羊奶乳清蛋白的分離提取研究

朱麗,袁佳璐,付尚辰,李林強(qiáng),劉永峰

(陜西師范大學(xué) 食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院,陜西 西安,710062)

羊乳是世界公認(rèn)最接近母乳的乳品,被譽(yù)為“乳中珍品”。來(lái)自聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織的數(shù)據(jù)顯示,2018年全球羊奶產(chǎn)量已達(dá)1 500萬(wàn)t以上,成為全球第三大生產(chǎn)類型的乳品[1]。乳清是奶酪制作過(guò)程中的副產(chǎn)物,由水(93%～94%)、乳糖、可溶性乳蛋白α-乳白蛋白(α-lactalbumin, α-La)和β-乳球蛋白(β-lactoglobulin, β-Lg)、乳鐵蛋白、免疫球蛋白、酪蛋白大肽、乳脂、鈣、B族維生素、支鏈氨基酸、含硫氨基酸和8種必需氨基酸組成[2],質(zhì)量較高的乳清可應(yīng)用于嬰幼兒奶粉的添加。乳清蛋白約占乳品中總蛋白20%,鈣和磷含量約為總鈣和總磷的38%和50%[3]。乳清中含有的生物活性因子可增強(qiáng)腸道免疫應(yīng)答,并促進(jìn)學(xué)習(xí)以及記憶能力,可能有助于嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育[4]。

常用乳清蛋白的分離方法有等電點(diǎn)沉淀法(堿溶酸沉)、鹽析法、膜過(guò)濾法、泡沫分離法和離子交換色譜法等[5]。MARUYAMA等[6]研究表明,在pH為7時(shí)泡沫分離法對(duì)乳清蛋白的分離效果最好和分離速率最高[6]。SANMARTN等[7]利用熱鈣沉淀法分離出澄清乳清,通過(guò)膜技術(shù)生產(chǎn)綿羊乳清濃縮蛋白。邵鉞馨等[3]發(fā)現(xiàn)單一處理不能較好去除羊奶中的酪蛋白,使用離心結(jié)合等電點(diǎn)沉淀法對(duì)羊奶中酪蛋白去除率較高。陳靜廷等[8]研究發(fā)現(xiàn)超速離心和等電點(diǎn)沉淀法均可以有效去除乳制品中的酪蛋白,并且一些含量較低的蛋白檢出的靈敏度增加。酸法等電點(diǎn)沉淀和酶解法對(duì)牛奶中酪蛋白的去除率較高,其中乳酸去除酪蛋白和保留乳清蛋白的效果比檸檬酸和鹽酸法好[9]。然而大多數(shù)分離方法都具有一定缺點(diǎn),如色譜法效率低且成本太高;堿、熱等條件可能會(huì)影響蛋白結(jié)構(gòu),造成蛋白質(zhì)變性,破壞營(yíng)養(yǎng)蛋白等,對(duì)乳清蛋白的分離效果都并不理想。酸沉淀法能快速將乳中的酪蛋白分離,得到酸乳清。這種方法得到乳清的成本低,耗時(shí)短,是常用的乳清分離方法,但是不同酸對(duì)酪蛋白的去除效果和對(duì)乳清成分的影響尚不明確。

本研究擬以鮮羊奶為原料,研究5種乳清提取方法(離心法、鹽酸法、乙酸法、檸檬酸法和乙醇分級(jí)沉淀法)對(duì)酪蛋白的去除率的效果,并對(duì)5種方法得到的乳清進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定,評(píng)估各方法的分離提取效果,期望獲得純度較高和品質(zhì)較好的乳清蛋白。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮羊奶購(gòu)買于陜西省西安市長(zhǎng)安區(qū)奶山羊養(yǎng)殖大戶,羊奶采集后放置在冰盒中于4 ℃,帶回實(shí)驗(yàn)室。鹽酸、乙酸、檸檬酸、無(wú)水乙醇、尿素,均為分析純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;5,5′-二硫雙(2-硝基苯甲酸)(dithio-bis-nitrobenzoic acid,DTNB)、乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA),美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;甘氨酸,美國(guó)Sigma公司;三羥甲基氨基甲烷(Tris),北京Biotopped公司。

1.2 主要儀器

NanoBrook 90Plus PALS型激光粒度Zeta電位儀,美國(guó)布魯克海儀器公司;TM3030型臺(tái)式掃描電子顯微鏡,日本日立公司;Nicolet iS10型傅里葉紅外光譜分析儀,美國(guó)賽默飛世爾公司;NS800型色差儀,深圳三恩馳科技有限公司;TGL-16gR型離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;UV-1200紫外可見分光光度計(jì),上海美析儀器有限公司;PHS-3C型雷磁精密pH計(jì),上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.3 乳清制備

