葉 迎，王瑞海，苗 青，許 京，吳東苑，劉麗梅*

甘肅產(chǎn)1～2年生紅芪和黃芪皂苷、多糖、黃酮類成分含量差異研究

葉 迎1，王瑞海1，苗 青1，許 京1，吳東苑2，劉麗梅1*

1. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所 中藥分析室，北京 100700 2. 中央民族大學(xué)理學(xué)院，北京 100081

對(duì)甘肅產(chǎn)1～2年生紅芪（多序巖黃芪）和黃芪（蒙古黃芪var.或膜莢黃芪）總皂苷、總多糖、黃酮類成分含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，綜合多指標(biāo)探討紅芪和黃芪的差異。運(yùn)用R3.3.2軟件，選取總皂苷、總黃酮、總多糖、毛蕊異黃酮苷、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花素、4種異黃酮含量總和8個(gè)含量指標(biāo)，產(chǎn)地、品種、采收時(shí)間、緯度、經(jīng)度、海拔高度6個(gè)影響質(zhì)量的因素做變量，采用相關(guān)分析、聚類分析、主成分分析方法，對(duì)甘肅產(chǎn)1～2年生紅芪和黃芪質(zhì)量差異進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。聚類結(jié)果表明紅芪、黃芪聚成2大類，2種藥材品質(zhì)相差較大；主成分分析結(jié)果表明，黃芪質(zhì)量?jī)?yōu)于紅芪，總體上2年生紅芪、黃芪藥材質(zhì)量?jī)?yōu)于1年生藥材，宕昌產(chǎn)黃芪質(zhì)量較優(yōu)，武都產(chǎn)紅芪質(zhì)量較優(yōu)。甘肅產(chǎn)紅芪和黃芪藥材質(zhì)量有明顯差異，從質(zhì)量角度分析，二者不適合替代使用。

紅芪；黃芪；毛蕊異黃酮苷；毛蕊異黃酮；芒柄花苷；芒柄花素；聚類分析

《中國(guó)藥典》2020年版一部規(guī)定，黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Fisch.) Bge. var.(Bge.) Hsiao或膜莢黃芪(Fisch.) Bge.的干燥根，紅芪為豆科植物多序巖黃芪Hand.-Mazz的干燥根，二者均具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血、行滯通痹、托毒排膿、斂瘡生肌的功效[1]。在傳統(tǒng)中醫(yī)用藥中黃芪和紅芪本不分，二者自古就通用。而至今，在我國(guó)西北、西南、港澳臺(tái)地區(qū)及東南亞一些地區(qū)仍有以紅芪用作黃芪替代品的習(xí)慣[2,3]，同時(shí)在中成藥中也有用紅芪代替黃芪入藥的現(xiàn)象存在[4]。僅從功效相同的角度來(lái)看，紅芪似乎可以代替黃芪使用，但藥典中并未指出2藥材在功效相同的基礎(chǔ)上，是否有藥效強(qiáng)弱之分、或?qū)δ撤N功效有所側(cè)重?，F(xiàn)代藥理研究表明，中藥發(fā)揮藥效是因其含有多種能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生藥理作用的活性成分。紅芪和黃芪中主要的活性成分種類有黃酮、皂苷、多糖[5-7]，每一種成分對(duì)藥效都有不同的影響[8-14]。對(duì)于紅芪和黃芪黃酮、皂苷、多糖類成分含量綜合對(duì)比研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。甘肅是紅芪、黃芪道地產(chǎn)區(qū)，基于此，本課題選擇甘肅不同產(chǎn)地同一生態(tài)環(huán)境下種植的紅芪和黃芪，統(tǒng)一加工方法和研究方法，對(duì)紅芪和黃芪2個(gè)品種藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行對(duì)比分析。為了能夠全面、綜合評(píng)價(jià)二者的質(zhì)量，使得出的結(jié)論更加可靠，本實(shí)驗(yàn)將測(cè)定的所有紅芪和黃芪中黃酮[15-16]、皂苷[17-18]、多糖[19]以及異黃酮[20]的含量結(jié)果作為研究數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過(guò)對(duì)紅芪和黃芪藥材中主要有效成分含量的綜合對(duì)比，說(shuō)明二者在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)方面的異同，進(jìn)而闡明紅芪是否可以代替黃芪使用，為指導(dǎo)黃芪臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

對(duì)照品毛蕊異黃酮（批號(hào)PS13081501）、芒柄花素苷（批號(hào)PS13081501）購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司；對(duì)照品毛蕊異黃酮- 7--β-葡萄糖苷（批號(hào)20141109）購(gòu)自北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；對(duì)照品芒柄花素（111703-200603）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，對(duì)照品毛蕊異黃酮葡萄糖苷（批號(hào)111920-201304）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，對(duì)照品黃芪甲苷（批號(hào)20141119）購(gòu)自北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；上述對(duì)照品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；乙腈為色譜純（Fisher公司）；其他試劑為分析純，水為純凈水。

紅芪、黃芪藥材分別采自甘肅宕昌、武都、隴西、渭源、岷縣、禮縣，并經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所胡世林教授鑒定為《中國(guó)藥典》2020年版收載的正品黃芪和紅芪，黃芪1～4、9～18、22～28號(hào)原植物為蒙古黃芪(Fisch.)Bge. var.(Bge.) Hsiao，5～8、19～21號(hào)原植物為膜莢黃芪(Fisch.) Bge.；紅芪1～28號(hào)原植物為多序巖黃芪Hand. -Mazz.的根，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 甘肅產(chǎn)不同產(chǎn)地紅芪和黃芪采樣信息

Table1 Sampling information of Hedysari Radix and Astragali Radixfrom different geographical origins of Gansu

藥材編號(hào)藥材生長(zhǎng)年限/年地區(qū)品種采收時(shí)間緯度 (N)/°經(jīng)度(E) /°海拔高度/m R1-1紅芪1禮縣多序巖黃芪2014-1034.17105.31611 R1-2紅芪1禮縣多序巖黃芪2014-1034.16105.21667 R1-3紅芪1岷縣多序巖黃芪2014-1034.53104.12447 R1-4紅芪1渭源縣多序巖黃芪2014-1035.07104.32027 R1-5紅芪1隴西縣多序巖黃芪2014-1035.09104.51831 R1-6紅芪1隴西縣多序巖黃芪2014-1035.09104.51827 R1-7紅芪1隴西縣多序巖黃芪2014-1035.13104.41866 R1-8紅芪1隴西縣多序巖黃芪2014-1035.19104.41959 R1-9紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.05104.22010 R1-10紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.08104.22141 R1-11紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.18104.22343 R1-12紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.18104.22300 R1-13紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.18104.22392 R1-14紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.10104.31808 R1-15紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1133.10104.31820 R1-16紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.01104.11762 R1-17紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1133.71104.91784 R1-18紅芪1宕昌縣多序巖黃芪2014-1134.61104.82086 R1-19紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.29150.51673 R1-20紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.32105.12133 R1-21紅芪1武都多序巖黃芪2014-1133.80105.31746 R1-22紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.29105.61961 R1-23紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.28105.92116 R1-24紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.28105.82103 R1-25紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.35104.51863 R1-26紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.15105.41799 R1-27紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.23105.21751

