張 靜 石義鷺 王 妍 張 洋 歐瑞津 閆 敏 王曉宇 孫 平

1.牡丹江醫(yī)學(xué)院解剖教研室，黑龍江牡丹江 157000；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157000；3.牡丹江醫(yī)學(xué)院病原教研室，黑龍江牡丹江 157000；4.牡丹江醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江牡丹江 157000

盡管目前已有一些分子標(biāo)志物可用于預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效，但因價格昂貴而臨床應(yīng)用受限[1-2]。因此，臨床急需準(zhǔn)確、創(chuàng)傷小、可重復(fù)、并方便檢測的新型標(biāo)志物[3-4]。本研究探討循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 水平與乳腺癌患者新輔助化療效果的關(guān)系，以驗(yàn)證前期研究結(jié)果，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。并分析循環(huán)血miRNA-34a 水平、miRNA-4530 水平、miRNA-34a 聯(lián)合miRNA-4530對乳腺癌新輔助化療療效的預(yù)測效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1—12 月經(jīng)牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院就診的70 例進(jìn)行新輔助化療的原發(fā)性乳腺癌患者，依據(jù)新輔助化療療效將完全緩解（complete remission，CR）和部分緩解（partial remission，PR）劃分為敏感組，疾病進(jìn)展（disease progression，PD）和穩(wěn)定（stablize disease，SD）劃分為耐藥組，每組各35 例。敏感組患者年齡35 ～65 歲，平均（52.45±8.69）歲；病理分期：Ⅱ期20 例，Ⅲ期15 例；分子分型：Luminal A 型13 例，Luminal B 型10 例，人表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2， HER-2）過表達(dá)型8 例，三陰型4 例。耐藥組患者年齡36 ～66 歲，平均（52.85±8.46）歲；病理分期：Ⅱ期21 例，Ⅲ期14 例；分子分型：Luminal A 型14 例，Luminal B 型11 例，HER-2 過表達(dá)型7 例，三陰型3 例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），具有可比性。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均由病理檢查確診；臨床分期為Ⅱ、Ⅲ期；年齡≥18 歲；預(yù)計(jì)患者生存期≥8 周，預(yù)計(jì)新輔助化療周期為6 ～8 周。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往接受過新輔助化療者；合并有其他組織器官惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 的檢測 分別于開始化療前，第1 個、第2 個化療周期結(jié)束，化療結(jié)束時，所有患者抽取空腹肘正中靜脈血液5 ～10 ml，真空采血管收集，室溫靜置30 min 后，4℃下1600 r/min 離心10 min 獲得血漿，放置于-80℃?zhèn)溆?。利用RT-RNA 法檢測循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)。

1.2.2 循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 水平與乳腺癌患者新輔助化療效果的關(guān)系 根據(jù)前述分組，利用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對敏感組和耐藥組患者循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 水平進(jìn)行對比分析，以驗(yàn)證前期研究結(jié)果，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。

1.2.3 循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 水平預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的效能 根據(jù)前述檢測結(jié)果，利用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，采用受試者工作曲線（receiver operating curve， ROC）分析循環(huán)血miRNA-34a水平、miRNA-4530 水平、miRNA-34a 聯(lián)合miRNA-4530預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的效能[4]。

1.3 療效評定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)實(shí)體瘤療效評估標(biāo)準(zhǔn)（solid tumor response evaluation criteria， RECIST），對所有納入研究中的采用主流藥物蒽環(huán)類+紫杉類（anthracyclines+taxoids，EC-T）化療6 ～8 周期的乳腺癌患者進(jìn)行評估。所有靶病灶完全消失為CR；靶病灶直徑之和比基線水平減少至少30% 為PR；以整個研究過程中所有測量的靶病灶直徑之和的最小值為參照，靶病灶直徑之和相對增加至少20% 或出現(xiàn)一個或多個新病灶視為PD；靶病灶減小的程度未達(dá)到PR，增加的程度也未達(dá)到PD 水平，介于兩者之間視為SD[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，采用t檢驗(yàn)及方差分析，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。預(yù)測效能的分析使用ROC 曲線分析敏感度與特異度。

2 結(jié)果

2.1 不同病理分期、分子分型患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530的檢測結(jié)果比較

病理分期Ⅱ期患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平均高于Ⅲ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），分子分型Luminal A 型、Luminal B 型、HER-2 過表達(dá)型、三陰型患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平均逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表1。

表1 不同病理分期、分子分型患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530的檢測結(jié)果比較（x ± s）

2.2 兩組循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530水平比較

敏感組患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530表達(dá)水平均高于耐藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），見表2。

表2 兩組循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530水平比較（x ± s）

2.3 循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530水平預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的效能分析