鮮羊奶在4 ℃下7 500 r/min離心20 min進(jìn)行脫脂,得到的脫脂羊奶分5組,每組50 mL。離心法提取乳清:4 ℃、12 000 r/min離心30 min,收集上清液;鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法提取乳清:分別用1 mol/L鹽酸、10%(體積分?jǐn)?shù))乙酸和1 mol/L檸檬酸調(diào)pH值至4.3后,4 ℃、5 000 r/min離心10 min,獲得的上清液為乳清;乙醇分級(jí)沉淀提取乳清參考邵鉞馨等[3]的方法。

1.4 酪蛋白去除率測(cè)定

1.4.1 乳清中總蛋白濃度測(cè)定

乳清中蛋白濃度依據(jù)二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白濃度檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 SDS-PAGE分析

參考CHEN等[10]的方法,并稍作改進(jìn)。配制12%分離膠灌入膠板中,待分離膠凝固后,配6%濃縮膠于膠板中,并快速插好梳子等待凝固。將乳清與蛋白上樣緩沖液混合后95 ℃加熱5 min使蛋白質(zhì)完全變性,每個(gè)樣品上樣10 μL,進(jìn)行凝膠電泳。電泳結(jié)束后,使用考馬斯亮藍(lán)R250染色2 h,用脫色液脫色直至條帶清晰可見,使用凝膠成像儀對(duì)蛋白條帶進(jìn)行拍照,得到的條帶使用Image J進(jìn)行灰度分析。

1.5 酪蛋白去除率測(cè)定

1.5.1 色澤測(cè)定

取5 mL分離的乳清于培養(yǎng)皿中進(jìn)行感官顏色觀察,后使用色差儀進(jìn)行色澤測(cè)定。首先,色差儀進(jìn)行黑白板矯正,待矯正結(jié)束后進(jìn)行乳清色澤測(cè)定。

1.5.2 乳清微觀結(jié)構(gòu)觀察

參考TANG等[11]的方法,并稍作改進(jìn)。將不同分離方法得到的乳清進(jìn)行冷凍干燥,取乳清粉放置在導(dǎo)電膠上,噴金后進(jìn)行掃描電子顯微鏡觀察。

1.5.3 粒徑和Zeta電位測(cè)定

參考MARKOSKA等[12]的方法,并稍作改進(jìn)。取適量乳清稀釋100倍,使用激光粒度Zeta電位儀進(jìn)行粒度和電位測(cè)定。測(cè)定粒度的參數(shù):測(cè)定溫度25 ℃,平衡時(shí)間60 s,測(cè)定時(shí)間90 s;測(cè)定Zeta電位的參數(shù):測(cè)定溫度25 ℃,平衡時(shí)間90 s,循環(huán)次數(shù)20次。

1.5.4 傅里葉紅外光譜測(cè)定

參考TANG等[11]的方法。取少量烘干的乳清粉與KBr以1∶200的質(zhì)量比例研磨并均勻混合后壓片,使用傅里葉紅外光譜儀進(jìn)行測(cè)定。參數(shù)設(shè)置:波束范圍4 000～400 cm-1,分辨率4 cm-1,掃描次數(shù)30次。

1.5.5 游離巰基含量測(cè)定

參考沈海斌等[13]的方法。取0.5 mL稀釋后樣品,加入5 mL尿素緩沖溶液(尿素240 g,Tris 5.2 g,甘氨酸3.45 g,EDTA 0.6 g,蒸餾水定容至500 mL,pH 8.0),再加入20 μL的埃爾曼試劑(DTNB 200 mg,溶解于Tris 520 mg,甘氨酸 345 mg,EDTA 60 mg,pH 8.0,定容至50 mL溶液),避光反應(yīng)15 min,使用紫外分光光度計(jì)在412 nm處測(cè)定吸光度。根據(jù)公式(1)計(jì)算游離巰基含量[14]:

(1)

式中:SH,游離巰基含量,μmol/g;D,稀釋系數(shù);C,乳清的蛋白質(zhì)量濃度,mg/mL;A412,樣品在412 nm處的OD值。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

每個(gè)指標(biāo)測(cè)定3次,最終試驗(yàn)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,使用SPSS 19進(jìn)行單因素方差分析,Origin 2018進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳清中總蛋白濃度分析

如圖1所示,離心法提取乳清的蛋白質(zhì)量濃度顯著高于其他各組的蛋白質(zhì)量濃度(P<0.05),其中離心法提取乳清的蛋白質(zhì)量濃度高于乙醇分級(jí)沉淀法1.86倍(P<0.05)。鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法提取乳清的蛋白質(zhì)量濃度無(wú)顯著差異(P>0.05),蛋白質(zhì)量濃度分別為(8.102±1.091)、(7.467±0.132)、(7.831±1.076) mg/mL。

