雞胚模型在研究中的應(yīng)用

李希尤　黃蓉萍　顧笑遠(yuǎn)　韓紹聰　王葳　李維熙

摘 要：雞胚模型是研究早期胚胎發(fā)育、毒理學(xué)、藥理學(xué)以及免疫學(xué)的常用模型。與傳統(tǒng)動(dòng)物模型比較，雞胚在母體外發(fā)育易于操作、成本低，可以同時(shí)獲得大量實(shí)驗(yàn)所需樣本。此外，雞胚在孵育過(guò)程中隨孵育時(shí)間發(fā)生的組織形態(tài)變化及血管分布情況可用照明燈直接觀察。本文對(duì)雞胚模型的主要應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行了總結(jié)闡述，旨在為拓展該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膽?yīng)用提供有益的參考。

關(guān)鍵詞：雞胚模型；神經(jīng)管畸形；心臟畸形；表觀遺傳學(xué)；免疫學(xué)

中圖分類號(hào)：Q95-33? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-1085（2023）07-0058-12

動(dòng)物模型是模仿人類疾病來(lái)探究發(fā)病機(jī)制、藥物篩選、毒性評(píng)價(jià)以及研究生物發(fā)育的重要手段。目前，常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有以嚙齒類動(dòng)物為主的哺乳動(dòng)物、斑馬魚(yú)、線蟲(chóng)以及雞胚等。其中，雞胚通常指受精種蛋從孵化第一天至雛雞破殼前的階段，是體內(nèi)研究的常用模型。雞胚的應(yīng)用有悠久的歷史，早在上千年前，人們就利用雞胚來(lái)觀察胚胎發(fā)育過(guò)程。雞胚的發(fā)育過(guò)程與人類相似，且在孵育期間可以通過(guò)觀察不同時(shí)間段的雞胚形態(tài)來(lái)掌握雞胚的發(fā)育信息。與其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相比，雞胚具有來(lái)源廣、樣本量大、孵育可控、周期短、操作簡(jiǎn)便、胚胎發(fā)育狀況易于觀察且不受倫理學(xué)問(wèn)題限制等優(yōu)勢(shì)。雞胚模型與其他模式動(dòng)物的特點(diǎn)見(jiàn)表1。目前，雞胚模型已被廣泛用于藥理毒理評(píng)價(jià)、表觀遺傳學(xué)、發(fā)育生物學(xué)以及疾病機(jī)制研究等重要領(lǐng)域（表2）。本文綜述了雞胚模型在疾病研究、藥物作用等研究領(lǐng)域中的應(yīng)用現(xiàn)狀，為拓展雞胚模型的研究和應(yīng)用提供參考。

1 雞胚的培養(yǎng)及給藥方式

雞胚模型的培養(yǎng)方式有無(wú)殼培養(yǎng)和蛋殼內(nèi)培養(yǎng)兩種模式。與蛋殼內(nèi)培養(yǎng)相比，無(wú)殼培養(yǎng)的雞胚更容易觀察。Tahara等[16]用聚甲基戊烯薄膜作為培養(yǎng)容器，通過(guò)補(bǔ)充乳酸鈣和蒸餾水，90%以上的胚胎能存活到第17天，建立了一種簡(jiǎn)單、孵化率高的雞胚培養(yǎng)方法。但杜金娥等[17]對(duì)雞胚無(wú)殼孵化的存活率進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)雞胚死亡率從第1天到第8天逐漸升高，孵育至第18天時(shí)雞胚的死亡率接近100%，其中第10天雞胚死亡率最高。這可能是因?yàn)槊摰皻づ囵B(yǎng)的雞胚失去了蛋殼的保護(hù)，極易被外界微生物侵入，污染早期胚胎，導(dǎo)致胚胎死亡，因此脫蛋殼方式不適合長(zhǎng)期培養(yǎng)。而蛋殼內(nèi)培養(yǎng)使雞胚在理想的生理環(huán)境中發(fā)育，具有較高的生存能力。因此，蛋殼內(nèi)培養(yǎng)仍然是雞胚模型培養(yǎng)的主要模式。雞胚常見(jiàn)給藥方式有氣室注射、卵黃注射、卵清注射和胚胎暴露四種方式。氣室注射法給藥時(shí)，先將新鮮受精蛋置16 ℃保存，待出現(xiàn)明顯氣室，在無(wú)菌環(huán)境下用鑷子和剪刀在氣室端開(kāi)一個(gè)約1 cm小孔，用微量進(jìn)樣器向氣室注入藥液[18]；卵黃注射法、卵清注射法和胚胎暴露法的操作比較類似，在蛋殼開(kāi)孔后用微量進(jìn)樣器分別向雞胚下方的卵黃、卵清或胚胎注入藥液[19-22]。最后再用封口膜將蛋殼開(kāi)孔封閉，然后將受精蛋置于溫度為37 ℃，濕度為70%的孵化器中孵育。

2 雞胚模型的應(yīng)用現(xiàn)狀

2.1 雞胚模型在研究神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育畸形方面的應(yīng)用

神經(jīng)系統(tǒng)包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central nervous system，CNS）、周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)和自主神經(jīng)系統(tǒng)。

神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程包括細(xì)胞增殖、遷移、分化及軸通路的建立和突觸聯(lián)系，進(jìn)而產(chǎn)生生理功能[23]。其中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育包括神經(jīng)管的形成、前腦發(fā)育、神經(jīng)母細(xì)胞增殖和遷移、皮質(zhì)組織和髓鞘形成[24]。在受孕后第28天左右，胚胎由于神經(jīng)發(fā)育不全及神經(jīng)組織形態(tài)發(fā)生改變而容易出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺陷[25]。臨床研究表明，每10 000例新生兒中約有14例出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形，若包括遲發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常，真實(shí)發(fā)病率可能高達(dá)1%[26]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形是最常見(jiàn)的胎兒畸形之一，常見(jiàn)無(wú)腦兒、腦室擴(kuò)張、小頭畸形、Dandy-Walker畸形、脊柱裂等癥狀。其中99%的畸形形成于胚胎期（孕3～8周），75%CNS畸形兒死于胎兒期（圍產(chǎn)期），活產(chǎn)兒發(fā)生率約0.1%～0.2%，僅次于心臟畸形[27]。自發(fā)性流產(chǎn)的病例中，其中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形發(fā)生率約3%～6%，約1/3全身畸形病例伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形中，由胚胎發(fā)育過(guò)程中神經(jīng)管閉合失敗引起的神經(jīng)管缺陷（Neural Tube Defects，NTD）是最常見(jiàn)且最嚴(yán)重的先天性缺陷，發(fā)病率為6/10 000，影響0.5%～2%的妊娠[28]。胎兒NTD主要表現(xiàn)為無(wú)腦畸形、腦膨出、腦脊髓膜膨出、脊柱裂/隱性脊柱裂等，其中，又以脊柱裂為最常見(jiàn)的類型。NTD對(duì)胎兒將來(lái)生長(zhǎng)發(fā)育和肢體運(yùn)動(dòng)功能會(huì)造成明顯的影響。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形的病因中，單基因遺傳病約占7.5%，染色體異常（13號(hào)染色體的ZIC2基因相同位點(diǎn)突變[29]）約6%，環(huán)境因素（如母親感染、糖尿病、藥物、葉酸缺乏、放射線等）約占3.5%，遺傳（包括基因突變、特異性遺傳和染色體畸形）和環(huán)境相互作用占20%，不明原因占60%。

