郭司群 遲曉雪 白雅靜
【摘要】目的:建立亞瑪丸中羥基紅花黃色素A的含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法,色譜柱為SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2 C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相為甲醇、乙腈和0.7%磷酸溶液進行洗脫,流速為0.8 mL/min;柱溫:35 ℃;檢測波長403 nm。結(jié)果:羥基紅花黃色素A在2.01~30.15 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.9999,回收率為96.5%。結(jié)論:該方法經(jīng)方法學驗證準確可行,可用于亞瑪丸的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;亞瑪丸;羥基紅花黃色素A
【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517(2023)12-0030-03
Study on Determination of Hydroxysafflower Yellow A in Yama Pill GUO Siqun CHI Xiaoxue BAI Yajing
1.Hulunbeier Institute for Food and Drug Control,Hulunbeier 021008,China;
2.Hulunbuir Institute of Forestry and Grassland Science, Hulunbeier 021008,ChinaAbstract:Objective To establish a method for the determination of Hydroxysafflower yellow A in Yama pill. Methods high performance liquid chromatography was used. The column was SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2 C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm), the mobile phase was methanol acetonitrile 0.7% phosphoric acid solution, the flow rate was 0.8 mL/min, the column temperature was 35 ℃, and the detection wavelength was 403 nm. Results the linear relationship of Hydroxysafflower yellow A was good in the range of 2.01-30.15 μg/mL,r=0.9999,the recovery rate was 96.5%.Conclusion The method is proved to be accurate and feasible by methodology, and can be used for the quality control of Yama Pills.
Keywords:HPLC;Yama Pill;Hydroxysafflower Yellow A
蒙藥制劑亞瑪丸由制硼砂、熱制水銀、制硫磺、人工牛黃、草烏葉、訶子、翻白草、苘麻子、決明子、梔子、楓香脂、紅花、石菖蒲、山麥冬、沒藥、檀香、大托葉云實、木香、水牛角濃縮粉、丁香、文冠木、銀朱、川楝子、人工麝香二十四味藥組成。具有消“粘”,祛“亞瑪”病,清血,熱的功效,可用來治療“亞瑪”病諸癥[1],風濕,類風濕,皮膚病,偏正頭疼、血熱頭疼,小腦刺痛,中風初期,白脈病。蒙藥制劑是保障蒙醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展的重要前提,其中制劑質(zhì)量控制又是保證蒙藥安全、有效的重要基礎(chǔ)[2],由于亞瑪丸目前暫無質(zhì)量標準,無法有效控制制劑質(zhì)量,因此本實驗根據(jù)制劑功效選取組方藥材紅花作為制劑質(zhì)量控制藥材。紅花,性溫、味辛,具有通經(jīng)散瘀、消腫止痛的功效[3]。參考《中國藥典》2020年版一部中“紅花”項下的含量測定方法[4],建立高效液相色譜法,對處方中紅花所含的羥基紅花黃色素A的含量測定進行研究。
1儀器與材料
島津LC-20AT型高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器);KQ2200DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);賽多利斯BSA224S型、BP211D型電子天平(德國賽多利斯科技有限公司);PB-10型酸度計(德國賽多利斯科技有限公司)。
亞瑪丸樣品由內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供(批號:20191811、20200313、20200324);羥基紅花黃色素A (批號:111637-202111,中國食品藥品檢定研究院);乙腈、甲醇(色譜純 Fisher Chemical);磷酸(分析純,天津科密歐試劑有限公司);自制純化水。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱:SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-乙腈(26∶2)為流動相A,0.7%磷酸溶液(用三乙胺調(diào)制pH為6.0±0.1)為流動相B,A∶B(20∶80);流速:0.8 mL/min;柱溫:35 ℃;檢測波長:403 nm;進樣量:20 μL。