圖1 不同分離方法得到乳清的蛋白含量

2.2 乳清中蛋白組分酪蛋白去除率分析

2.2.1 乳清中蛋白組分分析

如圖2所示,離心法和乙醇分級(jí)沉淀提取乳清中酪蛋白的去除效果較差,但是3種酸處理后得到乳清樣品的酪蛋白條帶較窄而且比較淺,說(shuō)明這3種方法去除酪蛋白的效果比較好。鹽酸法和乙醇分級(jí)沉淀法提取乳清中,α-La條帶的亮度較淺,離心法、乙酸法和檸檬酸法提取的乳清中α-La的亮度與鮮羊奶相比無(wú)明顯變化。乙醇分級(jí)沉淀法提取乳清中β-Lg條帶亮度明顯比其他4種方法暗。因此,乙酸法和檸檬酸法能更好保留乳清中的蛋白質(zhì)。

圖2 不同分離方法得到的乳清的SDS-PAGE圖

2.2.2 酪蛋白去除率分析

如表1所示,離心方法提取乳清的酪蛋白去除率只有(15.70±1.50)%,乙醇分級(jí)沉淀法酪蛋白去除率為(44.20±2.00)%,但是經(jīng)過(guò)鹽酸、乙酸和檸檬酸處理后,酪蛋白去除率達(dá)到了72%以上。因此,鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法提取乳清殘留量顯著低于離心法和乙醇分級(jí)沉淀法(P<0.05)。

表1 不同分離方式得到的乳清的酪蛋白去除率結(jié)果

2.2.3 酪蛋白灰度值分析

如圖3所示,離心法與檸檬酸法得到的乳清相比,乳鐵蛋白的灰度值無(wú)顯著差異,但是顯著高于鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法乳清。乙酸法和檸檬酸法獲得乳清中β-Lg的灰度無(wú)顯著差異(P>0.05),但顯著高于離心法、鹽酸法和乙醇分級(jí)沉淀法獲得的乳清。離心處理對(duì)乳清中α-La的影響較小,分別比鹽酸、乙酸、檸檬酸和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清高50.81%、11.30%、14.70%和2.09倍(P<0.05)。離心和檸檬酸法提取乳清中免疫球蛋白的灰度值無(wú)顯著差異(P<0.05),但是顯著高于鹽酸、乙酸和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清(P<0.05)。

圖3 不同分離方法得到的乳清組分的灰度值

2.3 乳清的理化特性分析

2.3.1 色澤分析

如表2所示,乙醇分級(jí)沉淀提取乳清的L*值顯著高于其他4組乳清(P<0.05),而且鹽酸法與乙酸法提取乳清的L*值無(wú)顯著差異(P>0.05)。鹽酸法與檸檬酸法提取乳清的a*值無(wú)顯著差異(P>0.05),顯著高于離心法和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清(P<0.05)。而檸檬酸法提取乳清的a*值與乙酸法提取的乳清無(wú)顯著差異(P>0.05)。乙酸法獲得乳清的b*值顯著高于其他4組乳清(P<0.05),鹽酸法和檸檬酸法提取乳清的b*值無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 不同分離方式乳清的色澤分析

如圖4所示,離心法和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清呈現(xiàn)渾濁的白色,但鹽酸、乙酸和檸檬酸法提取的乳清澄清,主要表現(xiàn)為黃色。

a-離心法;b-鹽酸法;c-乙酸法;d-檸檬酸法;e-乙醇分級(jí)沉淀法

2.3.2 微觀結(jié)構(gòu)分析

如圖5所示,離心法獲得的乳清呈片狀,結(jié)構(gòu)表面粗糙度較高。鹽酸法和乙酸法提取的乳清呈現(xiàn)片狀,表面都較為光滑、粗糙度低。檸檬酸和乙醇分級(jí)沉淀得到的乳清由破碎的玻璃或薄片狀結(jié)構(gòu)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)椴灰?guī)則的塊狀,其中經(jīng)乙醇分級(jí)沉淀得到的乳清出現(xiàn)了更多的裂紋、片狀結(jié)構(gòu)邊緣更加粗糙。

a-離心法;b-鹽酸法;c-乙酸法;d-檸檬酸法;e-乙醇分級(jí)沉淀法

2.3.3 粒徑和Zeta電位分析

如圖6-a所示,乙酸法提取乳清的粒徑分別比離心法、鹽酸法、檸檬酸法和乙醇分級(jí)沉淀法提取的乳清大5.77倍、13.09%、15.32%和1.75倍(P<0.05),鹽酸法和檸檬酸法提取乳清的粒徑無(wú)顯著差異(P>0.05)。如圖6-b所示,鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法提取乳清的Zeta電位無(wú)顯著差異(P>0.05),且3種方法提取乳清的Zeta電位的絕對(duì)值顯著大于離心法和乙醇分級(jí)沉淀法提取的乳清(P<0.05)。