雞胚模型是研究神經(jīng)發(fā)育的重要?jiǎng)游锬Ｐ?，在發(fā)育早期，特別是最初的48 h，與人類胚胎第一個(gè)月的脊椎發(fā)育相似[30]。而且在早期發(fā)育階段，小雞胚胎平面化，更容易觀察體細(xì)胞形態(tài)和分化。因此，雞胚模型常被用于研究神經(jīng)管畸形的毒性和保護(hù)作用，是研究早期神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育階段的主要模式動(dòng)物之一。

妊娠期糖尿?。℅estational diabetes mellitus，GDM）是造成胎兒NTD最常見(jiàn)的疾病原因之一。研究表明，妊娠早期糖尿病可通過(guò)干擾蛋白質(zhì)活性、引起細(xì)胞應(yīng)激和增加神經(jīng)形成所需組織中的程序性細(xì)胞死亡（凋亡）而導(dǎo)致胚胎神經(jīng)管缺陷。目前，在GDM致神經(jīng)管畸形的研究模型中使用較多且成熟的為糖尿病妊娠小鼠模式。糖尿病妊娠小鼠通常用鏈脲佐菌素造成母鼠糖尿病，再合籠交配，該方法存在實(shí)驗(yàn)所需時(shí)間長(zhǎng)、造模死亡率高、妊娠率不穩(wěn)定等問(wèn)題。譚蕊蓉等[31]在第一胎齡日（EDD1）給予雞胚0.4 mmol/蛋的葡萄糖，發(fā)現(xiàn)高糖導(dǎo)致雞胚出現(xiàn)無(wú)腦、小腦或腦膨出等不同程度的NTD，表明成功建立了妊娠糖尿病雞胚NTD模型。關(guān)于高糖誘導(dǎo)胚胎NTD的內(nèi)在機(jī)制，Tan等[32]認(rèn)為高糖使雞胚血漿和腦組織葡萄糖含量升高，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（Glucose transporter1，GLUT1）的表達(dá)下調(diào)，神經(jīng)管發(fā)育關(guān)鍵基因配對(duì)盒基因3（Pax3）蛋白的O-糖基化（O-Glycosylation，O-GlcNAc）修飾異常增加，抑制Pax3的轉(zhuǎn)錄功能，阻礙下游因子正常表達(dá)，最后導(dǎo)致胚胎神經(jīng)管閉合失敗。而在EDD0給予不同劑量?jī)?nèi)源性小分子活性肽肌肽（0.1、0.5、1、5、10 nmol/蛋）均可有效降低高糖導(dǎo)致的胚胎死亡率、NTD發(fā)生率以及發(fā)育遲緩；而常用防治NTD藥物葉酸僅在5 nmol/蛋的劑量時(shí)可降低胚胎的死亡率、發(fā)育遲緩及NTD率，且效果明顯不及肌肽。類似地，Yan等[33]用高糖雞胚模型評(píng)價(jià)了玉米肽（Leu-Pro-Phe，LPF）在高糖條件下對(duì)胚胎NTD的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)LPF可降低暴露于高糖條件下雞胚的NTD發(fā)生率，減輕高糖條件下細(xì)胞蛋白質(zhì)的總O-GlcNAc修飾化，恢復(fù)Pax3蛋白水平，再次證實(shí)妊娠高血糖誘導(dǎo)胚胎NTD可能與胚胎中己糖胺生物合成途徑及蛋白質(zhì)異常O-GlcNAc修飾有關(guān)。己糖胺生物合成途徑可能是防治GDM后代神經(jīng)管畸形的重要靶點(diǎn)，天然小分子活性肽對(duì)GDM子代NTD的發(fā)生有一定的干預(yù)作用。

