譚真 孫建

【摘要】 目的：探討子宮頸癌病理分級與微血管密度（MVD）、Yes相關蛋白1（YAP1）的相關性。方法：選擇2019年3月-2022年6月臨沂市第三人民醫(yī)院收治的子宮頸癌患者53例為對象，常規(guī)采集病灶組織及癌旁組織（距離病灶≥3 cm）。根據(jù)子宮頸癌病理分級分為高分化組、中分化組和低分化組；采用免疫組織化學法測定不同組織中、不同病理分級下MVD、YAP1陽性率；采用Spearman相關系數(shù)法對子宮頸癌病理分級與MVD、YAP1陽性率進行分析。結果：子宮頸癌病灶組織中MVD、YAP1陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）；免疫組化染色結果顯示，子宮頸癌病灶組織YAP1表達于細胞質與細胞核；而MVD表達于細胞質，呈棕褐色、棕黃色，著色度較高；而癌旁組織中陽性染色細胞較少，MVD、YAP1著色程度較低；低分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組與中分化組（P<0.05）；中分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組（P<0.05）；Spearman相關系數(shù)法結果顯示，子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1表達均呈負相關（rs=-0.692、-0.452）。結論：MVD、YAP1在子宮頸癌病灶組織中呈陽性高表達，其高表達水平與病理分級存在一定相關性，能為臨床診療提供新方法。

【關鍵詞】 微血管密度 Yes相關蛋白1 子宮頸癌 相關性 免疫組織化學法

Study on the Correlation between Pathological Grading， Microvessel Density and Yes Associated Protein 1 in Cervical Cancer/TAN Zhen， SUN Jian. //Medical Innovation of China， 2023， 20（11）： -115

[Abstract] Objective： To investigate the correlation between pathological grading of cervical cancer and microvessel density （MVD）， Yes associated protein 1 （YAP1）. Method： A total of 53 patients with cervical cancer who were admitted to Linyi Third People's Hospital from March 2019 to June 2022 were selected as the subjects， and the focus tissues and adjacent tissues （≥3 cm from the focus） were routinely collected. According to the pathological grading of cervical cancer， it was divided into high differentiation group， medium differentiation group and low differentiation group. The the positive rate of MVD and YAP1 in different tissues and different pathological grades were measured by immunohistochemistry. Spearman correlation coefficient method was used to analyze the correlation between pathological grade of cervical cancer and the positive rate of MVD and YAP1. Result： The positive rate of MVD and YAP1 in cervical cancer lesions were higher than those in adjacent tissues （P<0.05）. Immunohistochemical staining showed that YAP1 was expressed in the cytoplasm and nucleus of cervical cancer lesions; MVD was expressed in the cytoplasm， which was brown and brown yellow， with a high degree of staining. There were few positive staining cells in the adjacent tissues， and the staining degree of MVD and YAP1 was low. The positive rate of MVD and YAP1 in low differentiation group were higher than those in high differentiation group and middle differentiation group （P<0.05）. The positive rate of MVD and YAP1 in middle differentiation group were higher than those in high differentiation group （P<0.05）. Spearman correlation coefficient method showed that the pathological grade of cervical cancer patients was negatively correlated with expression of MVD and YAP1 （rs=-0.692， -0.452）. Conclusion： MVD and YAP1 are highly expressed in cervical cancer lesions， and their high expression level is related to pathological grading， which could provide a new method for clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Microvessel density Yes associated protein 1 Cervical cancer Correlation Immunohistochemistry

First-author's address： Linyi Third People's Hospital， Shandong Province， Linyi 276023， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.11.027