續(xù)表1

藥材編號(hào)藥材生長(zhǎng)年限/年地區(qū)品種采收時(shí)間緯度 (N)/°經(jīng)度(E) /°海拔高度/m R1-28紅芪1武都多序巖黃芪2014-1233.28105.51497 Y1-1黃芪1岷縣蒙古黃芪2014-1134.32104.02308 Y1-2黃芪1岷縣蒙古黃芪2014-1134.32104.02243 Y1-3黃芪1岷縣蒙古黃芪2014-1034.53104.12296 Y1-4黃芪1渭源縣蒙古黃芪2014-1035.07104.32024 Y1-5黃芪1隴西縣膜莢黃芪2014-1035.09104.51831 Y1-6黃芪1隴西縣膜莢黃芪2014-1035.09104.51822 Y1-7黃芪1隴西縣膜莢黃芪2014-1035.13104.41969 Y1-8黃芪1隴西縣膜莢黃芪2014-1035.19104.41959 Y1-9黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.03104.22050 Y1-10黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.06104.12100 Y1-11黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.15104.12300 Y1-12黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.15104.22250 Y1-13黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.16104.22350 Y1-14黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.07104.21758 Y1-15黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1133.57104.31850 Y1-16黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1134.05104.21800 Y1-17黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1033.56104.41750 Y1-18黃芪1宕昌縣蒙古黃芪2014-1034.04104.31950 Y1-19黃芪1武都膜莢黃芪2014-1233.29150.51673 Y1-20黃芪1武都膜莢黃芪2014-1233.30105.11673 Y1-21黃芪1武都膜莢黃芪2014-1233.80105.31746 Y1-22黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.29105.61961 Y1-23黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.28105.92116 Y1-24黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.28105.82103 Y1-25黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.35104.51863 Y1-26黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.15105.41799 Y1-27黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.23105.21751 Y1-28黃芪1武都蒙古黃芪2014-1233.15105.41799 R2-1紅芪2禮縣多序巖黃芪2015-1034.17105.31611 R2-2紅芪2禮縣多序巖黃芪2015-1034.16105.21667 R2-3紅芪2岷縣多序巖黃芪2015-1034.53104.12447 R2-4紅芪2渭源縣多序巖黃芪2015-1035.07104.32027 R2-5紅芪2隴西縣多序巖黃芪2015-1035.09104.51831 R2-6紅芪2隴西縣多序巖黃芪2015-1035.09104.51827 R2-7紅芪2隴西縣多序巖黃芪2015-1035.13104.41866 R2-8紅芪2隴西縣多序巖黃芪2015-1035.19104.41959 R2-9紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1134.05104.22010 R2-10紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1034.08104.22141 R2-11紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1034.18104.22343 R2-12紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1034.18104.22300 R2-13紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1134.18104.22392 R2-14紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1134.10104.31808 R2-15紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1133.10104.31820 R2-16紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1134.01104.11762 R2-17紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1133.71104.91784 R2-18紅芪2宕昌縣多序巖黃芪2015-1134.61104.82086 R2-19紅芪2武都多序巖黃芪2015-1233.29150.51673 R2-20紅芪2武都多序巖黃芪2015-1233.32105.12133 R2-21紅芪2武都多序巖黃芪2015-1233.80105.31746 R2-22紅芪2武都多序巖黃芪2015-1233.29105.61961 R2-23紅芪2武都多序巖黃芪2015-1233.28105.92116 R2-24紅芪2武都多序巖黃芪2015-1233.28105.82103 R2-25紅芪2武都多序巖黃芪2015-1133.35104.51863 R2-26紅芪2武都多序巖黃芪2015-1133.15105.41799 R2-27紅芪2武都多序巖黃芪2015-1133.23105.21751 R2-28紅芪2武都多序巖黃芪2015-1133.28105.51497 R2-1黃芪2岷縣蒙古黃芪2015-1034.32104.02308 R2-2黃芪2岷縣蒙古黃芪2015-1034.32104.02243 R2-3黃芪2定西市蒙古黃芪2015-1035.43102.62019 R2-4黃芪2渭源縣蒙古黃芪2015-1035.07104.32024 R2-5黃芪2隴西縣膜莢黃芪2015-1035.09104.51831 R2-6黃芪2隴西縣膜莢黃芪2015-1035.09104.51822 R2-7黃芪2隴西縣膜莢黃芪2015-1035.13104.41969 R2-8黃芪2隴西縣膜莢黃芪2015-1035.19104.41959

續(xù)表1

1.2 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀、Agilent Ecslipe-XDB C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、8453型紫外-可見(jiàn)分光光度儀（美國(guó)安捷倫公司）；CX-250型超聲波清洗機(jī)（天海雙龍醫(yī)療設(shè)備有限公司）；CP2202S型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；SPS202F型電子分析天平（奧豪斯公司）；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海振捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；KQ-250型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

2 方法

2.1 指標(biāo)成分的測(cè)定

總皂苷、總黃酮、總多糖及毛蕊異黃酮苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素苷、芒柄花素和4種異黃酮含量總和，以及6個(gè)影響質(zhì)量的因素：產(chǎn)地、種類、采收時(shí)間、緯度、經(jīng)度、海拔高度做變量，對(duì)甘肅1～2年生紅芪和黃芪質(zhì)量差異做綜合評(píng)價(jià)。紅芪和黃芪黃酮類成分、總皂苷、總多糖含量經(jīng)過(guò)本課題組實(shí)驗(yàn)測(cè)得。

2.1.1 紅芪、黃芪總黃酮含量測(cè)定方法[15-16]取紅芪、黃芪約0.8 g，精密稱定，分別置平底燒瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流3 h，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液12.5 mL，減壓回收溶劑至干，用水溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，加水飽和正丁醇溶液萃?。?次×5 mL），合并正丁醇溶液，減壓回收溶劑至干，用甲醇溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得紅芪、黃芪供試品溶液。以毛蕊異黃酮葡萄糖苷為對(duì)照品，以甲醇為空白，在260 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（）值。

2.1.2 紅芪、黃芪總皂苷含量測(cè)定方法[17-18]取紅芪、黃芪粉末（過(guò)50目篩）約0.8 g，精密稱定，分別置平底燒瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流3 h，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液12.5 mL，減壓回收溶劑至干，用水溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，加水飽和正丁醇溶液萃取（4次×5 mL），合并正丁醇溶液，減壓回收溶劑至干，用甲醇溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3 mL定容至25 mL量瓶中，搖勻即得紅芪、黃芪供試品溶液（含生藥質(zhì)量濃度為0.02 g/L）。精密吸取黃芪和紅芪供試品及黃芪甲苷對(duì)照品溶液（純水作為空白溶液）各0.15 mL，置具塞刻度試管中，90 ℃水浴揮干溶劑，放冷，分別加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL和高氯酸1.6 mL，搖勻，分別置100 ℃水浴加熱20 min，取出，立即置冰浴中冷卻5 min，加入冰醋酸8 mL，搖勻，在540 nm波長(zhǎng)處測(cè)定值。