2.2溶液的制備
2.2.1對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品4.12 mg,用25%甲醇稀釋制成4.12 μg/mL的溶液,作為對照品溶液。
2.2.2供試品溶液的制備取上述丸劑研細,取約2.0 g,置具塞錐形瓶中,加入25%甲醇50 mL,密塞,稱取重量,超聲(功率350 W,頻率40 kHz)40 min,放冷,再稱取重量,以25%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.2.3陰性對照溶液制備取按處方配比并以同樣工藝生產(chǎn)的缺紅花的陰性供試品,按2.2.2項下供試品溶液制備方法,制得陰性對照溶液。
2.3干擾試驗分別取2.2.1、2.2.2、2.2.3項下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL,按2.1項下色譜條件進行測定,結(jié)果表明:其他組分對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。結(jié)果如圖-1、圖-2和圖-3所示。
2.4方法學考察
2.4.1線性關(guān)系精密稱取羥基紅花黃色素A對照品2.01 mg,用25%甲醇溶解制成每1 mL含羥基紅花黃色素A 40.20 μg的儲備溶液。精密量取對照品儲備溶液0.5 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL和7.5 mL,分別置于10 mL量瓶中,用25%甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成羥基紅花黃色素A的2.01 μg/mL、4.02 μg/mL、10.05 μg/mL、20.10 μg/mL和30.15 μg/m 1系列濃度溶液。按2.1項下色譜條件,以濃度X(μg/mL)為橫坐標,峰面積Y為縱坐標,繪制標準曲線。結(jié)果見表1。
2.4.2精密度試驗取2.2.1項下對照品溶液,按2.1色譜條件連續(xù)進樣5針,記錄色譜峰面積,羥基紅花黃色素 A 峰面積的 RSD為0.36%,表明儀器精密度良好。
2.4.3穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液,分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進行測定,結(jié)果見表2,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.4.4重復性試驗取樣品(批號:20200313)供試品6份,各約2.0 g,精密稱定,按2.2.2項下方法制備,按2.1項下色譜條件測定,結(jié)果見表3,表明該方法的重復性良好。
2.4.5回收率試驗取已知含量的樣品(批號:20200313,含量為0.063 mg/g)9份,各約1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別加入用25%甲醇配制的0.0326 mg/mL羥基紅花黃色素A對照品溶液1.5 mL、1.8 mL、和2.2 mL,按2.2.2項下方法制備,按2.1項下色譜條件測定,計算回收率,結(jié)果見表4,表明該方法的準確度良好。
2.5樣品含量測定取三批樣品按2.2.2項下方法制備,按2.1項下色譜條件測定。結(jié)果見表5。
3討論
3.1色譜條件的選擇參考2020年版《中國藥典》一部“紅花”含量測定項下流動相組成,分別考察甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶78)、甲醇-0.7%磷酸溶液(22∶78)、甲醇-0.7%磷酸溶液(20∶80)及2.1項下流動相比例時羥基紅花黃色素A的保留時間和分離情況,結(jié)果表明:以2.1項下流動相比例,羥基紅花黃色素A能與其他成分達到較好分離,且保留時間在20 min內(nèi)。采用紫外-可見分光光度計對2.2.1項下羥基紅花黃色素 A 對照品溶液在200~450 nm范圍內(nèi)進行波長掃描,結(jié)果在 402.5 nm處有最大吸收,因此選擇 403 nm 作為檢測波長。
3.2供試品溶液制備分別使用甲醇、25%甲醇、50%甲醇和水作為提取溶劑進行考察,結(jié)果表明25%甲醇提取量明顯高于其他三種提取溶劑。對加熱回流和超聲兩種提取方法進行比較,結(jié)果表明兩種提取方法含量差異并不明顯,考慮操作的簡便性,最終選用超聲作為提取方法。同時又對超聲30 min、40 min和50 min進行比較,結(jié)果表明超聲40 min時,羥基紅花黃色素A的提取量明顯高于30 min,與50 min差異不大,所以本次實驗選擇超聲時間為40 min。
綜上,研究建立的高效液相色譜法簡便可行、結(jié)果準確,可用于亞瑪丸的質(zhì)量控制。參考文獻
[1]石瑞平.蒙醫(yī)藥辨證治療亞瑪病的臨床體會[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2012,18(2):17.
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[3]高海珣,楊秀芬.羥基紅花黃色素A藥理作用研究進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(19):41-44.
[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2020:157-158.
(收稿日期:2022-10-14編輯:劉斌)