子宮頸癌屬于臨床發(fā)病率較高的惡性腫瘤，其發(fā)病多與人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染有關，亦與多個性伴侶、過早開始性生活、免疫功能缺陷性疾病等有關[1]。流行病學調查結果表明：全球子宮頸癌發(fā)病率為每10萬人中13人患病，多數(shù)患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，隨著病程延長可引起接觸性出血、異常陰道流血等，成為我國女性死亡的重要原因[2]。微血管密度（MVD）能反映腫瘤組織中血管分布，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，其表達水平能評估患者預后，有望成為子宮頸癌治療新靶點[3-4]。Yes相關蛋白1（YAP1）屬于富脯氨酸磷蛋白的一種，在正常人體中表達水平較低或不表達，而在子宮頸癌患者中將會引起靶基因轉錄活性上升，能誘導腫瘤的形成[5]。但是，MVD與YAP1在子宮頸癌患者中的表達及與病理分級的關系研究較少[6]。因此，本研究以子宮頸癌患者為對象，探討子宮頸癌病理分級與微血管密度、Yes相關蛋白1的相關性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選擇2019年3月-2022年6月臨沂市第三人民醫(yī)院收治的子宮頸癌患者53例為對象。納入標準：（1）符合子宮頸癌診斷標準[7]，經病理組織檢查確診；（2）均完成子宮頸癌病灶組織及癌旁組織采集，并完成相關蛋白測定；（3）病情穩(wěn)定，能進行溝通與交流。排除標準：（1）檢查前行放化療、生物免疫治療；（2）其他部位惡性腫瘤或復發(fā)病例或妊娠期與哺乳期。根據(jù)子宮頸癌病理分級分為高分化組21例、中分化組18例和低分化組14例。本研究經院醫(yī)學倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 儀器與設備 鼠抗人YAP1單克隆抗體，購自美國Abcam公司；MVD單克隆抗體，購自北京中杉生物技術有限公司；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒，購自北京中杉生物技術有限公司；倒置顯微鏡，購自德國蔡司公司。

1.2.2 檢測方法 采用免疫組織化學法測定不同組織中、不同病理分級下MVD、YAP1陽性率；取子宮頸癌病灶組織與癌旁組織（距離病灶≥3 cm），常規(guī)制備石蠟組織切片，控制切片厚度為4 μm，經石蠟脫水后水化，梯度酒精脫水，熱抗原修復，并采用濃度為3%過氧化氫連續(xù)完成10 min孵育，加入1︰100濃度MVD、YAP1多克隆抗體一抗，4 ℃下恒溫過夜，滴加過氧化物酶標記的MVD、YAP1二抗（控制稀釋比例1︰2 000），連續(xù)完成60 min孵育后向反應液中加入DBA染色液顯色，1 min蘇木素復染后，完成30 s梯度乙醇分化，1 min氨水返藍，并在顯微鏡染色下觀察并設定反應時間。蘇木精2 min染色，梯度酒精脫水，中性樹膠封片，并在倒置顯微鏡下觀察不同標本中MVD、YAP1表達情況[8-9]。

1.3 觀察指標及評價標準 （1）MVD、YAP1表達情況及陽性率。每張切片隨機選擇5個高倍視野，并以MVD、YAP1中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。（2）子宮頸癌病理分級與微血管密度、Yes相關蛋白1陽性率相關性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 24.0軟件處理，計數(shù)資料行字2檢驗，采用率（%）表示，計量資料行F檢驗，采用（x±s）表示，子宮頸癌不同病理分級患者MVD、YAP1性質的相關性采用Spearman相關系數(shù)法分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組一般資料比較 高分化組21例，年齡28～73歲，平均（56.51±3.59）歲；體重指數(shù)（BMI）18～29 kg/m2，平均（22.14±2.42）kg/m2；腫瘤分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期5例，Ⅲ期6例；病理類型：鱗癌17例，腺癌4例。中分化組18例，年齡29～72歲，平均（57.89±3.62）歲；BMI 19～30 kg/m2，平均

（22.64±2.48）kg/m2；腫瘤分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期5例；病理類型：鱗癌11例，腺癌7例。低分化組14例，年齡27～74歲，平均（56.89±3.62）歲；BMI 17～32 kg/m2，平均（22.37±2.43）kg/m2；腫瘤分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期3例，Ⅲ期5例；病理類型：鱗癌11例，腺癌3例。三組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 子宮頸癌不同組織中MVD、YAP1陽性率比

