薛 銀，吳贇竑，袁 璐，柴 娟，朱 琳，吳雪軍，張紅麗，謝榮輝，陳 潔，張傳亮，趙靈燕

(浙江省動物疫病預防控制中心，浙江 杭州 311119)

在“人病獸防、關口前移”的大背景下[1]，動物疫病預防控制機構作用愈發(fā)凸顯。獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室作為動物疫病預防控制機構的重要組成部分，承擔著重大動物疫病(包括人獸共患病)的監(jiān)測、檢測、診斷、流行病學調查、風險評估和疫情信息的收集、匯總、分析、上報等技術性工作[2]，在動物疫病的預防和控制方面具有舉足輕重的作用。獸醫(yī)實驗室的建立是有效維護動物健康、保持畜牧業(yè)經濟收益的重要建設，同時對動物疫病進行實驗室監(jiān)測是遏制動物疫病傳播的有效方式[3]。實驗室檢測能力比對是農業(yè)農村部加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理的主要抓手，也是科學評價和提高實驗室管理水平和檢測能力的重要手段[4]。為加強浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力建設，提升動物疫情監(jiān)測預警水平，自2011年開始，浙江省每年組織市本級和縣(市、區(qū))兩級實驗室開展動物疫病預防控制系統(tǒng)獸醫(yī)實驗室檢測能力比對，作為檢驗實驗室檢測能力的重要依據(jù)之一[5，6]，了解和掌握各實驗室檢測水平，并分析原因，查找不足，逐步改進，進一步提升檢測能力水平。本文分析了2018—2021年浙江省的市、縣獸醫(yī)實驗室檢測能力比對結果，希望通過此項工作進一步加強浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力建設，提升動物疫情監(jiān)測預警水平。

1 材料與方法

1.1 比對項目 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對共設置檢測項目20個(表1)，其中非洲豬瘟病毒核酸檢測、布魯氏菌病抗體檢測分別涉及3次、A型口蹄疫抗體檢測涉及2次。各設區(qū)市的市本級獸醫(yī)實驗室參加全部項目，各縣(市、區(qū))實驗室每3年至少參加1次能力比對，具有非洲豬瘟檢測授權的實驗室至少參加非洲豬瘟病毒核酸檢測項目，每次選擇2～3個比對項目。

表1 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目

1.2 比對方法、標準和試劑 2018—2021年不同比對項目選取的方法、依據(jù)標準和所用試劑見表2。

表2 2018—2021年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目方法、標準和試劑

1.3 比對樣品 由國家參考實驗室提供或相應試劑公司生產，由浙江省動物疫病預防控制中心實驗室驗證、編號和分裝，每個檢測項目設5～6份盲樣，各參考值樣品數(shù)目不定。

1.4 比對樣品和檢測試劑盒遞送 為保證檢測的有效性，比對樣品存放于-20 ℃低溫冰箱，試劑盒按照要求存放。2018—2020年，比對樣品均由各實驗室專業(yè)人員到省疫控中心實驗室領取。2021年由于新冠肺炎疫情影響，比對樣品由省疫控中心于24 h內寄到各參加比對實驗室。

1.5 評判標準

1.5.1 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體檢測、高致病性禽流感H7亞型抗體檢測、O型口蹄疫抗體檢測、H5亞型禽流感Re-11株抗體檢測評判標準 全部比對樣品效價檢測值在參考值±1(包括參考值±1)范圍內，判為結果正確；有1個及以上樣品效價檢測值偏離參考值±2及以上，判為結果存在較大偏差。

1.5.2 A型口蹄疫抗體檢測、布魯氏菌病抗體檢測(試管凝集試驗方法)、新城疫抗體檢測評判標準 全部比對樣品效價檢測值在參考值±1(包括參考值±1)范圍內，判為結果正確；有1個及以上樣品效價檢測值偏離參考值±1以上，判為結果存在較大偏差。

1.5.3 高致病性H7亞型禽流感病毒核酸鑒別檢測、豬瘟病毒核酸檢測、口蹄疫病毒和塞內卡病毒核酸鑒別檢測、非洲豬瘟病毒核酸檢測、小反芻獸疫病毒核酸檢測、H5亞型禽流感病毒核酸檢測、豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸通用型檢測、口蹄疫病毒核酸檢測、布魯氏菌病抗體檢測(c-ELISA方法)評判標準 全部比對樣品檢測值與參考值完全一致，判為結果正確；與參考值不一致，判為結果存在較大偏差。

2 比對結果

2.1 總體情況 2018年，共有52個市、縣級獸醫(yī)實驗室(10個市級、42個縣級)參加比對。2019年，共有50個市、縣級獸醫(yī)實驗室(11個市級、39個縣級)參加比對。2020年，共有67個市、縣級獸醫(yī)實驗室(11個市級、56個縣級)參加比對。2021年，共有77個市、縣級獸醫(yī)實驗室(11個市級、66個縣級)參加比對，參加比對的實驗室數(shù)量整體呈上升趨勢。2018—2021年參加比對實驗室共檢測盲樣4 775份，檢測結果正確樣品4 649份，樣品平均檢測正確率為97.34%，2018—2020年樣品正確率逐步提升，2020年達到97.83%，2021年樣品正確率略有下降，為97.19%，見表3。

