纖維蛋白的兩種特殊染色效果比較

謝文林，唐翠蘭，連家燕

（1 中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院病理診斷中心，深圳 518107；2 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080）

纖維蛋白（fibrin）具有嗜酸性，常見于纖維蛋白性炎癥為主的疾?。ù笕~性肺炎、白喉、纖維蛋白性心包炎及結(jié)核性胸膜炎等）；在彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）時(shí)，HE 染色不易觀察的微小血栓主要成分是纖維蛋白；惡性高血壓和胃潰瘍底的動(dòng)脈壁纖維蛋白樣變，急性風(fēng)濕病、腎小球沉積物性質(zhì)的判定等都可以觀察到纖維蛋白呈陽性反應(yīng)[1]。由此可見，纖維蛋白染色在臨床病理診斷中具有非常重要的意義。本文對(duì)15 例富含纖維蛋白的石蠟包埋組織同時(shí)進(jìn)行改良Masson 染色與Mallory 磷鎢酸蘇木精染色（PTAH 染色），探討更有利于臨床病變組織中纖維蛋白觀察的染色方法。

材料與方法

1 材料

選取中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院及中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院2018‐2022 年病理送檢組織中富含纖維蛋白病例共15 例，所選標(biāo)本均經(jīng)4%中性緩沖甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟和石蠟包埋，連續(xù)切片4 張，切片厚度3～5 μm。

2 染色方法

2.1 改良Masson 染色

常規(guī)切片，脫蠟至水后，置于Bouin 液后放入微波爐中高火加熱15 min，流水沖洗5～10 min，Weigert鐵蘇木素染液染色10 min，蒸餾水洗，1%鹽酸酒精鏡下分化，返藍(lán)液返藍(lán)30 s，流水沖洗2 min，麗春紅酸性品紅液染色10 min，蒸餾水稍洗，磷鉬酸液染5 min，鏡下觀察染色情況，倒去磷鉬酸，直接加苯胺藍(lán)液染5 min，1%冰醋酸分化組織1 min，95%酒精稍洗3 次，無水酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

2.2 PTAH 染色

常規(guī)切片，脫蠟至水后，滴入酸化高錳酸鉀液氧化5 min，流水沖洗1 min，2%草酸漂白1 min，流水沖洗1 min，磷鎢酸蘇木素液浸染20～24 h，95%乙醇迅速洗去多余染液，無水酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

結(jié) 果

HE 染色，纖維蛋白呈紅染的細(xì)絲、相互連接成網(wǎng)狀，也可相互融合形成粗大的纖維蛋白網(wǎng)（圖1A）；改良Masson 染色，纖維蛋白、紅細(xì)胞呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色，細(xì)胞核呈藍(lán)褐色（圖1B）；PTAH 染色，纖維蛋白、細(xì)胞核和紅細(xì)胞呈深藍(lán)色，膠原纖維呈棕紅色（圖1C）。

圖1 顯示病理組織纖維蛋白的兩種特殊染色效果比較。A，HE 染色；B，改良Masson 染色；C，PTAH 染色；比例尺，50 μmFig.1 Comparison of the effects of two special staining methods for demonstrating pathological tissue fibrin.A, HE staining; B, modified Masson stain‐ing; C, PTAH staining; scale bar, 50 μm

討 論

顯示纖維蛋白的PTAH 染色法，其染色機(jī)制是較為奇特的，單一染液能染出兩種主要的顏色即藍(lán)色和棕紅色。但這種方法存在著試劑配制及染色時(shí)間較長的缺點(diǎn)，磷鎢酸蘇木精液常常要孵育24 ～48 h，時(shí)間過長，一些加急的病例組織處理起來會(huì)比較麻煩，給臨床病理診斷帶來極大不便。PTAH 染色試劑配制也比較繁瑣，在日常工作中，當(dāng)磷鎢酸蘇木精配制完成后常需數(shù)月的氧化成熟才能使用，加入氧化劑如高錳酸鉀或H2O2雖然可以代替自然氧化加快試劑的成熟，但是這會(huì)導(dǎo)致磷鎢酸蘇木精液不穩(wěn)定，染色力容易失效，且PTAH 染色為進(jìn)行性染色，染色時(shí)間過長容易出現(xiàn)過染現(xiàn)象，此方法需要在染色過程中把片子取出并在顯微鏡下觀察著色程度，給染色工作帶來了極大的不便。從染色效果上看，PTAH 染色沒有Masson 三色染色那般鮮艷，背景對(duì)比較不清晰。當(dāng)一種染色方法無法滿足臨床高效率運(yùn)作的時(shí)候，我們就要尋找一種顯示纖維蛋白效率更高，效果更好，染色更為方便的染色方法。

Masson 染色是結(jié)締組織最常用的特殊染色方法，主要用于區(qū)分膠原纖維和肌原纖維，在某些疾病中，也可以用于認(rèn)識(shí)和區(qū)分病理性沉著物如纖維蛋白。Masson 染色較PTAH 染色方法試劑配制及染色時(shí)間縮短，染色效果更鮮艷，背景對(duì)比更清晰，Masson 染色使纖維蛋白、紅細(xì)胞呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色，紅藍(lán)對(duì)比鮮明，定位清晰，閱片的時(shí)候更讓人賞心悅目。傳統(tǒng)Masson 染色染色前玻片常常需要置入Bouin液室溫作用一晚或置入37 ℃水浴箱中媒染2 h，為了提高纖維蛋白的染色效率，簡化染色步驟，優(yōu)化顯色效果，我們對(duì)傳統(tǒng)Masson 染色進(jìn)行了改良，染色過程中添加了微波加熱的步驟，經(jīng)過數(shù)次的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，把Bouin 液放入微波爐中高火加熱15 min，這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)具體參數(shù)的確定，不僅縮短了反應(yīng)時(shí)間，還取得了更為鮮艷的染色效果。微波是一種高頻率的電磁波，其波長短，穿透力強(qiáng)，輻射時(shí)產(chǎn)生的熱效應(yīng)能使染料的極性分子發(fā)生震蕩而加速運(yùn)動(dòng)，在染色的過程中，微波可加速組織與染料的結(jié)合，因而具有染色時(shí)間短、著色性高的特點(diǎn)[2]。

經(jīng)過比較和實(shí)踐，我們認(rèn)為改良Masson 染色顯示纖維蛋白效果明顯優(yōu)于PTAH 染色，且染色時(shí)間較短，操作簡便，易掌握，結(jié)果可靠，值得在臨床病理中廣泛推廣使用。