芍藥苷在不同時期芍藥根中積累的測定

黃學文 賈 楠 李 杰 王明瑩

（呼倫貝爾學院生命科學學院，內蒙古海拉爾 021008）

芍藥（Paeonia lactifloraPall.）屬芍藥科芍藥屬多年生草本植物［1］，是觀賞花卉兼中藥材。芍藥的品種繁多，但作為中藥材的赤芍本源是野生芍藥［2］，其根入藥（藥材名：赤芍），能清熱涼血、活血散瘀，主要分布于我國東北、河北、山西、寧夏南部、陜西西南部、甘肅東南部，日本、朝鮮、蒙古國東部和北部、俄羅斯（西伯利亞地區(qū)、遠東地區(qū)）［3］。芍藥的主要藥用成分是單萜類化合物—芍藥苷［4］，經前人研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷對動物的神經性疾?。?］、腦損傷疾?。?］有顯著作用，還具有一定的免疫調節(jié)功能［7］。芍藥作為中藥材原料，市場需求量大；由于環(huán)境和人為等因素，野生芍藥越來越少。芍藥在我國栽培歷史悠久，目前黑龍江省和內蒙古東部作為經濟作物普遍栽植。呼倫貝爾市林緣和草甸草原是野生芍藥的主要分布生境。筆者通過對芍藥栽培試驗，為當?shù)氐赖厮幉姆乱吧N植示范和產業(yè)化，以及野生芍藥遷地保護提供實踐指導和數(shù)據(jù)支撐。

1 自然地理概況

試驗地位于鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃。鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)屬中溫帶半干旱大陸性草原氣候，年平均氣溫為-1～2 ℃，1月（最冷月）平均低溫為-30.83 ℃，7月（最熱月）平均高溫為25.84 ℃。年平均降水量為350～370 mm，1月平均降水量為3.79 mm，7月平均降水量為99.38 mm。年日照時數(shù)平均為2 800 h。無霜期平均100 d，5—9月月均低溫大于0 ℃。土壤類型是栗鈣土。

2 材料與方法

2.1 樣品采集樣品采集地位于鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃。樣品采集時間：2016年6月至2017年5月。

2.2 材料準備確定芍藥植株最佳采收器官：取3年果實成熟期芍藥植株的根、莖、葉，去除泥沙，陰干，粉碎過60目篩，密封保存?zhèn)溆?。確定芍藥植株最佳采收年份：取采集地1、2、3、4年果實成熟期芍藥植株的根，去除泥沙，陰干，粉碎過60目篩，密封保存?zhèn)溆谩４_定芍藥植株最佳采收時期：取3年萌發(fā)期、展葉期、開花期、果實成熟期、枯萎后期芍藥植株的根，去除泥沙，陰干，粉碎過60目篩，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 測定方法檢測芍藥苷常用方法有高效液相色譜法、薄層掃描法、毛細管電泳法［8］。根據(jù)《中國藥典（2015版）》［9］采用高效液相色譜法測定芍藥苷，

2.3.1 對照品溶液的制備 取在P2O5減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷標準品，精密稱取，加甲醇制成1 mL含0.5 mg的溶液［10］。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取芍藥材料（過60目篩）0.5 g，置于塞蓋的錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，浸泡4 h，超聲處理20 min，冷卻，再稱定重量，不足用甲醇補足，搖勻，過濾，取濾液，即得供試品溶液［11］。

2.3.3 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀流動相（40∶60）柱溫：40 ℃；波長：230 nm；流速：1 mL/min；時間：15 min；進樣量：10 μL［12］。在此條件下芍藥苷保留時間為10 min左右，繪出標準品與供試品的高效液相色譜圖，如圖1、2。

圖1 芍藥苷標準品高效液相色譜

圖2 芍藥苷供試品高效液相色譜

2.3.4 系統(tǒng)適用性檢驗

（1）色譜柱理論板數(shù)：用來評價色譜柱的分離效能。根據(jù)《中國藥典》［13］，芍藥苷標準品的理論板數(shù)是3 000。

（2）精密度：用相對標準偏差（RSD）表示。取各品種下的對照品各10 μL，進樣5次，標準值2.0%。

（3）重復性：取果實成熟期的樣品重復5次，測得平均含量。重復性指標為3.34%。

（4）標準曲線繪制精密稱取芍藥苷標準品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL用甲醇定容到1 mL，分別得到0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL，進樣量為10 μL。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線如圖3。