2.1.3 紅芪、黃芪總多糖含量測(cè)定方法[19]取紅芪、黃芪粉末（50目）各約1.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入水25 mL水，稱定質(zhì)量，100 ℃回流提取1.5 h，放置室溫，再稱定質(zhì)量，用蒸餾水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，離心，精密量取上清液0.5 mL，置離心管中，加無(wú)水乙醇2.7 mL（醇沉濃度至80 %），搖勻，冷藏過(guò)夜，離心，取沉淀加無(wú)水乙醇5 mL洗滌1次，離心，取沉淀加水溶解，置25 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品。以葡萄糖為對(duì)照品，精密量取供試品溶液0.5～2.0 mL置10 mL量瓶中，加水補(bǔ)至2 mL，加4%苯酚溶液1 mL及濃硫酸5 mL，混勻，室溫放置20 min使冷卻，于490 nm處測(cè)定值。

2.1.4 紅芪、黃芪異黃酮類成分含量測(cè)定方法[21]

（1）供試品溶液的制備：取紅芪、黃芪粉末（過(guò)50目篩）約0.8 g，精密稱定，分別置平底燒瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流3 h，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液12.5 mL，減壓回收溶劑至干，用水溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，加水飽和正丁醇溶液萃?。?次×5 mL），合并正丁醇溶液，減壓回收溶劑至干，用甲醇溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得紅芪、黃芪供試品溶液。

（2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素對(duì)照品適量，溶于80%甲醇配制成混合對(duì)照品溶液。

（3）色譜條件：采用Agilent Eclipse-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），在254 nm處檢測(cè)，以乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相梯度為0～13 min，16%～20% A；13～33 min，20%～33% A；33～46 min，33%～35% A。精密吸取混合對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，進(jìn)樣分析黃芪和紅芪4種異黃酮類成分，色譜圖見(jiàn)圖1。

（4）毛蕊異黃酮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密量取毛蕊異黃酮苷對(duì)照品溶液225 μg/mL稀釋相應(yīng)倍數(shù)，配制成質(zhì)量濃度分別為112.5、45、22.5、2.25、0.562 5 μg/mL的對(duì)照品溶液。取原對(duì)照品溶液及稀釋后對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量為10 μL，記錄峰面積分別為6812.4、3578.9、1379.5、703.7、81.6、19.7。以峰面積為縱坐標(biāo)（），毛蕊異黃酮苷質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為＝3 041.4＋28.755，＝0.999 7，結(jié)果表明毛蕊異黃酮苷在0.005 625～2.25 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

（5）芒柄花苷標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密量取芒柄花苷對(duì)照品溶液222 μg/mL稀釋相應(yīng)倍數(shù)，配制成質(zhì)量濃度分別為111.0、74.0、44.4、22.2、11.1 μg/mL的對(duì)照品溶液。取原對(duì)照品溶液及稀釋后對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量為10 μL，記錄峰面積分別為5 800.0、3 067.8、2 110.6、1 229.7、671.5、323.5。以峰面積為縱坐標(biāo)（），芒柄花苷質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為＝2591.8＋106.81，＝0.999 4。結(jié)果表明芒柄花苷在0.111～2.22 μg內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1-毛蕊異黃酮苷 2-芒柄花素苷 3-毛蕊異黃酮 4-芒柄花素

（6）毛蕊異黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密量取毛蕊異黃酮對(duì)照品溶液11.2 μg/mL稀釋相應(yīng)倍數(shù)，配制成質(zhì)量濃度分別為5.6、1.12、0.56、0.224、0.112 μg/mL的對(duì)照品溶液。取原對(duì)照品溶液及稀釋后對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量為10 μL，記錄峰面積分別為549.8、282.8、54.5、27.7、11.3、6.3。以峰面積為縱坐標(biāo)（），毛蕊異黃酮質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，＝4 925.6＋0.933，＝0.999 9。結(jié)果表明毛蕊異黃酮在0.001 12～0.112 μg內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

（7）芒柄花素標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密量取芒柄花素對(duì)照品溶液168 μg/mL稀釋相應(yīng)倍數(shù)，配制成質(zhì)量濃度分別為84.0、16.8、1.68、0.336、0.168 μg/mL的對(duì)照品溶液。取原對(duì)照品溶液及稀釋后對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量為10 μL，記錄峰面積分別為7 712.1、3 994.9、747.4、80.7、17.8、10.7。以峰面積為縱坐標(biāo)（），芒柄花素質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為＝4 614.8＋9.683 5，＝0.999 8。結(jié)果表明芒柄花素在0.001 68～1.68 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

（8）精密度考察：精密量取對(duì)照品混標(biāo)溶液，進(jìn)樣量10 μL，連續(xù)測(cè)定6次。方法學(xué)考察結(jié)果表明毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素RSD分別為1.6%、0.69%、1.2%、1.4%，說(shuō)明本方法精密度良好。

（9）穩(wěn)定性考察：精密黃芪和紅芪23號(hào)藥材粉末（過(guò)50目篩）各1份，制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，進(jìn)樣量為10 μL，記錄峰面積，進(jìn)行含量計(jì)算，結(jié)果紅芪中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素在24 h內(nèi)RSD分別為1.6%、1.2%、2.2%、0.91%；黃芪中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素在24 h內(nèi)RSD分別為0.88%、0.77%、0.82%、1.9%；表明紅芪和黃芪供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

（10）重復(fù)性考察：取同一批次的黃芪和紅芪樣品粉末各6份，精密稱定，按已建立的方法，進(jìn)樣量為10 μL，記錄峰面積，進(jìn)行含量計(jì)算，結(jié)果紅芪中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素含量RSD分別為2.7%、2.3%、2.1%、2.0%；黃芪中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素含量RSD分別為2.5%、2.5%、2.2%、2.7%；表明二者的重復(fù)性符合規(guī)定。

（11）加樣回收率試驗(yàn)：黃芪對(duì)照品混合對(duì)照品溶液中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素質(zhì)量濃度分別為91.2、46.0、2.4、3.0 μg/mL；紅芪對(duì)照品混合對(duì)照品溶液中毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素質(zhì)量濃度分別為4.6、61.0、1.2、22.4 μg/mL。分別精密吸取黃芪對(duì)照品混標(biāo)溶液和紅芪對(duì)照品混標(biāo)溶液各5 mL，置于平底燒瓶中，每種混合對(duì)照品各6份，水浴蒸干溶劑，精密稱取同一黃芪、紅芪供試品粉末各6份，分別置于上述對(duì)應(yīng)的平底燒瓶中，制備供試品溶液，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果紅芪和黃芪毛蕊異黃酮苷加樣平均回收率分別為99.88%、97.65%，其RSD分別為2.6%、2.1%；芒柄花苷加樣平均回收率分別為102.39%、100.40%，其RSD分別為2.7%、2.6%；毛蕊異黃酮加樣平均回收率分別為102.25%、102.38%，其RSD分別為1.9%、2.7%；芒柄花素加樣平均回收率分別為96.39%、100.33%，其RSD分別為1.1%、2.4%；表明二者的回收率符合規(guī)定。