表3 2018—2021年各年度檢測能力比對結果統(tǒng)計

2.2 不同檢測項目比對結果 2018—2021年共開展了15個檢測項目的比對，不同檢測項目實驗室正確率介于78.57%～100%，見表4。

表4 2018—2021年獸醫(yī)實驗室不同檢測項目比對結果統(tǒng)計

續(xù)表

2.3 不同檢測方法比對結果 根據(jù)檢測的樣品不同，檢測類型分為血清學檢測和病原學監(jiān)測。血清學檢測包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、血凝抑制試驗(HI)、試管凝集試驗(SAT)。病原學檢測方法主要包括反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法和熒光RT-PCR。以上檢測方法基本涵蓋了市縣實驗室檢測的常用方法，不同檢測方法的檢測結果正確率平均值介于87.86%～93.36%，見表5。

表5 2018—2021年各年度不同檢測方法比對結果統(tǒng)計

3 討論

2018—2021年，參加比對實驗室數(shù)量不斷增加，由于檢測項目不同，實驗室正確率在73.08%～82.00%波動。與2015年實驗室正確率55%[7]、2016年實驗室正確率82.81%[8]、2017年實驗室正確率56.36%[6]相比，總體的實驗室正確率在不斷提升，說明各級系統(tǒng)內獸醫(yī)實驗室檢測能力和水平在不斷提升。

從檢測項目來看，浙江省每年設置的檢測能力比對項目緊緊圍繞農業(yè)農村部關于重大動物疫病防控要求和浙江省實際情況，重點突出禽流感、非洲豬瘟、口蹄疫等重大動物疫病，同時又結合市、縣級實驗室的常規(guī)工作，既突出重點又貼近實際。禽流感、口蹄疫、新城疫等抗體檢測項目是各級實驗室常規(guī)的檢測項目，各參與比對實驗室正確率保持在較高水平。2019—2021年連續(xù)3年，浙江省獲得非洲豬瘟檢測能力授權的所有市縣獸醫(yī)實驗室均參加了非洲豬瘟病毒核酸檢測比對，2019年全部正確，2020年和2021年各有3個實驗室比對結果出現(xiàn)偏差，經分析可能與操作不當、陽性對照樣品污染其他樣品有關。隨著非洲豬瘟檢測量加大，實驗室污染風險也隨之增加，需進一步加強實驗室生物安全防范。2018年和2020年都進行了A型口蹄疫抗體的檢測，實驗室正確率分別為96.15%和89.66%。

從檢測方法來看，各檢測項目選取的檢測方法與國家疫控中心對各省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對所用方法一致[4,9]。PCR類的檢測樣品結果正確率平均值達92.38%，其中熒光PCR的檢測正確率最高，2020年H5亞型禽流感病毒核酸檢測項目實驗室正確率達到100%。這可能與熒光PCR檢測為定性檢測，儀器直接讀取數(shù)據(jù)，人為干擾因素較少有關[10]。2020年新城疫抗體檢測項目實驗室正確率為86.67%，2021年H5亞型禽流感Re-11株抗體檢測項目實驗室正確率僅為78.57%，這與HI試驗所用紅細胞、血凝抗原需要實驗室自行制備，結果需要操作人員人為判定，存在主觀差異有關[11]。2018年和2020年布魯氏菌病抗體檢測項目實驗室正確率分別為97.83%和88.89%，這與SAT需要操作人員主觀判定結果，受操作熟練程度影響較大有關[12]。HI和SAT作為實驗室常用檢測技術，大部分實驗室操作比較熟練，結果符合率穩(wěn)定性較好，但仍有部分實驗室出現(xiàn)問題，這是由于定量檢測需要實驗室人員的綜合判定能力和經驗，而機構改革后，實驗室人員流動性較大、部分新進實驗室人員工作經驗不足，影響結果判定。2020年A型口蹄疫抗體檢測有6個實驗室的部分樣品檢測值與參考值存在較大偏差，這可能是由于ELISA檢測方法又分為競爭ELISA、液相阻斷ELISA等眾多種類，部分實驗室對不同檢測方法檢測熟練度欠缺、檢測規(guī)范性和準確性不夠，導致ELISA檢測結果穩(wěn)定性不高[13]。

通過近4年的檢測能力比對工作，部分實驗室還存在一些問題，主要表現(xiàn)在：一是部分實驗室血清學檢測規(guī)范性和準確性有待提高；二是部分實驗室的分子生物學檢測技術需要加強；三是原始記錄和報告填寫有待改進，參加比對的部分實驗室存在檢測結果報告表填報不規(guī)范，原始記錄填寫不完整、不準確、沒有可追溯性，檢測報告中檢測標準引用錯誤、缺少關鍵信息等問題，需進一步改進提升。

下一步工作建議：一是加強人員力量培訓，針對比對工作出現(xiàn)偏差的實驗室，選派人員參加省級技術和理論知識輪訓，切實提升實驗室檢測能力水平；二是開展實驗室檢測能力飛行檢查，在比對工作開展期間，省級選派相關技術人員抽檢市、縣實驗室進行指導監(jiān)督，幫助提升實驗室檢測能力；三是進一步加強獸醫(yī)實驗室管理，實驗室檢測能力提升需要強大的軟件和硬件支撐，建議進一步加強獸醫(yī)實驗室質量管理體系和生物安全體系建設，以適應新要求、新任務。

獸醫(yī)實驗室是動物疫病監(jiān)測工作的核心能力之一，統(tǒng)計近4年的比對結果，浙江省基層獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室整體檢測水平不斷提升，說明浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室整體檢測能力水平穩(wěn)步提升，對浙江省動物疫病防控以及食品安全和公共衛(wèi)生安全起到了重要技術支撐作用。同時要進一步查缺補漏，進一步提升檢測能力和水平。