圖3 芍藥苷標準品溶液標準曲線

3 結果及分析

3.1 系統(tǒng)適用性檢驗結果芍藥苷供試品的色譜柱理論板數(shù)是6 400，數(shù)值遠遠大于《中國藥典》標準3 000。說明芍藥苷峰與其他峰能夠很好地分離；精密度（RSD）為1.7%，小于標準2.0%，說明精密度良好；重復性所測峰面積RSD為2.2%，小于3.34%，說明重復性良好。標準曲線y=4 150.7x+59 962，R2=0.986 3，試驗結果呈現(xiàn)良好的線性關系。

3.2 不同營養(yǎng)器官芍藥苷含量的變化情況取同一年份、同一時期、不同器官的芍藥，測定結果見表1，可以發(fā)現(xiàn)不同器官芍藥苷的含量：根（2.65）>葉（1.23）>莖（0.74）。同時P值小于0.05，不同器官芍藥苷的含量存在差異，具體見表1。

表1 不同器官芍藥苷的含量 單位：%

3.3 不同年份芍藥苷含量的變化情況取同一時期、不同年份的根進行芍藥苷測定，經研究發(fā)現(xiàn)在不同年份中4年植株的芍藥苷含量最大，為3.07%；同時F檢測值大于1且大于其臨界值，P值小于0.05，說明不同年份中所含芍藥苷的比重存在差異，具體見表2。

表2 不同年份芍藥根中芍藥苷的含量 單位：%

3.4 不同時期芍藥苷含量的變化情況取同一年份、不同時期的根測定芍藥苷的含量，確定最佳的采收期。如圖4所示，各個時期芍藥苷含量均呈現(xiàn)高—低—高的趨勢，其中枯萎后期的芍藥苷含量最多，為3.34%。萌發(fā)期地上部分還沒有生長，有效成分在根中積累，因此萌發(fā)期所含芍藥苷較高；到展葉期時，莖、葉開始生長，根中有效成分轉化為其他代謝產物，為莖葉提供能量；到枯萎后期地上部分枯萎，有效成分蓄藏于根中，此時根中的芍藥苷含量最高。經單因素方差分析，同時F檢測值大于1且大于其臨界值，P值小于0.05，說明不同時期根中所含芍藥苷的比重存在差異。

圖4 不同時期芍藥根中芍藥苷含量變化

從不同時期的折干率方面分析可得，4月下旬是芍藥的萌發(fā)期，5月上旬是展葉期，6月份是花期。7月份是果期，8月份到9月底是營養(yǎng)生長期，10月份以后是枯萎后期。7、8月份為海拉爾區(qū)雨季，降水較多，因此折干率略有降低，到枯萎后期，氣候干燥折干率明顯上升，具體見圖5。

圖5 芍藥根不同時期折干率的變化情況

綜上所述，芍藥的最佳采收器官是根，最佳采收年份是4年，最佳采收時期是枯萎后期。且各時期平均含量為2.47%，大于2015《中國藥典》中赤芍作為藥材芍藥苷的含量1.8%，因此鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃中的芍藥符合標準，質量良好。

4 結論與討論

4.1 結論該研究采用高效液相色譜法對芍藥苷進行測定，經系統(tǒng)性檢驗，該方法分離度強，靈敏度及重復度均良好。標準曲線y=4 150.7x+59 962，R2=0.986 3，試驗結果呈現(xiàn)良好的線性關系。該研究就鄂溫克旗巴彥托海鎮(zhèn)苗圃中芍藥進行測定，通過對不同器官、不同年份及不同時期芍藥苷的測定，研究表明芍藥植株根中芍藥苷含量最高，為2.65%；4年植株芍藥苷含量最高，為3.07%；枯萎后期芍藥苷含量最高，為3.34%。研究發(fā)現(xiàn)4年植株枯萎后期根中芍藥苷的含量最高，說明此時地上莖葉已經枯萎，枯萎過程中芍藥苷等有效成分由莖葉轉移到根，主要積累在根中。且枯萎后期折干率為最高，水分含量最低，所以在海拉爾地區(qū)栽培芍藥時，9月下旬到10月上旬是采收的最佳時期。

4.2 討論研究也發(fā)現(xiàn)該地區(qū)各時期芍藥苷平均含量（2.47%）高于《中國藥典》的標準（1.8%），僅從此方面看，該地區(qū)芍藥品質良好，適合作為中藥材進行大面積種植，投入藥材市場。若要對該芍藥進行綜合評價，需對其營養(yǎng)價值及藥用價值進行綜合考量。由于條件有限，僅有4個年份的芍藥，芍藥苷的積累是否與年份的增加一直成正比，有待進一步考察。