較 子宮頸癌病灶組織中MVD、YAP1陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）；免疫組化染色結果顯示：子宮頸癌病灶組織YAP1表達于細胞質與細胞核；而MVD表達于細胞質，呈棕褐色、棕黃色，著色度較高；而癌旁組織中陽性染色細胞較少，MVD、YAP1著色程度較低，見表1和圖1。

2.3 子宮頸癌不同病理分級下MVD、YAP1陽性率比較 低分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組與中分化組（P<0.05）；中分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組（P<0.05）。見表2。

2.4 子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1表達情況相關性分析 Spearman相關系數(shù)法結果顯示，子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1表達呈負相關（P<0.05），見表3。

3 討論

腫瘤侵襲轉移是多階段、多步驟的復雜過程，包括：腫瘤細胞與其周圍間質細胞黏附性改變，腫瘤微血管生成及癌細胞通過酶的降解[10-11]，對組織學屏障造成破壞，尤其是腫瘤微血管生成，能決定腫瘤轉移到靶器官或組織后是否繼續(xù)存活的關鍵因素[12-13]。Zhu等[14]研究表明：微血管新生能促進子宮頸癌的侵襲與轉移，具有明顯的促進作用，且與患者預后存在緊密的聯(lián)系。本研究中，子宮頸癌病灶組織中MVD、YAP1陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）；免疫組化染色結果表明：子宮頸癌病灶組織YAP1表達于細胞質與細胞核；而MVD表達于細胞質，呈棕褐色、棕黃色，著色度較高；而癌旁組織中陽性染色細胞較少，MVD、YAP1著色程度較低，從本研究結果看出，MVD、YAP1在子宮頸癌病灶組織中呈高表達，且免疫組織染色下較為明顯，有望成為子宮頸癌治療新靶點。血管生成是指某些情況下，由于血管生長因子的作用，刺激原已存在于毛細血管和毛細血管后靜脈等微小血管內皮細胞，并重新進入細胞增殖周期，降解內皮細胞的基底膜，并通過芽生長方式向周圍組織中形成毛細血管[15-16]。同時，腫瘤的生長、增大及腫瘤細胞數(shù)的增多，與腫瘤局部血管新生有關[17]。因此，子宮頸腫瘤微血管密度的測定，能反映腫瘤生物學行為特征，與臨床病理預后存在緊密的聯(lián)系[18]。

YAP1是近年來發(fā)現(xiàn)Hippo信號通路下游關鍵轉錄共激活蛋白，在子宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，能促進組織的再生、維持干細胞自我更新、修復等生物學功能[19]。賴炳佳等[20]結果表明：YAP1能直接參與腫瘤細胞的增殖、凋亡的調節(jié)與腫瘤的形成過程，在多種惡性腫瘤中呈高表達。本研究中，低分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組與中分化組（P<0.05）；中分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組（P<0.05），從本研究結果看出，MVD、YAP1在子宮頸癌不同分級中陽性率存在明顯的差異性。分析原因：YAP1可能是一類致癌基因，能直接參與子宮頸癌的發(fā)生與進展過程。同時，YAP1為Hippo通路中心信號分子，YAP1過表達時，該通路下游靶信號被激活，YAP1發(fā)生去磷酸化反應、活性增加，細胞核內轉移和聚集，與轉錄因子結合并促進結締組織的生長，從而誘導子宮頸癌相關基因表達異常。本研究中，相關性分析結果表明：子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1陽性率具有一定相關性（P<0.05），從本研究結果看出，子宮頸癌病理分級與MVD、YAP1存在緊密的聯(lián)系，加強患者MVD、YAP1測定，能指導臨床診療。

綜上所述，MVD、YAP1在子宮頸癌病灶組織中呈陽性高表達，且與病理分級存在一定相關性，能為臨床診療提供新方法。

參考文獻

[1]冉儀婷，卑貴光.體素內不相干運動成像及微血管密度與宮頸癌病理分級的相關性研究[J].磁共振成像，2021，12（7）：72-76.

[2]黃珊珊，陳昕.宮頸癌組織中AEG-1和TLR3表達與其微血管密度及預后的相關性[J].中國臨床研究，2020，33（10）：1391-1395.

