李亞玲，陳 佳

（銅仁市人民醫(yī)院，貴州 銅仁 554300）

梅毒是臨床常見的性傳播疾病，因梅毒螺旋體感染引起，該病毒可通過母嬰垂直傳播，生育期人群是梅毒螺旋體感染的高風(fēng)險人群。近年來隨著人們思想觀念的改變，孕婦梅毒螺旋體感染的發(fā)生率逐年升高，不僅對孕婦自身的健康造成了巨大危害，同時還易引起胎兒宮內(nèi)感染，造成娩出先天梅毒胎兒或死胎、流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局，極大危害新生人口質(zhì)量[1]。因此，對孕婦開展梅毒篩查工作，尤其是孕早期的檢查與診斷，盡早予以有效的治療與干預(yù)，降低梅毒對母嬰健康的損害，對減少梅毒母嬰傳播風(fēng)險、提高出生人口質(zhì)量等至關(guān)重要。有研究表明，大部分妊娠合并梅毒孕婦及時發(fā)現(xiàn)后早期開展積極治療可阻斷病毒的母嬰傳播，娩出健康的嬰兒[2-3]。目前，臨床篩查、診斷梅毒的方法較多，但由于患者感染梅毒螺旋體早期缺少特異性表現(xiàn)，且體外很難對梅毒螺旋體進(jìn)行培養(yǎng)，因此血清學(xué)檢查仍然是梅毒臨床首選的篩查方法。通過開展梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（Treponema pallidum gelatin particle agglutination test，TPPA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析、梅毒快速血漿反應(yīng)素診斷試驗(yàn)、甲苯胺紅不加熱試驗(yàn)等，能夠?qū)崿F(xiàn)對梅毒的篩查。其中梅毒特異性抗體（Syphilis specific antibody，TPAb）因具備較高的診斷敏感度和特異度，受到了廣大學(xué)者的青睞，廣泛應(yīng)用于梅毒的初篩中[4]。而ELISA 因價格低廉、敏感度高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，受到了廣大學(xué)者的認(rèn)可[5]。本研究探討分析了TPPA 與ELISA 檢測孕婦和新生兒血清中TPAb 的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2021 年1 月至2022 年12 月我院門診接診及在住院部住院的200 例疑似梅毒螺旋體感染的孕婦及新生兒，其中孕婦和新生兒各100 例。孕婦的年齡為18 ～46 歲，平均年齡為（30.24±3.40）歲；新生兒的日齡為0 ～21 d，平均日齡為（2.50±0.65）d。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）受試者均接受ELISA 及TPPA ；（2）納入孕婦年齡≥18 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）人類免疫缺陷病毒呈陽性，或合并精神疾病、免疫系統(tǒng)疾病者；（2）存在心、肝、腎等器官功能不全者；（3）受試者為梅毒螺旋體再感染者或梅毒復(fù)發(fā)者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 本研究中所有受試者的血液標(biāo)本均采集于入院當(dāng)日清晨，抽取5 mL 空腹肘靜脈血，使用無抗凝劑的采血管保存。利用DL-5M 型醫(yī)用離心機(jī)對標(biāo)本進(jìn)行離心處理（轉(zhuǎn)速3000 r/min，離心力10 062 xg，時間10 min），分離出血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書采用ELISA、TPPA 分別于24 h 內(nèi)進(jìn)行檢測。

1.2.2 試劑與儀器 奧林巴斯CX23LEDRF51O 顯微鏡，杭州齊威儀器有限公司提供的醫(yī)用自動梅毒旋轉(zhuǎn)振蕩器，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司提供的SsW-600-2S 型電熱恒溫水槽，艾迪康生物科技有限公司提供的1100酶標(biāo)儀自動洗板機(jī)，湖南湘儀醫(yī)療器械有限公司提供的DL-5M 型醫(yī)用離心機(jī)，北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的人梅毒螺旋體抗體診斷試劑（ELISATP），TPPA 試劑購自日本富士瑞必歐株式會社。

1.2.3 TPPA 將不同劑量標(biāo)本稀釋液（分別為100 μL、25 μL、25 μL、25 μL）滴入微量反應(yīng)板對應(yīng)的孔洞（第1、2、3、4 孔）中，將25 μL 待檢血清滴入第1 孔洞中，逐級按照2 倍稀釋至第4 孔，再將未致敏粒子25 μL 滴入第3 孔洞中，將致敏粒子25 μL滴入第4 孔洞中。用微量振蕩器對反應(yīng)板進(jìn)行30 s 的混合震蕩處理，操作完成后加蓋，在室溫環(huán)境下水平靜置2 h。利用顯微鏡進(jìn)行觀察，陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：加入致敏粒子，產(chǎn)生凝集反應(yīng)，樣品與致敏粒子反應(yīng)圖像（最終稀釋倍數(shù)≥1:80）判定陽性。