除了母體疾病，化學(xué)物質(zhì)和物理環(huán)境對(duì)胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育也會(huì)造成不同程度的影響。利用雞胚模型，人們對(duì)多種化學(xué)和物理致畸因素進(jìn)行了評(píng)價(jià)。鹽酸哌替啶是臨床常用的中樞性止疼藥，Rak?p等[34]給予EDD2的雞胚1、2.5、5、7.5 mg/kg 四個(gè)不同劑量的鹽酸哌替啶，每組15個(gè)雞蛋，持續(xù)孵育至48 h取出。結(jié)果表明1 mg/kg劑量的鹽酸哌替啶即可導(dǎo)致EDD2雞胚的神經(jīng)管閉合缺陷，且呈劑量依賴性。雙酚A（Bisphenol A，BPA）是合成聚碳酸酯和環(huán)氧樹(shù)脂的常用原料，曾廣泛用于水瓶、嬰幼兒奶瓶、水杯以及食品和奶粉罐涂層。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，BPA具有類激素性質(zhì)以及致癌作用，大多數(shù)國(guó)家已禁止用于制造嬰幼兒奶瓶。利用雞胚模型，Atay等[35]評(píng)價(jià)了BPA對(duì)胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響。在孵育28 h時(shí)，給予雞胚1 ?M/蛋和10 ?M/蛋的BPA，孵育至48 h，結(jié)果表明20 pmol/蛋的雙酚A 能延遲中線閉合，對(duì)早期雞胚的神經(jīng)管發(fā)育產(chǎn)生不利影響。Ge等[36]探究了亞砷酸鈉（Sodium arsenite，SA）致雞胚NTD的作用及機(jī)制，并評(píng)價(jià)了膽堿（Choline，CHO）的改善效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，在Hamburger–Hamilton（HH）6階段給予100 nM SA并孵育72 h會(huì)使雞胚出現(xiàn)NTD，在HH6、8、12時(shí)給予25 ?g/mL CHO，結(jié)果表明給予SA導(dǎo)致胚胎存活率、胚胎體重和胚胎外血管面積的減少，同時(shí)伴隨著神經(jīng)管尾端閉合失敗的發(fā)生率顯著增加，而CHO對(duì)SA誘導(dǎo)的雞胚NTD具有保護(hù)作用：CHO在低劑量（25μg/μL）時(shí)逆轉(zhuǎn)了SA誘導(dǎo)的胚胎存活率下降和神經(jīng)管尾端閉合失敗的增加。此外，CHO不僅通過(guò)上調(diào)Bcl-2水平抑制SA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，而且通過(guò)增加DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1和DNMT3a的表達(dá)抑制DNA整體甲基化。Zhong等[37]還發(fā)現(xiàn)砷會(huì)導(dǎo)致雞胚細(xì)胞內(nèi)氧化物質(zhì)的增加及超氧化物歧化酶的活性降低。因此，SA致NTD的機(jī)制可能與擾亂甲基代謝及誘發(fā)氧化應(yīng)激有關(guān)。岡田酸（Okadaic acid，OA）是腹瀉性貝類毒素（Diarrheal shellfish poision，DSP）的主要成分，由海洋中渦鞭毛植物合成，通過(guò)貝類向人類傳遞。OA是海洋中分布最廣，致病率最高的毒素，但對(duì)其致畸作用的研究還較少。通過(guò)向孵育18 h的雞胚中給予100 ?L不同濃度的OA（20、50、100、200和500 nM），在EDD4.5的雞胚中觀察到包括顱骨異常、軀干異常等NTD，當(dāng)胚胎暴露于200 nM或500 nM的OA時(shí)胚胎死亡率最高約85%，而20 nM或50 nM的OA治療的死亡率約為30%，當(dāng)胚胎暴露于100 nM的OA時(shí)，頭部和軀干異常率約為40%。其機(jī)制可能是OA導(dǎo)致早期雞胚的氧化應(yīng)激，進(jìn)而引發(fā)NTD的發(fā)生并抑制神經(jīng)元的分化[38]。咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，具有中樞興奮活性，不僅是藥品，也是廣泛應(yīng)用的食品添加劑。覃楊[39]給予EDD1.5的雞胚0.5、1.0、1.5 mg三個(gè)不同劑量的咖啡因（氣室注射），繼續(xù)孵育36 h取胚。卡紅染色結(jié)果顯示，咖啡因組雞胚均出現(xiàn)神經(jīng)管閉合缺陷，且可見(jiàn)組織結(jié)構(gòu)變形，細(xì)胞排列不規(guī)則等現(xiàn)象；免疫組化結(jié)果顯示0.5 mg咖啡因可致雞胚神經(jīng)發(fā)育缺陷，且更高劑量還影響神經(jīng)嵴細(xì)胞的分布與遷移，1.0 mg咖啡因可致神經(jīng)嵴細(xì)胞分布不均，1.5 mg咖啡因可抑制神經(jīng)嵴細(xì)胞的遷移。此外，有害金屬鎘也會(huì)透過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胚胎并危害早期神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育。朱士勇[22]向孵育至HH4階段的受精蛋卵黃中分別注射5、10、50 ?M醋酸鎘溶液，繼續(xù)孵育至HH12取出。結(jié)果表明雞胚死亡率和畸形率均與鎘濃度呈劑量依賴性，5 ?M和10 ?M組的雞胚神經(jīng)管閉合完整，50 ?M組的雞胚明顯出現(xiàn)神經(jīng)管畸形（神經(jīng)管背側(cè)部分未閉合）。眾所周知，長(zhǎng)效尼古丁幾乎對(duì)所有組織都有病理影響，包括小腦皮質(zhì)。Abd等[40]研究了尼古丁對(duì)孵化期雞胚小腦皮質(zhì)發(fā)育的影響，結(jié)果表明在孵化期內(nèi)，尼古丁對(duì)雞胚小腦皮質(zhì)的組織形成有明顯影響。在孵化第8天，尼古丁對(duì)小腦突起的分化有延遲作用，尤其是外顆粒層和內(nèi)皮質(zhì)層；在孵化第12天，小腦的葉狀結(jié)構(gòu)不規(guī)則，浦肯野細(xì)胞未被識(shí)別；在孵育第16天，小腦葉變得不規(guī)則，小腦皮質(zhì)中斷，浦肯野細(xì)胞排列不規(guī)則。

除上述化學(xué)因素外，物理因素也是常見(jiàn)的致畸因素。Kantarcioglu等[41]先將新鮮受精蛋孵育24 h后，再將雞胚胎暴露在不同的磁場(chǎng)（1-T、1.5-T、3-T）中10 min，繼續(xù)再孵育48 h后在體視鏡下觀察胚胎形狀，結(jié)果顯示與未暴露于磁場(chǎng)的胚胎相比暴露于磁場(chǎng)的胚胎的神經(jīng)管閉合缺陷和生長(zhǎng)遲緩的發(fā)生率高，但1.5-T組的缺陷率高于3-T組。目前對(duì)神經(jīng)管畸形的研究，大部分還不夠深入，致畸機(jī)制尚不清楚。因此，后續(xù)需要開(kāi)展更多的動(dòng)物試驗(yàn)和大規(guī)模的前瞻性臨床研究來(lái)進(jìn)一步深入探索。

2.2 雞胚在心血管疾病研究中的應(yīng)用

心血管疾病（Cardiovascular disease，CVD）是心臟、血管和大腦血管系統(tǒng)疾病的統(tǒng)稱，包括心臟和腦部的全身性血管病變或系統(tǒng)性血管病變，CVD導(dǎo)致的死亡占全球死亡人數(shù)的近三分之一[42] 。除了遺傳和不良生活方式，CVD的發(fā)病還與胚胎期的發(fā)育情況有關(guān)[43]。雞胚是心血管發(fā)育的常用研究手段。雞胚心臟形成的關(guān)鍵點(diǎn)為EDD2、4.5和14。在EDD2，即HH10階段，雞胚融合形成原始的C形心管；在EDD4.5時(shí)心臟循環(huán)過(guò)程完成，發(fā)育形成四腔心；至EDD14時(shí)，心室壁的擴(kuò)張和生長(zhǎng)結(jié)束，形成成熟的心臟。

臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究均已證實(shí)慢性胎兒宮內(nèi)缺氧可引發(fā)胎兒心臟功能障礙，增加晚年患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)[44-45]。Itani等[46]采用缺氧條件下孵育的雞胚模擬胎兒宮內(nèi)缺氧，在常氧（21% O2）或缺氧（14%±0.5% O2）條件下，孵育至EDD18。結(jié)果顯示，與常氧胚胎比較，缺氧胚胎的血細(xì)胞比容及體重均減少，胚胎心臟3-硝基酪氨酸（3-Nitrotryrosine，3-NT）和4-羥基壬烯醛（4-hydroxynonenylaldehyde，4-HNE）的水平上升，超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活性顯著受損，心臟處于明顯的氧化應(yīng)激狀態(tài)。自EDD13給予1 mg/kg褪黑素，可降低缺氧雞胚心臟3-NT和4-HNE水平并恢復(fù)心臟的NOx水平，提高心臟過(guò)氧化氫酶活性，但不影響心臟超氧化物歧化酶表達(dá)，提示褪黑素可明顯減少雞胚的氧化應(yīng)激，提高內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)水平和恢復(fù)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial cell growth factor，VEGF）表達(dá)以及NO生物利用度，進(jìn)而緩解了雞胚心臟的收縮和舒張能力以及外周循環(huán)中的內(nèi)皮功能障礙。為研究GDM引起的高血糖與胚胎血管發(fā)育之間的關(guān)系，Jin等[47]用雞胚卵黃囊膜（Yolk sac membrane，YSM）和雞胚絨毛尿囊膜（Chorioallantoic membrane，CAM）研究了高糖對(duì)雞胚血管生成的影響。具體實(shí)驗(yàn)方法為：將38 ℃和70%濕度下孵育2.5 d的受精蛋的蛋殼去除，內(nèi)容物放進(jìn)一個(gè)無(wú)菌玻璃器皿中，上面覆蓋一個(gè)水晶盤(pán)繼續(xù)孵育1h以使胚胎適應(yīng)其新環(huán)境。然后將胚胎定位在中心，把硅環(huán)放置YSM的前緣上，向含有胚胎的皿中加入50 ?L甘露醇（對(duì)照）或葡萄糖（25、50、100 mM）。在孵育12、24、36、48 h后分別測(cè)定并拍攝血管生成的圖像。由于高糖導(dǎo)致的滲透壓變化，使得胚胎血管叢的生長(zhǎng)和擴(kuò)展在高糖作用下受到阻礙，血管叢的密度與葡萄糖濃度呈負(fù)相關(guān)。Wang等[48]在雞胚HH3階段時(shí)給予雞胚50 mM葡萄糖，孵育到HH11階段時(shí)，高糖環(huán)境孵育中的雞胚表現(xiàn)出3種類型的心臟畸形：心室肥厚，右心室肥厚 ，心臟管的融合異常。Tan等[49]發(fā)現(xiàn)在EDD0給予胚胎葡萄糖，胚胎發(fā)育遲緩，卵黃囊血管發(fā)育會(huì)受損，給予抗氧化劑白藜蘆醇預(yù)保護(hù)，可降低雞胚死亡率，緩解發(fā)育遲緩及血管損傷。

除缺氧及高糖環(huán)境對(duì)胚胎心血管發(fā)育不利外，高鹽和農(nóng)藥等也是影響心臟發(fā)育的常見(jiàn)因素。利用雞胚模型，人們證實(shí)了高鹽對(duì)胚胎心血管發(fā)育有致畸作用。Wang等[50]向孵育36 h的受精雞蛋，分別給予500 ?L的0.7% NaCl（蛋的最終滲透壓為240 mosm/L，對(duì)照組）、16.85% NaCl（蛋的最終滲透壓為300 mosm/L）和維生素C（0.5 mg/蛋），繼續(xù)孵育72 h取出雞胚。試驗(yàn)結(jié)果表明，高鹽組胚胎死亡率為67%，并出現(xiàn)異常心管循環(huán)和心腔充血兩種異常的心臟發(fā)育表型，細(xì)胞周期蛋白D1及G1期其他蛋白表達(dá)上調(diào)，心肌細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖和凋亡，導(dǎo)致心肌肥大。與正常雞胚的YSM中相同位置的血管叢比較，高鹽雞胚的血管叢密度降低，說(shuō)明高鹽抑制YSM中的血管生成。此外，高鹽過(guò)量導(dǎo)致ROS生成可能干擾心臟發(fā)育相關(guān)基因特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子（Nkx2.5）和人心肌轉(zhuǎn)錄因子4（GATA4）以及血管生成基因缺氧誘導(dǎo)因子（HIF2）和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF2）的表達(dá)。

吡蟲(chóng)啉是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛使用的殺蟲(chóng)劑，人群易于直接或間接接觸。Gao等[51] 向EDD0的受精種蛋注入500 μM（127.8 mg/L）吡蟲(chóng)啉，到HH4階段再次注射吡蟲(chóng)啉，然后繼續(xù)孵育至EDD4.5和EDD14。與對(duì)照組相比，給予吡蟲(chóng)啉后，無(wú)論是EDD4.5還是EDD14的胚胎，心室壁的厚度和小梁肌均減少，心臟更小且重量更低。同時(shí)發(fā)現(xiàn)吡蟲(chóng)啉處理21 h的胚胎比對(duì)照組雞胚生長(zhǎng)的快，但至給藥48 h，發(fā)育較正常雞胚稍有延遲。結(jié)果表明吡蟲(chóng)啉影響了胚胎心臟血管形成過(guò)程中的細(xì)胞遷移和細(xì)胞分化。綜上，目前雞胚模型越來(lái)越被廣泛用于心血管疾病的研究，但大多數(shù)研究并未深入探討其作用機(jī)制。

2.3 雞胚在表觀遺傳學(xué)研究中的應(yīng)用

表觀遺傳學(xué)指研究由潛在DNA序列改變以外的機(jī)制引起的基因表達(dá)或細(xì)胞表型的變化，基因表達(dá)的表觀遺傳調(diào)控是通過(guò)外部環(huán)境與核酸編碼信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯相互作用實(shí)現(xiàn)的。常見(jiàn)的表觀修飾有：甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化等。溫度、營(yíng)養(yǎng)、衛(wèi)生條件、壓力等各種外部因素均會(huì)導(dǎo)致表觀遺傳變化，可能會(huì)影響個(gè)體的表型特征[10]。由于雞胚在母體外發(fā)育，在體內(nèi)和體外都較容易操作，而且可以嚴(yán)格控制孵化溫度和濕度等環(huán)境因素，使個(gè)體間的環(huán)境變異性實(shí)現(xiàn)最小化[52]。因此，雞胚模型是進(jìn)行表觀遺傳學(xué)研究的常用模型。