2.2 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果與分析

3.1 8個(gè)含量指標(biāo)間相互影響程度分析

對(duì)1～2年生紅芪和黃芪中8個(gè)含量指標(biāo)做相關(guān)分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)（表2～4）。結(jié)果見(jiàn)圖2，由圖2可知，所有數(shù)據(jù)當(dāng)中，4種異黃酮含量總和與毛蕊異黃酮苷的含量相關(guān)系數(shù)為0.95，即二者呈強(qiáng)正相關(guān)性，說(shuō)明毛蕊異黃酮苷含量高低決定著4種異黃酮含量總和高低；總黃酮含量和芒柄花素含量的相關(guān)系數(shù)為?0.08，即二者呈弱負(fù)相關(guān)性，說(shuō)明芒柄花素含量高低對(duì)總黃酮含量高低影響很微小。

3.2 紅芪與黃芪2品種8個(gè)考核指標(biāo)的差異比較

對(duì)1～2年紅芪和黃芪中8個(gè)含量指標(biāo)數(shù)據(jù)做組間差異比較，結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5可知，不分年份的紅芪和黃芪在8個(gè)含量指標(biāo)中均有顯著性差異，說(shuō)明紅芪和黃芪在總黃酮、總皂苷、總多糖含量及4種異黃酮含量總和上2藥材存在顯著性差異；同時(shí)在毛蕊異黃酮苷、芒柄花素苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素4種異黃酮成分含量上2藥材也存在明顯不同。由此含量可見(jiàn)，紅芪不適合替代黃芪使用。

3.3 紅芪和黃芪2個(gè)品種鑒別指標(biāo)的差異可視化分析

對(duì)紅芪和黃芪中的8個(gè)考核指標(biāo)做差異可視化分析，可視化圖見(jiàn)圖3。從直觀上來(lái)看，變量V4、V6、V7、V8兩兩交互時(shí)，具有較好的區(qū)分度，說(shuō)明毛蕊異黃酮-7--β-葡萄糖苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素含量及4種異黃酮總量在紅芪和黃芪中存在明顯區(qū)別，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，能較好的區(qū)分紅芪和黃芪。而芒柄花素苷在紅芪和黃芪中差異不明顯，說(shuō)明在指紋圖譜中選其做參照物具有合理性。其余變量?jī)蓛山换r(shí)雖然有一定的區(qū)分度，但不能把二者區(qū)分開(kāi)。

表2 甘肅1～2年生紅芪和黃芪總黃酮、總皂苷、總多糖含量

Table2 Total flavonoids, total saponins, and total polysaccharides content of 1—2 years old Hedysari Radix and Astragali Radix in Gansu

藥材編號(hào)總黃酮/%總皂苷/%總多糖/% 1年生紅芪1年生黃芪2年生紅芪2年生黃芪1年生紅芪1年生黃芪2年生紅芪2年生黃芪1年生紅芪1年生黃芪2年生紅芪2年生黃芪 10.260.290.790.393.154.618.024.2013.274.766.94 9.95 20.370.280.410.333.604.003.394.5210.657.497.40 8.98 30.460.250.230.463.643.853.484.0813.967.299.40 5.90 40.220.270.250.342.654.242.975.038.635.2310.27 6.23 50.120.300.440.302.774.053.764.8612.768.215.64 7.61 60.180.290.500.282.793.822.315.0411.517.584.29 6.01 70.120.300.530.423.124.813.024.208.588.403.66 6.00 80.100.290.460.492.724.262.495.078.437.565.91 6.30 90.110.380.370.572.665.123.426.279.854.086.50 7.88 100.140.360.390.522.725.483.745.0310.934.086.70 8.20 110.430.540.370.542.805.973.235.7311.504.206.33 7.88 120.300.320.350.523.925.814.414.3714.092.835.78 7.64 130.340.400.370.486.115.414.484.4910.256.085.63 7.63 140.230.430.410.513.684.574.934.5810.143.296.03 9.68 150.380.460.370.613.404.704.125.8114.023.426.70 7.43 160.380.350.350.553.394.523.724.8212.802.666.28 8.35 170.290.330.350.562.574.273.285.1710.862.426.25 7.45 180.270.390.370.562.855.173.564.8610.083.856.57 6.95 190.320.420.490.554.193.924.663.396.211.876.6313.08 200.270.350.380.643.655.524.045.965.881.896.40 9.53 210.320.370.420.384.414.313.734.726.162.304.89 8.14 220.310.360.310.384.094.564.264.478.402.946.15 7.36 230.350.350.310. 503.934.563.514.305.392.475.19 5.39 240.270.330.300.363.673.834.635.676.171.786.48 7.50 250.280.350.380.284.304.094.355.695.341.867.18 8.13 260.280.390.520.454.594.554.784.565.121.275.25 9.50 270.340.360.440.334.144.564.034.975.491.035.41 5.48 280.340.300.420.384.494.234.404.255.401.894.63 6.23 隴西（1～8）平均值0.230.280.450.373.064.213.684.6310.977.066.69 7.12 宕昌（9～18）平均值0.290.400.370.543.415.103.895.1111.453.696.28 7.91 武都（19～28）平均值0.310.360.390.424.154.414.244.805.961.935.82 8.03 全省（1～28）平均值0.280.350.400.453.574.603.954.869.354.026.23 7.73

表3 甘肅1年生紅芪和黃芪4種異黃酮類成分含量

Table3 Four kinds of isoflavones content of one year oldHedysari Radix and Astragali Radix in Gansu