1.2.4 ELISA 采用上述方法分離出血清，將試劑盒與待檢血清標(biāo)本平衡至室溫（平衡30 min 以上），試驗(yàn)前將試劑輕輕振蕩混勻。將待檢樣本、陰性、陽性對照和質(zhì)控品加入反應(yīng)孔中，對標(biāo)本進(jìn)行60 min 的孵育處理，控制孵育溫度37 ℃。孵育完成后，對標(biāo)本進(jìn)行5 次洗板，在洗板機(jī)中用相應(yīng)洗滌劑進(jìn)行充分洗板操作后，用吸收紙將反應(yīng)板充分拍干，每孔加入酶標(biāo)試劑100 μL，置于約37 ℃環(huán)境中溫育（30±1）min后洗板，將50 μL 底物A、B 分別加入各孔中，輕輕振蕩混勻。在避光條件下，將標(biāo)本靜置30 min，控制溫度為37 ℃。將50 μL 終止液加入孔板中，充分混勻后，采用酶標(biāo)儀對吸光度進(jìn)行讀取，在雙波長450 nm條件下讀取。根據(jù)試劑盒說明書，當(dāng)讀取的吸光度水平高于臨界值（CUTOFF）時為陽性，反之則為陰性。CUTOFF 計(jì)算方法：CUTOFF= 陰性對照孔吸光度均值+0.18。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并比較TPPA、ELISA 的初篩陽性情況。以TPPA 檢測結(jié)果作為依據(jù)，分析ELISA 檢測梅毒螺旋體感染的效能（包括敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、約登指數(shù)）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將數(shù)據(jù)納入SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件中進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用%表示，以χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用±s表示，以t檢驗(yàn)，若P＜0.05，則認(rèn)為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TPPA、ELISA 初篩陽性情況的比較

經(jīng)TPPA 檢測證實(shí)，100 例孕婦中確診梅毒90例、檢出率為90.00%，100 例新生兒中確診梅毒87例、檢出率為87.00%。經(jīng)ELISA 檢測發(fā)現(xiàn)，100 例孕婦中TPAb 呈陽性88 例、陰性12 例，陽性檢出率為88.00% ；100 例新生兒中TPAb 呈陽性85 例、陰性15 例，陽性檢出率為85.00%。疑似梅毒螺旋體感染孕婦、新生兒的ELISA 初篩陽性率與TPPA 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 TPPA、ELISA 初篩陽性情況的比較[例（%）]

2.2 ELISA 對孕婦、新生兒梅毒螺旋體感染的診斷效能

孕婦、新生兒采用ELISA 檢測梅毒螺旋體感染的敏感度分別為94.44%、95.40%（均超過90%），特異度分別為70.00%、84.62%，約登指數(shù)分別為0.644、0.800，提示該方法具有良好的診斷效能。詳見表2-表4。

表2 ELISA 篩查孕婦TPAb 陽性的結(jié)果（例）

表3 ELISA 篩查新生兒TPAb 陽性的結(jié)果（例）

表4 ELISA 對孕婦、新生兒梅毒螺旋體感染的診斷效能

3 討論

梅毒具有極強(qiáng)的傳染性，可侵犯人體各器官、組織，患者感染梅毒螺旋體后會嚴(yán)重?fù)p害其身心健康。隨著孕產(chǎn)婦梅毒患病率的逐年升高，臨床相關(guān)不良妊娠事件越來越多，其危害性已不容忽視[6-7]。針對梅毒螺旋體感染的篩查，選擇恰當(dāng)?shù)姆椒ú粌H有利于大批量篩查，并且可減少漏診的情況，為臨床提供準(zhǔn)確依據(jù)。血清學(xué)方法是當(dāng)前臨床檢測梅毒螺旋體感染的主要手段，其中包括ELISA、TPPA 等。TPPA 主要是通過測定梅毒螺旋體特異性抗原來進(jìn)行鑒別與診斷[8-10]。該方法特異性高，檢測結(jié)果比較可靠，無需特定儀器、操作簡單、試劑穩(wěn)定，但需要多步來稀釋標(biāo)本，價格較貴，操作耗時較長，對操作人員技術(shù)水平的要求也較高，且結(jié)果依賴于肉眼判斷，存在主觀判斷的誤差，一般不適用于大范圍的梅毒篩查[11]。ELISA 是利用基因工程合成抗原進(jìn)行血清TPAb 測定，從而判斷有無梅毒螺旋體感染。TPAb 在梅毒螺旋體潛伏期即可產(chǎn)生，通過測定TPAb 有利于提高梅毒的早期診斷效能。同時，該方法采用全自動或半自動酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，操作簡單，結(jié)果判斷準(zhǔn)確，有利于大樣本的篩查[12-13]。但該方法由于是對梅毒免疫球蛋白（Ig）G、IgM 混合抗體進(jìn)行檢測，而患者在接受治療后梅毒IgG 抗體仍然會存在較長時間，故ELISA 不適用于對接受治療后的梅毒患者進(jìn)行預(yù)后評價。

本研究結(jié)果顯示，疑似梅毒螺旋體感染孕婦、新生兒的ELISA 初篩陽性率與TPPA 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對孕婦、新生兒使用ELISA 檢測梅毒螺旋體感染的敏感度分別為94.44%、95.40%（均超過90%），特異度分別為70.00%、84.62%，約登指數(shù)分別為0.644、0.800。這說明，對疑似梅毒螺旋體感染的孕婦、新生兒采用ELISA 進(jìn)行篩查，具有良好的診斷準(zhǔn)確性與敏感度，同時該方法操作簡單、檢測快速，有利于梅毒的大范圍篩查，可作為孕婦孕早期梅毒篩查的首選方法。但該方法在特異度方面有所不足，檢測結(jié)果中仍然存在一定假陽性、假陰性的可能，這主要與標(biāo)記抗原種類、純度、成效等存在關(guān)聯(lián)[14-15]。故臨床建議，以ELISA 為梅毒的初篩方法，對于存在疑問者可聯(lián)用TPPA 進(jìn)行篩查。

綜上所述，在孕婦與新生兒的梅毒篩查中，與TPPA 相比，ELISA 的陽性檢出結(jié)果相近，該方法具有良好的診斷效能，且操作簡單、診斷快速，可作為孕婦與新生兒梅毒初篩的首選方法，而TPPA 則可作為梅毒初篩陽性的復(fù)檢方法