循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平聯(lián)合檢測預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的敏感度、特異度高于單獨(dú)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），見表3。

表3 循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530水平預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的效能分析

3 討論

檢測外周血miRNA 采樣簡單、價格低廉、可連續(xù)動態(tài)監(jiān)測[6-7]。已有研究證實(shí)，循環(huán)血miRNA-34a表達(dá)水平的變化能對新輔助化療的療效進(jìn)行準(zhǔn)確地預(yù)測，但具有較長的敏感時間，需要到化療的第二個周期[8]。此外，循環(huán)血miRNA-4530 也可作為預(yù)測化學(xué)治療反應(yīng)性的標(biāo)志物，但診斷效能較低[9]。理論上講，將循環(huán)血miRNA-34a 和miRNA-4530聯(lián)合作為跟蹤和預(yù)測乳腺癌新輔助化療反應(yīng)性的標(biāo)志物，則可避免單一miRNAs 預(yù)測效能低下，增加其預(yù)測敏感度和特異度[10]。如能實(shí)現(xiàn)這一研究目標(biāo)，則會將新的可能性提供給乳腺癌新輔助化療療效預(yù)測，將提給乳腺癌的臨床治療供更進(jìn)一步的依據(jù)，減少患者不必要的治療，為乳腺癌患者爭取手術(shù)及有效治療的機(jī)會。

有研究[11]通過分析乳腺癌患者的血清miRNA-34 水平，并在新輔助化療前、化療第2 個周期、化療結(jié)束時重復(fù)檢測，發(fā)現(xiàn)化療前，乳腺癌患者的血清miRNA-34 表達(dá)水平明顯高于健康志愿者；化療前、化療第2 個周期、化療結(jié)束時，治療有效組和無效組患者的血清miRNA-34 水平之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療反應(yīng)和血清miR-34表達(dá)水平變化關(guān)系密切；化療第2 周期、化療結(jié)束時，治療有效組患者的血清miR-34 水平均低于化療前，但無效組變化不明顯。ROC 曲線顯示，血清miRNA-34 表達(dá)水平的變化能對新輔助化療的療效進(jìn)行準(zhǔn)確地預(yù)測。但是應(yīng)該注意，在乳腺癌新輔助化療療效的預(yù)測中，循環(huán)血miRNA-34 水平在化療第2 周期后才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新輔助化療治療乳腺癌患者的化療周期為3 周，化療2 個周期為6 周，而通常情況下，患者化療周期為4 ～6 個?？梢钥闯?，在新輔助化療療效的預(yù)測中，雖然外周血miRNA-34 表達(dá)水平變化能夠?qū)?zhǔn)確依據(jù)提供出來，但是單一依靠miRNA-34 具有較晚的表現(xiàn)時間，這就對其臨床應(yīng)用造成了一定程度的限制[12]。

隨后，有研究通過分析78 例Ⅱ～Ⅲ期接受新輔助化療的乳腺癌患者，結(jié)果表明，ROC 曲線分析結(jié)果顯示，曲線下面積為0.662，具有一定的預(yù)測價值[13-14]。此外，也有研究證實(shí)[15-16]，miRNA-4530 通過靶向乳腺癌細(xì)胞中的血管生成抑制蛋白1（vasohibin 1，VASH1促進(jìn)血管生成，對乳腺癌生物活性起到影響。由此可見，外周血miRNA-4530 水平也可作為對乳腺癌新輔助化療療效進(jìn)行預(yù)測的指標(biāo)之一，但其預(yù)測效能較低，AUC 僅為0.662。

目前關(guān)于miRNAs 預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的研究中，已有多項(xiàng)研究聯(lián)合≥2 個miRNAs 進(jìn)行預(yù)測，其目的是避免單一miRNAs 預(yù)測效能低下，增加其預(yù)測敏感度和特異度[17-18]。本研究結(jié)果表明，病理分期Ⅱ期患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平均高于Ⅲ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），分子分型Luminal A 型、Luminal B 型、HER-2 過表達(dá)型、三陰型患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平均逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。敏感組患者的循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平均高于耐藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。循環(huán)血miRNA-34a、miRNA-4530 表達(dá)水平聯(lián)合檢測預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的靈敏度、特異度高于單獨(dú)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），證實(shí)聯(lián)合檢測價值高。

不足之處在于樣本數(shù)量較少、觀察時間較短，造成研究結(jié)果可能存在偏差，今后應(yīng)該擴(kuò)大樣本量、延長隨訪時間，進(jìn)行進(jìn)一步深入細(xì)致的研究。

綜上所述，乳腺癌中的miRNA-34a聯(lián)合miRNA-4530表達(dá)預(yù)測新輔助化療療效的價值高，值得推廣。