藥材編號(hào)毛蕊異黃酮苷/(μg·g?1)芒柄花素苷/(μg·g?1)毛蕊異黃酮/(μg·g?1)芒柄花素/(μg·g?1)4種異黃酮總量/% 紅芪黃芪紅芪黃芪紅芪黃芪紅芪黃芪紅芪黃芪 121.89486.06262.59269.136.8953.30111.2937.30402.65845.80 217.13472.96338.81265.795.3942.79115.3128.07476.64809.61 333.19552.34609.31299.6510.4439.26126.4225.31779.35916.56 419.79465.34334.28270.576.2337.6377.9225.48438.22799.02 511.74638.75175.54339.813.7043.1480.2125.45271.201 047.14 610.43520.70300.68290.123.2851.7394.3935.43408.79897.98 711.26460.11175.25292.493.5436.0180.0632.10270.11820.72 810.83371.71125.01215.563.4129.6373.0319.00212.28635.91 910.29672.24133.14346.463.2456.9847.2637.19193.931 112.86 1016.71722.74223.10324.575.2679.8791.9939.15337.061 166.33 1124.001 000.18269.04450.667.55101.34145.0648.17445.661 600.34 1215.17558.67207.04356.834.7856.8085.9742.13312.951 014.43 1321.05865.76172.51398.146.6348.4561.6729.49261.861 341.84 1410.54862.81124.83366.523.3259.7942.6928.65181.371 317.76 1520.901 539.17259.15421.406.5857.78102.7618.24389.392 036.58 1617.65814.93258.03312.115.5569.3280.7926.66362.021 223.02 1714.70508.91209.14301.364.6270.5950.9450.70279.40931.56 1810.29862.22169.61444.923.2426.2950.3811.67233.511 345.09 1924.13537.27242.90219.297.6017.64107.528.63382.15782.84 2015.69591.83229.84268.614.9313.9271.587.00322.05881.36 2120.58541.93314.63219.336.4719.23104.0412.38445.73792.87 2219.65561.78222.78239.826.1814.5097.628.44346.23824.55 2319.99569.84460.00239.136.2912.44174.003.77660.28825.18 2414.70386.80239.19172.454.629.3491.849.15350.35577.74 2517.16510.12271.74234.815.4012.7376.574.79370.86762.45 2610.29584.41213.16257.573.2414.5066.1510.52292.83867.01 2729.71548.10311.54243.579.3515.78104.469.15455.05816.61 2827.46548.63306.77252.628.6415.44105.576.78448.44823.46 隴西等（1～8）平均值17.03496.00290.18280.395.3641.6994.8328.52407.41846.59 宕昌（9～18）平均值16.13840.76202.56372.305.0862.7275.9533.21299.711 308.98 武都（19～28）平均值19.93538.07281.26234.726.2714.5599.938.06407.40795.41 全?。?～28）平均值17.75634.15255.70296.905.5839.5189.9122.89368.94993.45

表4 甘肅2年生紅芪和黃芪4種異黃酮類成分含量

Table4 Four kinds of isoflavones content of two years old Hedysari Radix and Astragali Radix in Gansu

藥材編號(hào)毛蕊異黃酮苷/(μg·g?1)芒柄花素苷/(μg·g?1)毛蕊異黃酮/(μg·g?1)芒柄花素/(μg·g?1)4種異黃酮總量/% 紅芪黃芪紅芪黃芪紅芪黃芪紅芪黃芪紅芪黃芪 115.38 430.44 547.02 257.01 21.33 16.70 140.88 8.72 724.62 712.86 29.22 422.66 205.46 270.42 12.79 13.66 128.17 4.11 355.64 710.85 38.07 512.45 128.22 367.57 11.19 17.62 27.93 4.44 175.41 902.08 48.08 631.61 120.18 416.97 11.21 14.48 27.11 4.18 166.57 1067.23 56.69 405.14 252.61 230.60 9.56 25.40 25.90 3.23 294.76 664.37 65.35 444.41 317.29 349.99 5.90 4.75 48.52 32.40 377.06 831.55 75.05 508.41 211.20 254.36 7.00 8.31 87.91 2.09 311.16 773.17 84.41 665.66 310.76 365.62 5.66 5.74 43.96 1.93 364.80 1 038.96 94.42 494.76 138.49 275.53 5.68 76.33 176.83 19.69 325.42 866.31 106.06 502.36 139.44 281.81 8.40 72.21 186.09 17.46 339.99 873.84 115.29 407.84 136.95 235.96 7.34 62.13 191.02 14.85 340.60 720.78 124.97 513.14 147.01 279.90 6.89 82.45 186.18 14.98 345.04 890.46 136.79 446.77 173.92 271.32 9.42 50.08 215.09 13.90 405.22 782.07 144.57 499.12 141.80 293.34 5.43 60.59 192.30 18.02 344.10 871.07 154.60 488.22 140.25 298.28 5.62 6.48 192.32 1.52 342.79 794.50 164.45 400.10 154.43 261.32 6.17 5.22 178.54 1.78 343.59 668.43 174.12 446.71 129.46 254.01 5.72 61.45 177.71 2.76 317.01 764.93 183.97 438.19 144.11 251.66 5.51 66.55 199.72 14.95 353.31 771.35 1917.06 416.46 363.75 232.26 23.65 80.80 117.30 20.32 521.75 749.84 206.87 479.88 247.46 251.83 9.52 88.10 78.25 28.80 342.09 848.61 212.38 336.46 304.03 316.51 3.52 35.91 84.55 14.00 394.48 702.88 228.56 433.45 250.62 254.21 11.87 20.89 69.64 2.79 340.69 711.35 233.82 533.70 143.49 291.94 5.30 25.95 53.31 5.69 205.93 857.28 243.14 529.91 211.55 437.03 4.35 10.82 46.08 1.45 265.13 979.21 258.44 500.09 236.79 472.50 11.69 10.50 98.63 1.66 355.56 984.74 2611.61 364.86 256.31 219.65 16.09 5.45 114.11 1.54 398.12 591.49 2716.42 230.36 326.02 250.15 22.77 7.78 161.93 3.30 527.14 491.59 2810.43 486.25 392.10 352.22 14.47 6.85 85.06 1.10 502.06 846.41 隴西等（1～8）平均值7.78 502.60 261.59 314.07 10.58 13.33 66.30 7.64 346.25 837.63 宕昌（9～18）平均值4.93 463.72 144.59 270.31 6.62 54.35 189.58 11.99 345.71 800.37 武都（19～28）平均值8.87 431.14 273.21 307.83 12.32 29.31 90.89 8.06 385.29 776.34 全?。?～28）平均值7.15 463.19 223.95 296.21 9.79 33.69 119.11 9.34 360.00 802.44

V1-總黃酮 V2-總皂苷 V3-總多糖 V4-毛蕊異黃酮苷 V5-芒柄花素苷 V6-毛蕊異黃酮 V7-芒柄花素 V8-4種異黃酮總量，下圖同

表5 不區(qū)分年份的紅芪與黃芪差異比較

Table5 Differences comparison between different years of Hedysari Radix and Astragali Radix

成分總樣本(n = 112)紅芪(n = 56)黃芪(n = 56)P值 總黃酮/%0.37±0.110.34±0.120.40±0.100.004 總皂苷/%4.25±0.943.76±0.944.73±0.64＜0.001 總多糖/%6.83±2.927.79±2.805.88±2.73＜0.001 毛蕊異黃酮苷/(μg·g?1)131.60 [10.47, 508.25]10.45 [5.88, 17.12]508.50 [446.25, 564.00]＜0.001 芒柄花素苷/(μg·g?1)257.50 [218.25, 312.00]226.50 [152.25, 301.75]273.50 [252.00, 341.50]＜0.001 毛蕊異黃酮/(μg·g?1)10.65 [5.73, 27.12]6.21 [5.18, 9.37]27.95 [13.85, 58.30]＜0.001 芒柄花素/(μg·g?1)40.65 [13.53, 92.60]93.20 [71.10, 131.25]13.15 [4.16, 25.80]＜0.001 4種異黃酮總量/%613.50 [345.75, 835.50]345.50 [307.00, 403.50]839.00 [769.50, 943.75]＜0.001

取置信水平為0.01，則表中值小于0.01可以認(rèn)為有顯著差異

The confidence level is 0.01,< 0.01 can be considered as a significant difference in the table

