楊 玲

貴州省銅仁市萬山區(qū)丹都街道辦事處，貴州銅仁 554300

豬圓環(huán)病毒病(PCVD)是生產(chǎn)中常見的豬群感染不同種類豬圓環(huán)病毒(PCV)而引發(fā)的一類病毒性傳染疾病的統(tǒng)稱。PCV 是單股負鏈DNA 病毒，屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，該病毒無囊膜，目前有PCV-1、PCV-2、PCV-3 3 個基因型。其中PCV-1 發(fā)現(xiàn)于1974 年，對豬群沒有致病性[1]；PCV-2 發(fā)現(xiàn)于1998 年，不同品種、不同性別以及不同年齡的豬都具有致病性，尤其是仔豬和母豬感染后，其危害性更大，豬感染PCV-2 后可以引起免疫抑制及各器官損害，PCV-2 呈世界性分布，嚴重阻礙著全球生豬養(yǎng)殖行業(yè)高效發(fā)展[2]；PCV-3 于2016 年被首次報道，研究表明PCV-3、PCV-2 在致病性和臨床表現(xiàn)方面具有較大的相類性，但PCV-3 與PCV-2 之間無交叉反應，故PCV-2 疫苗無法對PCV-3 提供有效保護，且PCV-3 的流行使PCV-2 的防控更加困難[3]。據(jù)報道，PCV-2 和PCV-3 是當前我國養(yǎng)豬業(yè)中對免疫系統(tǒng)有抑制作用的2 種主要疫病。2022 年3月，貴州省某養(yǎng)豬場仔豬發(fā)生一起斷奶仔豬多器官衰竭綜合征死亡病例，在診斷時，將臨床表現(xiàn)與PCR 診斷技術相結合,最終確定該豬場病例同時感染了PCV-2 和PCV-3 病毒。

1 發(fā)病情況

2022 年3 月初，貴州省某養(yǎng)豬場10 周齡仔豬發(fā)病，發(fā)病仔豬消化功能降低、持續(xù)性腹瀉、進行性消瘦、生長不良甚至停滯、死亡率較低，發(fā)病后曾用抗生素治療無效。經(jīng)詢問，該豬場接種了CSFV、PRV、PRRSV、PEDV 等疫苗，但未進行PCV-2、PCV-3 疫苗的免疫接種。

2 臨床癥狀

臨床上病豬表現(xiàn)為精神頹廢、食欲衰退、皮膚發(fā)紺、被毛無光澤、反復腹瀉、發(fā)燒、氣喘、最后因機體脫水、消瘦、衰竭而死亡。

3 剖檢特征

解剖病死仔豬胃黏膜可見潰瘍，腎組織水腫，腸黏膜有充血和出血現(xiàn)象，脾腫大，全身多處淋巴結腫大。

4 實驗室診斷

4.1 樣品處理

將無菌采集的病死豬腸黏膜、淋巴結、脾臟等組織與滅菌后的生理鹽水按照1∶5 的體積比例混合后，用組織勻漿機進行研磨，并在-20 ℃條件下冷凍后再解凍，如此反復進行3 次，然后離心15 min（12 000 r/min），離心后吸取上清，并將其保存在-20 ℃冰箱中備用。

4.2 分子生物學試劑與試劑盒

病毒基因組RNA/DNA 提取試劑盒購于美國AXGEY 公司；DL 2000 Marker、2×Taq PCR Master Mix、一步法RT-PCR 試劑盒購于寶生物工程(大連)有限公司。

4.3 引物設計與合成

設計PEDV、CSFV、PRV、PRRSV、PCV2、PCV3的特異性檢測引物[4-6]，引物信息詳見表1，引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

表1 引物信息表

4.4 核酸提取

取-20 ℃保存的冷凍上清液200 μL，用病毒基因組提取試劑盒提取病毒DNA/RNA，然后置于-80 ℃冰箱保存待用。

4.5 PCR/RT-PCR 擴增

以本文4.4 中提取核酸樣品為模板，進行PCR/RT-PCR 擴增[4-6]，擴增體系及反應程序見表2，擴增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。

5 綜合診斷結果

PCR/RT-PCR 結果如圖1 所示，擴增后PEDV、CSFV、PRV、PRRSV 4 種病毒均無任何特異性條帶，為陰性，而PCV-2 病毒在大小約為486 bp 處有特異性擴增條帶，PCV-3 在大小約為270 bp 處有特異性擴增條帶，故PCV-2 和PCV-3 的檢測結果均為陽性。這就從分子水平上證實臨床病料樣品中存在PCV-2 和PCV-3 的核酸，說明該豬場發(fā)生了PCV-2 和PCV-3 混合感染。

圖1 臨床病料樣品的PCR/RT-PCR 擴增結果

6 治 療

臨床上，豬圓環(huán)病毒一般不會出現(xiàn)單獨感染的現(xiàn)象，在感染該病的同時經(jīng)常伴隨著其他疾病的發(fā)生，如豬藍耳病。因此，在治療時應控制好其他病原，做好綜合治療。根據(jù)病情，每天給病豬注射頭孢噻呋鈉1～2 次,持續(xù)給藥3 d，注射量為3～5 mg/kg；對于10 日齡的患病仔豬還可選擇用黃芪多糖注射液稀釋過的豬白細胞干擾素來治療，每頭豬注射1 mL，對于體重為10～50 kg 的病豬可加大用量，注射量為4 mL/頭，超過50 kg 的病豬劑量為6 mL/頭，根據(jù)病情每天注射1～2 次，3 d 不間斷用藥。

7 討論

近年來，我國生豬養(yǎng)殖的規(guī)模不斷擴大，但疫病防控技術相對落后，各種豬病呈現(xiàn)出日趨復雜的流行態(tài)勢，多種疾病同時感染發(fā)病的現(xiàn)象頻繁發(fā)生，這不僅對豬群有巨大的危害性，還使得疫病的綜合防控難度進一步加大。

由于PCV 感染后會導致免疫抑制，使PCV 在臨床中更容易發(fā)生與其他致病原的混合感染或繼發(fā)感染，國內(nèi)經(jīng)常有PCV 與CSFV、PRRSV 或其他細菌性疾病發(fā)生混合感染的報道[7-10]。在致病性、臨床表現(xiàn)等方面，PCV-2 和PCV-3 具有明顯的相似性，故在臨床上必須要采用實驗室檢測的方法來進行鑒別診斷。PCR 檢測法不僅能夠準確檢測出致病原的核酸，還具有操作方便、簡單易行、成本較低等優(yōu)點，故該法在基層養(yǎng)殖場獸醫(yī)檢查中得到了廣泛應用，因此對貴州省某養(yǎng)豬場的病例采用PCR 技術進行分子水平上的鑒定,使得診斷結果更加可靠、更加準確。

在本試驗中，將臨床表現(xiàn)和PCR 檢測技術相結合的方法不僅能夠準確鑒別豬圓環(huán)病毒病，還能為養(yǎng)殖場抓住該病的最佳治療機會提供保障。同時，通過該病例的診斷也使基層獸醫(yī)工作者意識到實驗室診斷在疫病綜合防控中的重要性，對不能確診、臨床癥狀復雜、混合感染或繼發(fā)感染的病例要果斷采用實驗室診斷的方法進行確診，防止因診斷不清楚而錯失治療良機，從而帶來更大的損失。