(guān)通路可能的作用機制。首先，對樣品進(jìn)行了22種免疫細(xì)胞的浸潤模式分析，以尋找最主要的差異免疫細(xì)胞；然后，將2組樣本的免疫細(xì)胞組成進(jìn)行了比較，繪制各樣品免疫細(xì)胞占比熱圖(圖3)。分析的結(jié)果顯示，GDM樣品中單核細(xì)胞的浸潤豐度明顯低于非GDM樣品(P<0.05)，而GDM樣品中M2巨噬細(xì)胞的浸潤豐度較高(P<0.05)；免疫細(xì)胞比例箱圖(圖4A)中更直觀地展示了各樣品的22種免疫細(xì)胞的浸潤比例，并進(jìn)行對比分析(圖4B)。

注：圖中橫軸為樣品編號(紅點標(biāo)注的樣品為GDM胎盤組織)，縱軸為免疫細(xì)胞類型，網(wǎng)格中顏色越接近紅色代表該種細(xì)胞在該樣品中占比越高。圖3 各樣品的22種免疫細(xì)胞占比熱圖Fig.3 Heat map of the proportion of 22 kinds of immune cells in each sample

注：圖A中橫軸為樣品名稱(紅點標(biāo)注的樣品為GDM胎盤組織)，縱軸為所占比例，不同顏色的色塊代表不同細(xì)胞，色塊越長代表該種細(xì)胞在該樣品中占比越高;圖B中橫軸位子細(xì)胞類型，縱軸為占比，綠色為GDM樣品，紅色為無孕產(chǎn)期并發(fā)癥的孕婦胎盤組織樣品；(1)表示2組間比較P <0.05。圖4 22種免疫細(xì)胞的樣品間及組間對比結(jié)果Fig.4 Comparison among samples of 22 kinds of immune cells

2.5 GDM胎盤關(guān)鍵DEGs驗證

結(jié)果顯示，與Control組比較，GDM組孕婦分娩后胎盤組織中C3、CXCL10、HLA-B、HLA-C mRNA表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Western blot結(jié)果反映出蛋白質(zhì)表達(dá)水平，其結(jié)果與qRT-PCR趨勢基本一致(圖5)。

注： A、B、C、D分別為C3、CXCL10、HLA-B、HLA-C mRNA相對表達(dá)結(jié)果，E為顯影后的Western blot條帶， F為蛋白定量結(jié)果；(1)與Control組相比， P<0.05。圖5 4個DEGs在胎盤組織中mRNA 和蛋白表達(dá)水平驗證Fig.5 Expression levels of mRNA and protein of 4 key genes in placental tissues

3 討論

妊娠期女性是一個特殊的群體，妊娠和分娩不僅給女性身體帶來沉重的負(fù)擔(dān)，更使她們承受著巨大的心理壓力。近年來，隨著經(jīng)濟(jì)水平的提高、二胎政策的開放、健康知識的普及，政府和社會將更多的目光投向優(yōu)生優(yōu)育，希望達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療的目的。

目前，GDM的發(fā)病率還處于逐年上升的趨勢。有研究表明，GDM對母兒危害極大，GDM孕婦可能發(fā)生孕早期自然流產(chǎn)、并發(fā)妊娠期高血壓疾病、霉菌性陰道炎、合并感染、羊水過多等異常妊娠情況。

在本研究中，利用GEO數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)集信息，分析篩選出GDM胎盤組織中的DEGs，并進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析，根據(jù)自由度值及中介中心性值確定了其中關(guān)鍵的4個基因C3、HLA-B、HLA-C、CXCL10，通過對DEGs所富集的通路或生物進(jìn)程進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)免疫相關(guān)通路在GDM胎盤中可能起著關(guān)鍵作用。進(jìn)一步進(jìn)行了免疫細(xì)胞浸潤分析后發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞及M2巨噬細(xì)胞是GDM胎盤中的主要差異免疫細(xì)胞。

補體C3是進(jìn)化上高度保守的免疫介質(zhì)，在補體級聯(lián)反應(yīng)的中處于核心地位。有活性的補體C3是人類1型T輔助細(xì)胞(Th1)和細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)過程中不可或缺的一部分[8]，細(xì)胞內(nèi)C3的表達(dá)量與自身免疫反應(yīng)的激活程度呈明顯的正相關(guān)關(guān)系，細(xì)胞內(nèi)C3有望成為反映自身免疫嚴(yán)重程度的可靠生物標(biāo)志物[9]。在糖尿病領(lǐng)域，已有研究表明C3被激活后的活性成分C3a具有促進(jìn)胰島素分泌的功能[10]。此外，C3可以在致糖尿病條件下維持細(xì)胞的保護(hù)性自噬并防止胰島β細(xì)胞死亡[11]，高血糖情況下，C3的表達(dá)與體質(zhì)量指數(shù)(BMI)呈正相關(guān)[12]。一項前瞻性的研究發(fā)現(xiàn)血中C3濃度與糖耐量異常程度、血糖上升水平均呈顯著的正相關(guān)。但有趣的是，本研究發(fā)現(xiàn)，補體C3在GDM胎盤中呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài)，這意味著胎盤在高血糖的影響下有可能通過減少C3的合成從而影響血液中血糖含量，但具體的機制尚不清楚。