圖4 紅芪和黃芪8個(gè)指標(biāo)可視化分析

3.4 聚類及主成分分析[21-22]

3.4.1 聚類分析 采用最常用的系統(tǒng)聚類法，最終將其聚成2類。用離差平方和法（Ward法）定義類與類之間的距離，并用歐式距離進(jìn)行計(jì)算。以總黃酮、總皂苷、總多糖、毛蕊異黃酮苷、芒柄花素苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、4種異黃酮總量、產(chǎn)地、種類、采收時(shí)間、維度、經(jīng)度、海拔高度作為統(tǒng)計(jì)變量，對(duì)1～2生紅芪和黃芪做聚類分析，結(jié)果見(jiàn)圖4。1年生紅芪和1年生黃芪、2年生紅芪和2年生黃芪、不區(qū)分年限的紅芪和黃芪在聚類分析時(shí)均聚為2類，說(shuō)明紅芪和黃芪具有不同的特征，二者品質(zhì)不同。

3.4.2 主成分分析 主成分分析是一種降維方法，將個(gè)變量進(jìn)行主成分分析，最終提?。ǎ迹﹤€(gè)主成分，每個(gè)變量對(duì)每個(gè)主成分都有貢獻(xiàn)度。

以總黃酮、總皂苷、總多糖及4種異黃酮總量作為統(tǒng)計(jì)變量，不區(qū)分年份對(duì)紅芪和黃芪進(jìn)行主成分分析。取前4個(gè)主成分，對(duì)方差的累積貢獻(xiàn)率達(dá)到90.12%。各變量對(duì)主成分的貢獻(xiàn)大小見(jiàn)表6，主成分得分（PC）及排名見(jiàn)表7、8。

編號(hào)R1-1～R1-28為1年生紅芪、Y1-1～Y1-28為1年生黃芪；R2-1～R2-28為2年生紅芪、Y2-1～Y2-28為2年生黃芪

表6 各主成分載荷及對(duì)方差的累積貢獻(xiàn)率

Table6 Cumulative loading and variance contribution rate of main components

主要成分主成分1主成分2主成分3主成分4 總黃酮?0.471?0.572?0.5580.374 總皂苷?0.577?0.1890.160?0.778 總多糖0.381?0.7840.489 4種異黃酮總量?0.5480.1450.6510.505 累積貢獻(xiàn)率/%0.5370.7620.9011.000

從表7、8對(duì)比分析紅芪和黃芪2種藥材在品種、年限、地區(qū)優(yōu)勢(shì)，得出以下結(jié)論：品種優(yōu)勢(shì)：1～2生黃芪排名在紅芪之前（1個(gè)樣品例外），說(shuō)明黃芪質(zhì)量?jī)?yōu)于紅芪。年限優(yōu)勢(shì)：2年生紅芪和黃芪相對(duì)于1年生紅芪和黃芪，排名均靠前，說(shuō)明2年生紅芪和黃芪分別優(yōu)于1年生紅芪和黃芪，即2年生藥材更佳。地區(qū)優(yōu)勢(shì)：1～2生紅芪均為武都排名在前，1～2生黃芪均為宕昌排名在前，說(shuō)明在甘肅省內(nèi)武都產(chǎn)紅芪質(zhì)量?jī)?yōu)良，宕昌縣黃芪質(zhì)量?jī)?yōu)良。

4 討論

本研究的特色之處在于，所選用的紅芪和黃芪藥材均為道地產(chǎn)區(qū)甘肅生產(chǎn)，具有代表性。在甘肅不同產(chǎn)地同一生態(tài)條件下，同時(shí)種植紅芪和黃芪，能最大程度降低生態(tài)地域因素對(duì)2種藥材主要活性成分含量影響的差異，具有可比性。

本課題組前期對(duì)甘肅1～2生紅芪和黃芪中總黃酮、總皂苷、總多糖、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、芒柄花素、芒柄花素苷進(jìn)行含量測(cè)定。研究結(jié)果表明，總黃酮、總皂苷量上，紅芪以武都產(chǎn)2年生藥材含量為最高，黃芪以宕昌產(chǎn)2年生藥材含量為最高。且同一生長(zhǎng)年限相比，紅芪藥材總黃酮總皂苷含量均低于黃芪[15-18]。二者相比，黃芪在總黃酮總皂苷含量上更具有優(yōu)勢(shì)?？偠嗵呛可?，紅芪以宕昌產(chǎn)1年生藥材含量最高，黃芪以武都產(chǎn)2年生藥材含量最高[19]。且紅芪1年生藥材總多糖含量高于黃芪2年生藥材。二者相比，紅芪1年生藥材比黃芪1～2生藥材更有優(yōu)勢(shì)。4種異黃酮含量上，從4種異黃酮總量來(lái)看，紅芪1年生藥材和2年生藥材相差不大，且以武都產(chǎn)藥材總多糖含量為最高[20]。黃芪以宕昌產(chǎn)1年生藥材含量最高。同一年限相比，紅芪中毛蕊異黃酮苷的含量低于黃芪，芒柄花素的含量高于黃芪。紅芪與黃芪在不同種類異黃酮含量對(duì)比中，各有優(yōu)勢(shì)，有顯著差異。