班謙等[53]檢測(cè)了家雞雞胚在發(fā)育3、7、12、15日齡時(shí)的DNA甲基化水平，提取基因組DNA并采用甲基敏感擴(kuò)增片段多態(tài)性（Methylation sensitive amplified polymorphism， MSAP）技術(shù)對(duì)其甲基化水平進(jìn)行了初步檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在880個(gè)CCGG位點(diǎn)中，單鏈外側(cè)的胞嘧啶甲基化位點(diǎn)比例為20.48%，雙鏈CCGG位點(diǎn)的內(nèi)側(cè)胞嘧啶甲基化為19.30％，兩者總比例為39.78%，說(shuō)明雞胚發(fā)育過(guò)程中DNA甲基化水平呈升高趨勢(shì)，即DNA甲基化基因組印記等表觀遺傳現(xiàn)象在胚胎發(fā)育中都有著相應(yīng)的體現(xiàn)。同時(shí)，該研究還表明當(dāng)減少3倍的甲基胞嘧啶，在胚胎干細(xì)胞的增殖或生命力中沒(méi)有出現(xiàn)可檢測(cè)的影響；但減少相同量的胚胎DNA甲基化則會(huì)導(dǎo)致異常的生長(zhǎng)發(fā)育和胚胎的致死現(xiàn)象。因此證明了這種甲基化水平遞升的結(jié)果和表觀遺傳觀點(diǎn)是符合的。李世召[54]以維生素C為營(yíng)養(yǎng)素，以雞胚給養(yǎng)為手段，在獲取雞胚DNA甲基化模式的基礎(chǔ)上，在胚胎EDD2～4、EDD5～13、EDD14～19不同時(shí)間給予維生素C，初步探究了胚胎期補(bǔ)充維生素C調(diào)控肉雞生長(zhǎng)和免疫的機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胚胎發(fā)育后期肝臟的DNA甲基化水平顯著高于心臟和肌肉。在胚胎期第11天和第15天給予3 mg維生素C能提高種蛋的孵化率并在一定程度上改善了肉雞的生產(chǎn)性能、抗氧化能力、免疫功能和腸道形態(tài)均有所提升。免疫功能的提高可能與DNA甲基化和組蛋白乙?；降奶岣哂嘘P(guān)。還有研究將不同胚胎發(fā)育點(diǎn)（EDD7、EDD11、EDD17）雞胚的肌肉組織全基因組DNA甲基化圖譜和轉(zhuǎn)錄本分別用于全基因組亞硫酸鹽測(cè)序（WGBS）和RNA測(cè)序，發(fā)現(xiàn)差異甲基化基因（Differential methylation gene，DMGs）與胚胎肌肉器官發(fā)育、骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖調(diào)控和肌動(dòng)蛋白細(xì)絲解聚顯著相關(guān)。胚胎發(fā)育中的重要轉(zhuǎn)錄因子TBX1、MEF2D、SpeG、CFL2和TWF2與甲基化引起的表達(dá)轉(zhuǎn)換密切相關(guān)[55]。Li等[56]通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)了雞胚發(fā)生過(guò)程中基因組DNA甲基化的變化，用亞硫酸氫鹽測(cè)序聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法鑒定兩個(gè)特定基因（IGF2和腫瘤壞死因子-α）所涉及的啟動(dòng)子和基因體的甲基化程度及檢測(cè)了IGF2、腫瘤壞死因子-α和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1、3a和3b的表達(dá)水平。結(jié)果表明，胚胎發(fā)育過(guò)程中肝臟、心臟和肌肉的基因組DNA甲基化水平顯著升高，肝臟的甲基化水平在胚胎發(fā)育中后期顯著升高。在肌肉和肝臟中，腫瘤壞死因子-α的啟動(dòng)子甲基化水平先升高后降低，而基因體甲基化水平在胚胎EDD8、EDD11和EDD14時(shí)保持較低水平，在EDD17時(shí)顯著升高。IGF2啟動(dòng)子甲基化水平持續(xù)下降，而基因體甲基化水平持續(xù)上升。腫瘤壞死因子-α的表達(dá)在胎齡EDD8、EDD11和EDD14三個(gè)胎齡間無(wú)明顯差異，但在EDD17有顯著升高。IGF2的表達(dá)水平在受檢的胚胎階段呈上升趨勢(shì)。盡管人類與雞胚組織間存在一定的差異，但是已經(jīng)有許多研究確證了表觀遺傳修飾水平的改變對(duì)發(fā)育相關(guān)基因的調(diào)控是廣泛存在的[57-58]。

2.4? ?雞胚模型在免疫學(xué)及抗病毒、微生物感染研究中的應(yīng)用

免疫系統(tǒng)失調(diào)與許多疾病有關(guān)，包括心血管疾病、糖尿病和癌癥等，與其他經(jīng)典模型相比，雞胚胎及其絨毛尿囊膜具有成本低、省時(shí)、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。在雞胚發(fā)育過(guò)程中，首先發(fā)育的淋巴器官是胸腺，胸腺原基首先出現(xiàn)在EDD3，在EDD10～11時(shí)可以檢測(cè)到T細(xì)胞，B細(xì)胞可以在EDD11～12檢測(cè)到，器官在EDD12時(shí)完全發(fā)育，免疫球蛋白基因僅在卵黃囊中約EDD10時(shí)可以檢測(cè)到[12]。因此，雞胚模型用于免疫學(xué)研究時(shí)至少在胚胎發(fā)育10d后才能檢測(cè)。最近的一項(xiàng)研究表明，雞脾臟中的幾個(gè)不同巨噬細(xì)胞亞群可能在抗原提呈和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[59]。除了免疫學(xué)研究外，Khan等[60]用雞胚模型評(píng)估黃芪根水提取物和甲醇提取物對(duì)禽流感H9病毒的抗病毒活性，將不同濃度（400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.12 ?g/mL）的黃芪根水和甲醇提取物與標(biāo)準(zhǔn)病毒接種劑混合，并在37 ℃下孵育30 min，再將其注入雞胚。在接種72 h后收集絨毛尿囊液，用血凝試驗(yàn)評(píng)估病毒的生長(zhǎng)。結(jié)果表明，黃芪根水提物和甲醇提取物均具有一定的抗病毒活性。Quereda等[61]在尿囊腔感染的雞胚中評(píng)估了流行譜系I單增李斯特菌菌株的磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C、廣泛磷脂酶C、李斯特菌溶血素O和李斯特菌溶血素S這四種外毒素的毒力影響，先將受精蛋孵育9 d，再接種100 μL細(xì)菌懸浮液，繼續(xù)孵育48 h。結(jié)果表明磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C在單增李斯特菌的感染生命周期中可能發(fā)揮著重要作用?？傊u胚模型已經(jīng)為我們理解免疫學(xué)做出了有價(jià)值的貢獻(xiàn)，是公認(rèn)的研究免疫的極佳模型[62]。