[3] KTW A，HYL A，KYS A，et al.HPV-induced Nurr1 promotes cancer aggressiveness，self-renewal，and radioresistance via ERK and AKT signaling in cervical cancer[J].Cancer Letters，2021，497：14-27.

[4]王文慧，邵志葉，陳豪.宮頸癌組織中Hippo-Yes相關蛋白1

的表達及臨床意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2020，30（12）：27-32.

[5] BWW A，SJD A，TEIB C，et al.Radiomic features of cervical cancer on T2-and diffusion-weighted MRI：prognostic value in low-volume tumors suitable for trachelectomy-ScienceDirect[J].Gynecologic Oncology，2020，156（1）：107-114.

[6]李志強，魏艷玲，高靜.宮頸癌組織中Cep55與FoxM1蛋白表達與臨床病理特征及預后的相關性分析[J].現(xiàn)代醫(yī)學，2020，48（2）：162-167.

[7]方三高，魏建國，王巍偉，等.國際子宮頸腺癌標準和分類（IECC）及進展[J].臨床與實驗病理學雜志，2020，36（5）：1358-1359.

[8]徐曉鋒，王純，盧國豐，等.宮頸癌患者Kruppel樣因子6，p21蛋白表達水平與病理特征及化療敏感性的相關性分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2020，35（6）：12-15.

[9]蔣瑤，張榮，張靜怡，等.宮頸癌組織YAP1和SRSF3蛋白表達與臨床病理參數(shù)及預后的關系[J].中華實用診斷與治療雜志，2021，35（2）：131-135.

[10] HUANG J，DENG Y，BOAKYE D，et al.Global distribution，risk factors，and recent trends for cervical cancer： A worldwide country-level analysis[J].Gynecologic Oncology，2022，164（1）：85-92.

[11]張斐斐，高雪梅，程敬亮，等.T1-mapping定量技術反映宮頸癌病理學特征的可行性研究[J].臨床放射學雜志，2020，39（9）：139-143.

[12]蔣勵帥，萬玉婷，朱海娟.白蛋白、高密度脂蛋白及同型半胱氨酸與宮頸癌患者病情進展的相關性[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2022，21（6）：636-639.

[13]彭靚，曹保娣，杜雨璇，等.基于SEER數(shù)據(jù)庫分析原發(fā)性年輕宮頸腺癌臨床病理特點及預后[J].腫瘤預防與治療，2020，33（2）：140-146.

[14] ZHU L，HUANG Y，LAM D，et al.Targetability of cervical cancer by magnetic resonance-guided high-intensity focused ultrasound （MRgHIFU）-mediated hyperthermia （HT） for patients receiving radiation therapy[J].International Journal of Hyperthermia，2021，38（1）：498-510.

[15]張濤紅，張萌，熊莉莉，等.高危型HPV感染與宮頸癌的臨床病理因素相關性研究[J].蘭州大學學報（醫(yī)學版），2021，47（1）：42-46.

[16]崔瑩，郭春霞，張亞男，等.細胞自噬與高危型人乳頭瘤病毒感染致宮頸癌的臨床病理特征和相關性[J].中國婦幼保健，2022，37（1）：126-128.

[17] ZHANG L，ZHENG C Y，CAO J H，et al.Efficacy of paclitaxel，carboplatin，and bevacizumab for cervical cancer：a protocol for systematic review and meta-analysis[J/OL].Medicine，2020，99（24）：e20558.https：//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32541479/.

[18]郭麗，高偉，袁秋月，等.血漿循環(huán)腫瘤DNA與宮頸癌臨床病理特征的相關性分析[J].醫(yī)學分子生物學雜志，2021，18（5）：349-353.

[19]牟大英，黃露，李坪原.宮頸癌PI3K/Akt/mTOR信號通路相關蛋白的表達及與臨床病理特征和預后的關系[J].重慶醫(yī)科大學學報，2021，46（6）：675-680.

[20]賴炳佳，黎繼昕，顏卓恒，等.RESOLVE及其ADC值與宮頸癌臨床分期，病理分化的相關性研究[J].國際醫(yī)學放射學雜志，2020，43（5）：525-528.

（收稿日期：2022-11-02） （本文編輯：何玉勤）