表7 不區(qū)分年份的紅芪和黃芪主成分排名

Table7 Rank between diferent years of Hedysari Radix and Astragali Radix

編號(hào)PC排名地區(qū)品種編號(hào)PC排名地區(qū)品種 R2-1?3.4031禮縣紅芪Y1-70.03857隴西縣黃芪 Y1-11?2.0842宕昌縣黃芪Y1-10.04058岷縣黃芪 Y2-20?1.9133武都黃芪R2-210.05659武都紅芪 Y2-9?1.7844宕昌縣黃芪R2-250.09060武都紅芪 Y2-15?1.7695宕昌縣黃芪R1-280.10761武都紅芪 Y1-15?1.5116宕昌縣黃芪Y2-50.11062隴西縣黃芪 Y2-11?1.3547宕昌縣黃芪Y2-20.11863岷縣黃芪 Y2-17?1.2578宕昌縣黃芪R1-230.16564武都紅芪 Y2-18?1.1849宕昌縣黃芪R2-120.17565宕昌縣紅芪 Y2-8?1.12710隴西縣黃芪Y1-240.18266武都黃芪 Y2-10?1.04711宕昌縣黃芪R2-200.18667武都紅芪 Y1-13?1.03012宕昌縣黃芪Y1-50.19568隴西縣黃芪 Y2-16?1.01413宕昌縣黃芪R2-150.21169宕昌縣紅芪 Y1-18?0.97514宕昌縣黃芪R2-60.23570隴西縣紅芪 Y1-14?0.91615宕昌縣黃芪R1-270.23971武都紅芪 Y2-12?0.84116宕昌縣黃芪R1-210.24972武都紅芪 Y1-10?0.82317宕昌縣黃芪R2-100.28073宕昌縣紅芪 Y2-14?0.81018宕昌縣黃芪Y1-40.30674渭源縣黃芪 R2-26?0.79119武都紅芪R2-20.31675禮縣紅芪 Y1-9?0.76520宕昌縣黃芪R2-240.35076武都紅芪 Y2-23?0.76421武都黃芪R1-190.37377武都紅芪 Y1-12?0.73122宕昌縣黃芪R1-260.39078武都紅芪 Y1-20?0.71623武都黃芪Y1-80.39179隴西縣黃芪 Y2-24?0.66624武都黃芪Y1-60.39280隴西縣黃芪 R2-19?0.66525武都紅芪R2-80.42081隴西縣紅芪 Y2-13?0.64626宕昌縣黃芪R2-180.42482宕昌縣紅芪 Y1-26?0.53627武都黃芪R2-220.43083武都紅芪 Y1-16?0.51828宕昌縣黃芪Y1-20.43284岷縣黃芪 Y2-3?0.51829定西市黃芪R2-160.43785宕昌縣紅芪 Y2-4?0.41730渭源縣黃芪R2-90.47086宕昌縣紅芪 Y1-27?0.39431武都黃芪R1-20.47987禮縣紅芪 Y1-19?0.37332武都黃芪R1-250.48188武都紅芪 Y2-26?0.36633武都黃芪R2-110.54789宕昌縣紅芪 Y1-22?0.33834武都黃芪R1-220.57290武都紅芪 Y2-7?0.32135隴西縣黃芪Y1-30.57691岷縣黃芪 Y2-25?0.32036武都黃芪R1-110.59392宕昌縣紅芪 Y2-19?0.31837武都黃芪R2-170.61593宕昌縣紅芪 Y1-23?0.31038武都黃芪R1-160.67494宕昌縣紅芪 R2-14?0.29939宕昌縣紅芪R1-150.68195宕昌縣紅芪 R1-13?0.27540宕昌縣紅芪R2-230.72996武都紅芪 R2-28?0.27341武都紅芪R1-240.81997武都紅芪 Y1-21?0.27242武都黃芪R1-200.82398武都紅芪 R2-27?0.22643武都紅芪R1-120.87999宕昌縣紅芪 Y2-21?0.21744武都黃芪R1-141.224100宕昌縣紅芪 Y2-28?0.19345武都黃芪R1-11.285101禮縣紅芪 R2-7?0.17446隴西縣紅芪R2-31.301102岷縣紅芪 Y1-17?0.15147宕昌縣黃芪R1-181.336103宕昌縣紅芪 Y2-22?0.14848武都黃芪R1-171.354104宕昌縣紅芪 Y1-25?0.10349武都黃芪R2-41.456105渭源縣紅芪 Y2-27?0.05850武都黃芪R1-41.503106渭源縣紅芪 Y2-6?0.02551隴西縣黃芪R1-61.751107隴西縣紅芪 R2-13?0.01852宕昌縣紅芪R1-71.864108隴西縣紅芪 R1-3?0.00353岷縣紅芪R1-101.947109宕昌縣紅芪 Y2-10.00754岷縣黃芪R1-82.107110隴西縣紅芪 R2-50.02455隴西縣紅芪R1-52.144111隴西縣紅芪 Y1-280.02556武都黃芪R1-92.147112宕昌縣紅芪

R1-1～R1-28-紅芪1年生1～28號(hào)樣品 R2-1～R2-28-紅芪2年生1～28號(hào)樣品 Y1-1～Y1-28-黃芪1年生1～28號(hào)樣品 Y2-1～Y2-18-黃芪2年生1～28號(hào)樣品

R1-1—R1-28: 1—28 samples of one-year-old; R2-1—R2-28: 1—28 samples of two-year-old; Y1-1—Y1-28: 1—28 samples of one-year-old; Y2-1—Y2-18: 1—28 samples of two-year-old

表8 1～2年紅芪、黃芪主成分排序?qū)Ρ冉Y(jié)果

Table8 Principal component analysis sort of 1—2 years old Hedysari Radix and Astragali Radix

紅芪1年生樣品排序地區(qū)黃芪1年生樣品排序地區(qū)紅芪2年生樣品排序號(hào)地區(qū)黃芪2年生樣品排序地區(qū) 40宕昌2宕昌1*禮縣3*武都 53岷縣6宕昌19武都4宕昌 61武都12宕昌25武都5宕昌 64武都14宕昌39宕昌7宕昌 71武都15宕昌41武都8宕昌 72武都17宕昌43武都9宕昌 77武都20宕昌46隴西10隴西 78武都22宕昌52宕昌11宕昌 87禮縣23武都55隴西13宕昌 88武都27武都59武都16宕昌 90武都28宕昌60武都18宕昌 92宕昌31武都65宕昌21武都 94宕昌32武都67武都24武都 95宕昌34武都69宕昌26宕昌 97武都38武都70隴西29定西 98武都42武都73宕昌30渭源 99宕昌47宕昌75禮縣33武都 100宕昌49武都76武都35隴西 101禮縣56武都81隴西36武都 103宕昌57隴西82宕昌37武都 104宕昌58岷縣83武都44武都 106渭源66武都85宕昌45武都 107隴西68隴西86宕昌48武都 108隴西74渭源89宕昌50武都 109宕昌79隴西93宕昌51隴西 110隴西80隴西96武都54岷縣 111隴西84岷縣102岷縣62隴西 112宕昌91岷縣105渭源63岷縣

*表示紅芪排序號(hào)在黃芪之前的樣品

*indicates the sample ofin front of

綜合含量數(shù)據(jù)差異結(jié)果可知，紅芪和黃芪具有明顯差別，除了總多糖含量提示紅芪比黃芪更具有優(yōu)勢(shì)，且紅芪以宕昌產(chǎn)最優(yōu)，黃芪以武都產(chǎn)最優(yōu)，芒柄花素含量提示紅芪比黃芪更具有優(yōu)勢(shì)外，其余含量數(shù)據(jù)均提示，黃芪比紅芪更有優(yōu)勢(shì)，且紅芪以武都產(chǎn)最優(yōu)，黃芪以宕昌產(chǎn)最優(yōu)。因此，從藥材主要活性成分含量數(shù)據(jù)直觀分析，區(qū)分紅芪和黃芪孰優(yōu)孰劣尚存在差異。該差異結(jié)果在綜合統(tǒng)計(jì)分析中達(dá)到統(tǒng)一：從統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，紅芪和黃芪在總黃酮、總皂苷、總多糖、毛蕊異黃酮苷、芒柄花素苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素含量及4種異黃酮含量總和分別對(duì)比時(shí)，均存在顯著性差異，8個(gè)變量可視化分析提示，通過(guò)對(duì)比紅芪和黃芪毛蕊異黃酮苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素含量及4種異黃酮含量總和，可以區(qū)分紅芪和黃芪。

聚類分析、主成分分析將紅芪和黃芪以含量指標(biāo)及影響質(zhì)量的因素（包括品種、產(chǎn)地、生長(zhǎng)年限、海拔高度、經(jīng)緯度等）考慮在內(nèi)進(jìn)行的綜合分析，其結(jié)果體現(xiàn)紅芪和黃芪綜合品質(zhì)情況。聚類結(jié)果表明同一生長(zhǎng)年限、不同生長(zhǎng)年限以及不區(qū)分生長(zhǎng)年限的紅芪和黃芪均可以聚成2大類，二者完全分開(kāi)，說(shuō)明紅芪、黃芪2種藥材品質(zhì)不同。主成分分析表明，黃芪質(zhì)量?jī)?yōu)于紅芪，且總體上紅芪、黃芪均體現(xiàn)2年生優(yōu)于1年生樣品。并且，宕昌產(chǎn)黃芪質(zhì)量較優(yōu)，武都產(chǎn)紅芪質(zhì)量較優(yōu)。

綜合含量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果可知，黃芪比紅芪更具有優(yōu)勢(shì)，且紅芪以武都產(chǎn)為最優(yōu)，黃芪以宕昌產(chǎn)為最優(yōu)。

[1] 中國(guó)藥典[S]. 一部. 2020: 159, 315.