2.5 雞胚在發(fā)育毒理學(xué)研究中的應(yīng)用

由于雞胚生長(zhǎng)快速，且不受母體代謝影響，因而雞胚在用于毒性發(fā)育研究的動(dòng)物模型中占有特殊地位，為研究發(fā)生在早期階段的藥物或其他物質(zhì)對(duì)器官發(fā)育、體重和氧化應(yīng)激的毒性作用提供了敏感模型。除前述用于評(píng)價(jià)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)發(fā)育的影響外，雞胚也廣泛應(yīng)用于其它器官的毒理學(xué)研究，Nguyen等[63]利用雞胚模型評(píng)價(jià)叔丁基苯基磷酸鹽和異丙基苯基磷酸鹽對(duì)不同發(fā)育階段雞胚的發(fā)育毒性及肝臟基因表達(dá)的影響，結(jié)果表明兩種化合物在肝臟基因表達(dá)上有顯著差異，最顯著的轉(zhuǎn)錄組效應(yīng)發(fā)生在孵化中期，與外源代謝、膽汁酸/膽固醇調(diào)節(jié)和氧化應(yīng)激相關(guān)的基因明顯失調(diào)。Samak等[15]詳細(xì)評(píng)估了在雞胚模型中胚胎開(kāi)始發(fā)育時(shí)給予各種類型的炭黑納米材料的毒性。現(xiàn)在，雞胚絨毛尿囊膜（CAM）試驗(yàn)已是評(píng)估納米毒性和納米顆粒在體內(nèi)累積分布的一種常規(guī)試驗(yàn)[64]。綜上所述，這些研究及發(fā)現(xiàn)可能為未來(lái)發(fā)育毒理學(xué)在雞胚模型上的應(yīng)用提供有益的參照并使創(chuàng)新納米療法的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法合格。

2.6? ?雞胚在其他研究中的應(yīng)用

雞胚在病毒學(xué)、免疫學(xué)、毒理學(xué)和胚胎學(xué)等多個(gè)研究領(lǐng)域已被用作替代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，除以上研究領(lǐng)域外，還可以作為藥效和療法評(píng)價(jià)的體內(nèi)模型。向攜帶腫瘤的15日齡雞胚中給予依他硝唑和X射線照射3 d，發(fā)現(xiàn)8GyX射線照射和1.0 mg依他硝唑的聯(lián)合治療能顯著抑制35%的腫瘤生長(zhǎng)，成功評(píng)價(jià)了依他硝唑的體內(nèi)放射增敏活性[65]。該研究表明使用攜帶腫瘤的雞胚模型可能是評(píng)估放射增敏活性的一種有前途的一部分。目前，雞胚廣泛應(yīng)用于多種癌癥的研究，包括胰腺癌[66]、腎細(xì)胞癌[67]、婦科癌癥和尿路上皮癌[68]。由于雞胚來(lái)源方便，數(shù)量大，方便操作，可作為候選藥物的前期篩選。Song等[69]利用雞胚和斑馬魚(yú)評(píng)價(jià)8-羥基喹啉衍生物PH151和PH153的抗真菌活性和毒理學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明PH151和PH153具有治療系統(tǒng)性念珠菌病的潛力，并證明它們是利用哺乳動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究的合適候選藥物。

3 總結(jié)與展望

雞胚模型因在母體外發(fā)育，易操作且血管豐富，組織結(jié)構(gòu)和血管可以通過(guò)照明燈直接觀察胚胎發(fā)育過(guò)程。由于雞胚所需設(shè)備及孵育條件簡(jiǎn)易、發(fā)育周期短、成本低廉，來(lái)源廣，且發(fā)育過(guò)程與哺乳動(dòng)物相似，也被用于發(fā)育學(xué)、毒理學(xué)、免疫學(xué)、藥物評(píng)價(jià)以及疫苗生產(chǎn)。近年來(lái)，雞胚模型除了應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，還逐漸被用于化妝品對(duì)皮膚、眼部的刺激及毒性研究。然而，雞胚模型也存在一定的局限性，例如抗體的種類有限、采血困難等，相信隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，這些問(wèn)題可得到解決。在未來(lái)雞胚模型會(huì)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮更大作用，受到越來(lái)越多研究者們的關(guān)注和喜愛(ài)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Ozgural O， Bahadir B， Dogan I， et al. The effect of phenyramidol on neural development in early chicken embryo model[J]. Turkish neurosurgery，2019，29（6）：851-855.

[2] Schoenwolf G C. Contributions of the chick embryo and experimental embryology to understanding the cellular mechanisms of neurulation[J]. The International journal of developmental biology，2018，62：49-55.

[3] Keynes R， Cook G. Segmentation of the chick central and peripheral nervous systems[J]. The International journal of developmental biology，2018，62：177-182.

[4] Domenico R， Roberto T. The chick embryo chorioallantoic membrane as an in vivo experimental model to study human neuroblastoma[J]. Journal of cellular physiology，2018，234（1）：152-157.

[5] Chiwandire N， Zungu N， Mabaso M， et al. Trends， prevalence and factors associated with hypertension and diabetes among South African adults living with HIV， 2005-2017[J]. BMC public health，2021，21（1）：462-462.

[6] Haselgrübler R， Stübl F， Essl K， et al. Gluc-HET， a complementary chick embryo model for the characterization of antidiabetic compounds[J]. Plos one，2017，12（8）：e0182788.

[7] Bozkurt E， Atay E， Bilir A， et al. A novel model of early type 1 diabetes mellitus： The chick embryo air sack model[J ].Saudi journal of biological sciences，2021，28（10）：5538-5546.

[8] Liu Y， Mo H， Zhang K， et al. Enhanced antioxidation capacity endowed to a mixed type aldose reductase inhibitor leads to a promising anti-diabetic complications agent[J]. Bioorganic chemistry，2022，120：105624-105624.

[9] Itani N， Salinas C E， Villena M， et al. The highs and lows of programmed cardiovascular disease by developmental hypoxia： studies in the chicken embryo[J]. The Journal of physiology，2018，596（15）：2991-3006.

[10] Bednarczyk M， Dunislawska A， Stadnicka K， et al. Chicken embryo as a model in epigenetic research[J]. Poultry science，2021，100（7）：101164-101164.

[11] Lee I， Rasoul B A， Holub A S， et al. Whole genome DNA methylation sequencing of the chicken retina， cornea and brain[J]. Scientific data， 2017， 4（1）：170148.

[12] Garcia P， Wang Y， Viallet J， et al. The chicken embryo model： a novel and relevant model for immune-based studies[J]. Frontiers in immunology，2021，12：791081-791081.

[13] Miebach L， Freund E， Clemen R， et al. Gas plasma-oxidized sodium chloride acts via hydrogen peroxide in a model of peritoneal carcinomatosis[J]. Proceedings of the national academy of sciences of the united states of america，2022，119（31）：e2200708119-e2200708119.