HLA-B、HLA-C均屬于人類白細(xì)胞抗原(HLA)，是人類的主要組織相容性復(fù)合體(MHC)基因的一部分[13]。雖然傳統(tǒng)上認(rèn)為胎盤充當(dāng)著母親和后代之間的較為穩(wěn)定的屏障，但有研究表明，胎盤通過侵入子宮的血管進(jìn)入母體血液循環(huán)后，可以通過多種途徑導(dǎo)致胎兒或胎盤成分在母體血液中廣泛傳播并沉積在母體組織[14]，在懷孕期間發(fā)生同種免疫[15]，而妊娠同種免疫的結(jié)果是形成抗HLA抗體，并較為穩(wěn)定地存在數(shù)十年[16]。有研究者發(fā)現(xiàn)HLA基因的改變似乎在2型糖尿病中也起著十分重要的作用，HLA Ⅱ類變異將增加GDM的易感性[17-18]。有證據(jù)表明，HLA參與調(diào)控IL-6、IL-8、CRP、補體家族的轉(zhuǎn)錄和釋放，本研究發(fā)現(xiàn)HLA與GDM相關(guān)聯(lián)，在GDM孕婦胎盤組織中呈現(xiàn)下降趨勢，這可能是鏈接母嬰間免疫反應(yīng)的重要一環(huán)。

CXCL10是一種促炎趨化因子，具有促進(jìn)炎癥物質(zhì)釋放和抗血管生成特性[19]。CXCL10是胰島損傷中的一種重要細(xì)胞因子[20]，能夠通過TLR4信號傳導(dǎo)損害糖尿病患者的β細(xì)胞功能和活力，同時誘發(fā)胰島炎，加速糖尿病的進(jìn)展[21]。由于CXCL10抗血管生成的特性，在妊娠子癇中已有廣泛的研究，但有趣的是，CXCL10含量與血清瘦素水平呈正相關(guān)[22]，本研究則發(fā)現(xiàn)，GDM胎盤組織中CXCL10的含量較正常組織低，這意味著CXCL10可能是GDM進(jìn)展中的一種保護(hù)因素。

在分析DEGs的同時，本研究發(fā)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)可能是GDM發(fā)展中的重要影響因素，免疫細(xì)胞浸潤或許起到了直接作用。根據(jù)既往的研究，妊娠實際上是一種免疫增強狀態(tài)，胎盤內(nèi)含有大量免疫細(xì)胞，而免疫細(xì)胞具有合成和釋放免疫介質(zhì)、抗原呈遞等一系列重要作用，是眾多免疫反應(yīng)的最終執(zhí)行者。巨噬細(xì)胞參與吞噬作用、先天性和適應(yīng)性免疫[23]，其又可分出M1群和M2群，M1巨噬細(xì)胞具有殺菌和促炎趨化作用，M2噬細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)作用，可誘導(dǎo)耐受和炎癥消退。有研究者提出，這2個群體可能是兩極分化的極端，巨噬細(xì)胞可能會根據(jù)環(huán)境主動轉(zhuǎn)換其表型[24]。蛻膜中的巨噬細(xì)胞還積極參與妊娠早期的滋養(yǎng)層侵襲、組織和血管重塑[25]，因此，巨噬細(xì)胞的功能異常將嚴(yán)重影響正常血運系統(tǒng)的構(gòu)建，與子癇前期、自發(fā)性流產(chǎn)和絨毛膜羊膜炎等妊娠疾病密切相關(guān)。本研究通過比較GDM胎盤組織與正常組織的免疫細(xì)胞浸潤模式，發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞在GDM樣品中的占比顯著降低，而M2巨噬細(xì)胞的占比則剛好相反，結(jié)合富集分析及PPI網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果，提示單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)有可能是GDM胎盤免疫調(diào)節(jié)的主要參與者。

本研究也存在著一些不足。由于GDM引起的糖耐量受損將引發(fā)全身的代謝改變，從胎盤組織中進(jìn)行分析的結(jié)果可能會與血清學(xué)檢查結(jié)果不能完全吻合。此外，本研究涉及的樣本為分娩胎盤組織，其結(jié)果不能反映妊娠過程中的動態(tài)變化。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)了GDM胎盤變化的四個關(guān)鍵基因(C3、HLA-B、HLA-C、CXCL10)且均與免疫反應(yīng)密切相關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)與GDM有密切的聯(lián)系，可能是導(dǎo)致GDM胎盤變化的主要執(zhí)行者，這些結(jié)果為研究GDM的發(fā)病機制及探索新的治療方案提供了新的觀點。