[2] 余黎, 曹宜, 魏筱, 等. 黃芪與紅芪不同提取液免疫調(diào)節(jié)作用研究 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38(36): 20623.

[3] 李震宇, 崔伊凡, 秦雪梅. 中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的挑戰(zhàn)與代謝組學(xué)應(yīng)用于中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究進(jìn)展 [J]. 中草藥, 2018, 49(10): 2221-2229.

[4] 田寶林, 孫寶惠, 耿韞. 柏子養(yǎng)心丸中非正品黃芪的檢出 [J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn), 2005. 6(1): 43.

[5] 程衛(wèi)東, 李順保. 紅芪研究與開(kāi)發(fā) [M]. 甘肅: 甘肅文化出版社, 2012: 124.

[6] 馮慧敏, 李成義, 何軍剛, 等. 紅芪化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）的預(yù)測(cè)分析 [J]. 中草藥, 2021, 52(9): 2831-2842.

[7] 王藝, 張毅, 李娟, 等. 紅芪多糖、紅芪黃酮和紅芪皂苷抗博來(lái)霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化的作用 [J]. 中成藥, 2022, 44(2): 573-578.

[8] Zhang W D, Chen H, Zhang C,. Astragaloside IV fromcardioprotection during myocardial ischemiaand[J]., 2006, 72(1): 4-8.

[9] Zhang Y, Zhu H, Huang C,. Astragaloside IV exerts antiviral effects against coxsackievirus B3 by upregulating interferou-gamma [J]., 2006, 47(2): 190-195.

[10] Zhang Z G, Wu L, Wang J L,. Astragaloside IV prevents MPP (＋)-induced SH-SY5Y cell death via the inhibition of Baxmediated pathways and ROS production [J]., 2012, 364(1/2): 209-216.

[11] 劉路, 李凱, 胡陽(yáng), 等. 黃芪有效成分抗骨質(zhì)疏松癥作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2023, 54(4): 1321-1328.

[12] 藺興遙, 張毅, 李娟, 等. 黃芪黃酮與紅芪黃酮對(duì)肺間質(zhì)纖維化模型大鼠肺功能影響的對(duì)比研究 [J]. 中成藥, 2013, 35(8): 1770-1773.

[13] 劉印華, 趙志強(qiáng), 李樹(shù)義, 等. 黃芪多糖對(duì)免疫功能影響的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究 [J]. 河北醫(yī)藥, 2015, 37(4): 485-487.

[14] 牛江濤, 曹瑞, 張澤國(guó), 等. 紅芪多糖的提取分離及藥理作用研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)藥房, 2017, 28(1): 130-133.

[15] 葉迎, 包強(qiáng), 王瑞海, 等. 甘肅黃芪和紅芪總黃酮含量對(duì)比測(cè)定方法探索研究 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2016(9): 99-105.

[16] 包強(qiáng), 劉麗梅, 王瑞海, 等. 甘肅不同產(chǎn)地黃芪和紅芪藥材中總黃酮含量對(duì)比研究 [J]. 中藥材, 2016, (10): 2281-2284.

[17] 葉迎, 包強(qiáng), 王瑞海, 等. 甘肅黃芪和紅芪中總皂苷含量測(cè)定對(duì)比研究 [J]. 環(huán)球中醫(yī)藥, 2016(10): 1197-1203.

[18] 葉迎, 包強(qiáng), 王瑞海, 等. 甘肅紅芪中黃芪甲苷存在的判定以及一年生、二年生紅芪、黃芪皂苷和總黃酮含量對(duì)比[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2018, 24(14): 69-75.

[19] 王瑞海, 葉迎, 許京, 等. 甘肅紅芪和黃芪總多糖含量測(cè)定對(duì)比研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué), 2017, 22(23): 77-83.

[20] 葉迎, 王瑞海, 包強(qiáng), 等. 甘肅不同產(chǎn)地及不同生長(zhǎng)年限的紅芪和黃芪中4種異黃酮類成分的含量對(duì)比 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2018, 24(8): 1-7.

[21] 柳小亞, 李繼平, 陳心悅, 等. HPLC同時(shí)測(cè)定紅芪中8個(gè)活性成分的含量及聚類分析 [J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 51(5): 786-791.

[22] 張淑娟. 基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物的炙黃芪和炙紅芪質(zhì)量控制研究[D]. 蘭州: 甘肅中醫(yī)藥大學(xué), 2021.

Comparative study on statistical differences of saponins, polysaccharides and flavonoids contents of Gansu 1—2 years oldand

YE Ying1, WANG Rui-hai1, MIAO Qing1, XU Jing1, WU Dong-yuan2, LIU Li-mei1

1. Institute of Basic Theory Research of TCM, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China 2. College of Science, Minzu University of China, Beijing 100081, China

To analyze the contents of total saponins, total polysaccharides and flavonoids of 1—2 years old Hongqi (,) and Huangqi (,var.or) from different areas in Gansu Province, and explore the differences betweenand.Using R3.3.2 software, and eight content including total saponins, total flavonoids, total polysaccharides, calycosin-7-glucoside, calycosin, ononin, formononetin, sum of four isoflavones were selected as indicators, and six factors affecting the quality of including origin, varieties, harvest time, latitude, longitude, altitude were selected as variable. Based on the correlation analysis, cluster analysis and principal component analysis (PCA), the difference of quality between 1—2years oldandwas compared.The results of cluster analysis showed thatandwere clustered into two categories, with a big difference of the quality between them. The results of PCA showed that the quality ofwas better than that of. In general, the quality of two-year-oldandwere better than one year old. And the quality ofin Dangchang was better, and the quality ofin Wudu was superior.There is a significant difference in the quality ofandin Gansu, and it is not suitable for alternative use from the perpective of quality analysis.

;; calycosin-7-glucoside; calycosin; ononin; formononetin; cluster analysis

R286.12

A

0253 - 2670(2023)14 - 4649 - 13

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.14.026

2022-11-03

葉迎，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幹苿┓治?。E-mail: 1011153962@qq.com

劉麗梅（1965—），研究員，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: (010)64089006 E-mail: liulimeihrb@sina.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]