[14] Stark M R， Ross M M. The chicken embryo as a model in developmental toxicology[J]. Methods in molecular biology，2019，1965：155-171.

[15] Samak D H， El-Sayed Y S， Shaheen H M， et al. Developmental toxicity of carbon nanoparticles during embryogenesis in chicken[J]. Environmental science and pollution research international，2020，27（16）：19058-19072.

[16] Tahara Y， Obara K. A novel shell-less culture system for chick embryos using a plastic film as culture vessels[J ].The journal of poultry science，2014，51（3）：307-312.

[17] 杜金娥，董志岷，王貴，等.雞胚無(wú)殼孵化研究初報(bào)[J].四川畜牧獸醫(yī)，2021，48（12）：33-35.

[18] Ma Z L，Wang G，Cheng X， et al. Excess caffeine exposure impairs eye development during chick embryogenesis[J].Journal of cellular and molecular medicine，2014，18（6）：1134-43.

[19] Gheorghescu A K， Tywoniuk B， Duess J， et al. Exposure of chick embryos to cadmium changes the extra-embryonic vascular branching pattern and alters expression of VEGF-A and VEGF-R2 [J]. Toxicology and applied pharmacology，2015，289（1）：79-88.

[20] Rufer E S， Hacker T A， Flentke G R， et al. Altered cardiac function and ventricular septal defect in avian embryos exposed to low-dose trichloroethylene[J]. Toxicological sciences： an official journal of the society of toxicology，2010，113（2）：444-52.

[21] Su B， Debelak K A， Tessmer L L， et al. Genetic influences on craniofacial outcome in an avian model of prenatal alcohol exposure[J]. Alcoholism， clinical and experimental research，2001，25（1）：60-9.

[22] 朱士勇.Nrf2抗氧化防御應(yīng)答在鎘致雞胚神經(jīng)管發(fā)育異常中的作用[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.

[23] 蒙一純，PhilipBrauer，賁長(zhǎng)恩.雞胚早期神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中凋亡細(xì)胞的分布研究[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2000（02）：142-144+242.

[24] Stiles J. Neural plasticity and cognitive development[J]. Developmental neuropsychology，2000，18（2）：237-72.

[25] Kaouther N，Mohamed K B F，Thouraya H， et al. Epidemiology of neural tube defect subtypes in Tunisia， 1991-2011[J]. Pathology，2014，210（12）：944-952.

[26] Paladini D，Malinger G，Birnbaum R， et al. ISUOG Practice Guidelines （updated）： sonographic examination of the fetal central nervous system. Part 2： performance of targeted neurosonography [J]. Ultrasound in Obstetrics & Gynecology，2021，57（4）：661-671.

[27] Cater S W， Boyd B K， Ghate S V. Abnormalities of the fetal central nervous system： prenatal us diagnosis with postnatal correlation[J]. Radiographics： a review publication of the Radiological Society of North America， Inc，2020，40（5）：2.

[28] Practice bulletin no. 187 summary： neural tube defects[J]. Obstetrics and gynecology，2017，130（6）：1394-1396.

[29] 劉冰冰，陳娟，陳新.孕早期胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)畸形與染色體異常的相關(guān)性分析 [J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2022，36（09）：955-958.

[30] Umur A S， Yaldiz C， Bursali A. Evaluation of the effects of mobile phones on the neural tube development of chick embryos[J]. Turkish neurosurgery，2013，23（6）：742-52.

[31] 譚蕊蓉. 高糖誘導(dǎo)神經(jīng)管畸形的雞胚模型建立及肌肽的干預(yù)作用[D].廣州：暨南大學(xué)，2015.

[32] Tan R R， Li Y F， Zhang S J， et al. Abnormal o-glcnacylation of pax3 occurring from hyperglycemia-induced neural tube defects is ameliorated by carnosine but not folic acid in chicken embryos[J]. Molecular neurobiology，2017，54（1）：281-294.

[33] Yan C Y， Sun J， Yu G Y， et al. Tripeptide leu-pro-phe from corn protein hydrolysates attenuates hyperglycemia-induced neural tube defect in chicken embryos[J]. Oxidative medicine and cellular longevity，2022，2022：4932304-4932304.

[34] Rak?p U， B?l?r A， Arikan E S， Effect of pethidine hydrochloride on the development of neural tube-a genetic analysis study in a chick embryo model[J]. World neurosurgery， 2021，150：e613-e620.

[35] Atay E， Ertekin A， Bozkurt E， et al. Impact of Bisphenol A on neural tube development in 48-hr chicken embryos[J].Birth defects research，2020，112（17）：1386-1396.

[36] Ge S， Yi C， Zhong J H， et al. Effects of choline on sodium arsenite-induced neural tube defects in chick embryos[J]. Food and chemical toxicology，2012，50（12）：4364.

[37] Zhong J H， Ge S， Yi C， et al. Oxidative stress is implicated in arsenic-induced neural tube defects in chick embryos[J]. International journal of developmental neuroscience，2011， 29（7）：673-680.

[38] Jiao Y H， Wang G， Li D W， et al. Okadaic acid exposure induced neural tube defects in chicken （gallus gallus） embryos[J]. Marine Drugs，2021，19（6）：322-322.

[39] 覃楊.咖啡因?qū)﹄u胚神經(jīng)發(fā)育的影響[D].廣州：暨南大學(xué)，2011.

[40] Abd E F B， M. E B， Amoura M， Abou E N. Neurotoxicological effects of nicotine on the embryonic development of cerebellar cortex of chick embryo during various stages of incubation [J]. Tissue and cell，2015，47（5）：506-514.

[41] Kantarcioglu E， Kahilogullari G， Zaimoglu M. The effect of magnetic resonance imaging on neural tube development in an early chicken embryo model[J]. Child's nervous system ： ChNS： official journal of the International Society for Pediatric Neurosurgery，2018，34（5）： 933-938.

[42] Cannon B. Cardiovascular disease： Biochemistry to behaviour[J]. Nature，2013， 493（7434）：S2-3.

[43] Gluckman P D， Hanson M A， Cooper C， et al. Effect of in utero and early-life conditions on adult health and disease[J]. The New England journal of medicine，2008，359（1）：61-73.

[44] Emily J C， Jeremy A H， Andrew D K， et al. Partial contributions of developmental hypoxia and undernutrition to prenatal alterations in somatic growth and cardiovascular structure and function[J]. American Journal of Obstetrics and Gynecology，2010，203（5）：495.e24-495.e34.

[45] Dino A G， Emily J C， Youguo N， et al. Developmental programming of cardiovascular dysfunction by prenatal hypoxia and oxidative stress[J].PLoS ONE，2018，7（2）：e31017.

[46] Itani N， Skeffington K L， Beck C， et al. Melatonin rescues cardiovascular dysfunction during hypoxic development in the chick embryo[J]. Journal of pineal research，2016，60（1）： 16-26.

[47] Jin Y M， Zhao S Z， Zhang Z L， et al. High Glucose Level Induces Cardiovascular Dysplasia During Early Embryo Development[J]. Experimental and clinical endocrinology & diabetes ： official journal， German Society of Endocrinology [and] German Diabetes Association，2019，127（9）：590-597.

[48] Wang G， Huang W Q， Cui S D， et al. Autophagy is involved in high glucose-induced heart tube malformation[J]. Cell cycle （Georgetown， Tex.），2015，14（5）：772-83.

[49] Tan R R， Zhang S J， Tsoi B， et al. A natural product， resveratrol， protects against high-glucose-induced developmental damage in chicken embryo[J]. Journal of Asian natural products research，2015，17（5）：586-94.

[50] Wang G， Zhang N， Wei Y F， et al. The impact of high-salt exposure on cardiovascular development in the early chick embryo[J]. The Journal of experimental biology，2015， 218（Pt 21）：3468-77.

[51] Gao L R， Li Sh， Zhang J， et al. Excess imidacloprid exposure causes the heart tube malformation of chick embryos[J]. Journal of agricultural and food chemistry，2016， 64（47）：9078-9088.

[52] Guerrero B C， Morisson M， Liaubet L， et al. Transgenerational epigenetic inheritance in birds[J]. Environmental epigenetics，2018，4（2）：dvy008.

[53] 班謙，趙宗勝，曹體婷.家雞胚胎發(fā)育過(guò)程DNA甲基化的MSAP檢測(cè)[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2009，37（21）：9902-9904.

[54] 李世召.雞胚給養(yǎng)維生素C調(diào)控肉雞脾臟發(fā)育和免疫功能的表觀遺傳學(xué)機(jī)制[D].咸陽(yáng)：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2017.

[55] Ran J， Li J J， Yin L Q， et al. Comparative analysis of skeletal muscle dna methylation and transcriptome of the chicken embryo at different developmental stages [J] Frontiers in physiology，2021，12：697121-697121.

[56] Li S Z， Zhu Y F， Zhi L H， et al. DNA Methylation variation trends during the embryonic development of chicken[J]. PLos one，2017，11（7）：e0159230.

[57] Bai B L， Zhang Q， Liu X Z， et al. Different epigenetic alterations are associated with abnormal IGF2/Igf2 upregulation in neural tube defects[J]. Plos one，2017，9（11）： e113308.

[58] Agger K， Cloos P A C， Christensen J， et al. UTX and JMJD3 are histone H3K27 demethylases involved in HOX gene regulation and development[J].Nature，2007， 449（7163）：731-4.

[59] Sutton K M， Morris K M， Borowska D， et al. Characterization of conventional dendritic cells and macrophages in the spleen using the CSF1R-reporter transgenic chickens[J]. Frontiers in immunology，2021，12：636436.

[60] Khan H M， Raza S M， Anjum A A， et al. Antiviral， embryo toxic and cytotoxic activities of Astragalus membranaceus root extracts[J]. Pakistan journal of pharmaceutical sciences， 2019，32（1）：137-142.

[61] Quereda J J， Andersson C， Cossart P， et al. Role in virulence of phospholipases， listeriolysin O and listeriolysin S from epidemic Listeria monocytogenes using the chicken embryo infection model[J]. Veterinary research，2018，49（1）：13.

[62] Davison F. The importance of the avian immune system and its unique features[J]. Avian immunology.2022， 1-9.

[63] Nguyen P T T T， PagéLarivière F， Williams Kim， et al. Developmental and hepatic gene expression changes in chicken embryos exposed to p-tert-butylphenyl diphenyl phosphate and isopropylphenyl phosphate via egg injection[J].Environmental toxicology and chemistry，2021，41（3）：739-747.

[64] Buhr Ch R， Eckrich J， Kluenker M， et al. Determination of the LD50 with the chick embryo chorioallantoic membrane （CAM） assay as a promising alternative in nanotoxicological evaluation[J]. Nanotoxicology，2021，15（5）：11-16.

[65] Chiaki A， Yoshihiro U， Takashi N， et al. Evaluation of the in vivo radiosensitizing activity of etanidazole using tumor-bearing chick embryo[J].Journal of radiation research， 2011，52（2）：208-214.

[66] Leticia G L， Maria R， Amir A， et al. Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane （CAM） models for primary pancreatic cancer cells： a platform for drug testing[J]. Scientific reports，2017，7（1）：S16-S16.

[67] Huang C W， Matthew R L， Fabrice L， et al. Noninvasive contrast-free 3d evaluation of tumor angiogenesis with ultrasensitive ultrasound microvessel imaging[J].Scientific reports，2019，9（1）：1-11.

[68] Margaretha A S， Anuja S， Andrea R， et al. Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma[J].Urologic oncology： seminars and original investigations，2017，35（9）：544.e11-544.e23.

[69] Song E Y， Jiménez E I， Lin H， et al. Prebiotically plausible RNA activation compatible with ribozyme-catalyzed ligation[J]. Angewandte chemie （international ed. in english），2020， 60（6）：2952-2957.

Applied Research on Chicken Embryo Model

LI Xiyou， HUANG Rongping， GU Xiaoyuan， HAN Shaocong， WANG Wei， LI Weixi

（College of Traditional Chinese Medicine， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming? 650500， Yunnan， China）

Abstract：? Chicken embryos are used as a model system for study of embryonic development， toxicology， pharmacology and immunology. Comparing with mammalian animals， chicken embryos have several important advantages： embryo maturation ex utero until hatching， simplicity of direct manipulation， low-cost， and abundant supply. Moreover， the developmental morphological change and angiogenesis can be easily observed. This review summarized the current application of the chick embryo model， and provided the beneficial reference for the future application.

Keywords：? Chicken embryo model; Neural tube malformation; Cardiac malformation; Epigenetics; Immunology

*基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81960780）；云南省基礎(chǔ)研究中醫(yī)聯(lián)合專項(xiàng)[2019FF002（-007）]；云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目（2023J0543）。

第一作者簡(jiǎn)介：李希尤（1997—），女，碩士研究生，研究方向：中藥活性成分研究，E-mail：18468295405@163.com。

**通信作者簡(jiǎn)介：李維熙（1982—），女，博士，副教授，研究方向：中藥活性及物質(zhì)基礎(chǔ)研究，E-mail：liweixi1001@163.com。