a-乳清粒徑;b-乳清的Zeta電位

2.3.4 傅里葉紅外光譜分析

圖7 不同分離方法提取乳清的FTIR結(jié)果

對(duì)所得到的譜圖進(jìn)行高斯擬合,得到乳清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的比例如表3所示。離心法提取乳清中蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要以β-折疊為主,顯著高于其他4種方法提取乳清(P<0.05)。鹽酸法提取乳清的無(wú)規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)和α-螺旋結(jié)構(gòu)顯著大于其他4種方法提取乳清(P<0.05)。乙酸法和檸檬酸法提取乳清的β-折疊、無(wú)規(guī)則卷曲和α-螺旋結(jié)構(gòu)無(wú)顯著差異(P>0.05),但是檸檬酸法提取乳清的β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)高于乙酸法提取乳清49.74%(P<0.05)。乙醇分級(jí)沉淀法提取乳清中以β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)為主,高于離心法、鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法提取乳清的β-轉(zhuǎn)角1.60倍、32.96%、2.61倍和1.41倍;無(wú)規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)則顯著低于其他4種方法提取的乳清(P<0.05);其α-螺旋結(jié)構(gòu)顯著高于離心法、乙酸法和檸檬酸法(P<0.05)。

表3 不同方法提取的乳清中二級(jí)結(jié)構(gòu)的含量 單位:%

2.3.5 乳清中游離巰基含量分析

如圖8所示,乙酸法提取乳清中游離巰基含量顯著低于其他4組乳清,為(1.394±0.228) μmol/g(P<0.05)。離心和鹽酸法提取乳清中游離巰基含量無(wú)顯著差異(P>0.05),因此乙酸對(duì)乳清中的β-Lg二聚體間的二硫鍵影響最大,但乙醇分級(jí)沉淀法使β-Lg間的二硫鍵減少,導(dǎo)致游離巰基含量增大。

圖8 不同分離方法提取乳清的游離巰基含量

3 討論與結(jié)論

本研究采用離心、酸(鹽酸、乙酸、檸檬酸)等電點(diǎn)沉淀和乙醇分級(jí)沉淀提取乳清,發(fā)現(xiàn)離心法得到的乳清濃度高于其他各組,可能是由于離心無(wú)法有效去除脫脂羊奶中的酪蛋白膠束,使乳清的蛋白濃度增大[3]。為了進(jìn)一步明確這幾種方法去除酪蛋白的效果,采用SDS-PAGE對(duì)得到乳清中的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,結(jié)果表明離心和乙醇分級(jí)沉淀提取的乳清中酪蛋白殘留較多,3種酸沉淀法提取的乳清中酪蛋白殘留較少,這與上述蛋白濃度測(cè)定結(jié)果相似。通過(guò)對(duì)SDS-PAGE條帶的灰度分析表明,酸等電點(diǎn)沉淀(鹽酸、乙酸和檸檬酸)對(duì)酪蛋白的去除率可以達(dá)到72%以上。邵鉞馨等[3]研究證明離心結(jié)合等電點(diǎn)沉淀乳制品中的酪蛋白,沉淀率可達(dá)到63%以上,本研究酪蛋白去除率比較高可能是因?yàn)檎{(diào)節(jié)pH結(jié)束后在搖床上振蕩了30 min,使酸與酪蛋白能有充分的時(shí)間變性進(jìn)行沉淀。在提取乳清時(shí)需要考慮乳清蛋白能否充分保留,乙酸和檸檬酸法提取的乳清中α-La和β-Lg的條帶亮度和鮮羊奶沒(méi)有明顯差異,但鹽酸法提取的乳清的α-La條帶的亮度變暗、寬度變窄,這與刁夢(mèng)雪等[9]的研究相似。因此,乙酸和檸檬酸酸法能更好除去酪蛋白,并且能更多保留乳清中的乳清蛋白含量。邵鉞馨等[3]研究證明離心結(jié)合等電點(diǎn)沉淀乳制品中的乳清蛋白,保留率可以達(dá)到74.95%,本研究結(jié)果乙酸沉淀法能更有效去除酪蛋白,保留乳清蛋白。

離心和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清顏色為白色且不透明,這主要是由于乳清中殘留的酪蛋白以蛋白膠束的形式存在于乳清中,影響乳清的透明度。鹽酸法、乙酸法和檸檬酸法分離得到的乳清清澈透亮,呈現(xiàn)黃綠色,酪蛋白殘留較少,且乳清中核黃素使溶液的顏色為黃綠色[15]。通過(guò)SEM觀察乳清的結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),離心、鹽酸和乙酸法得到的乳清呈片狀,檸檬酸和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清呈塊狀結(jié)合在一起,MA等[16]研究表明,使用噴霧干燥工藝形成的乳清是球形結(jié)構(gòu),而通過(guò)冷凍干燥工藝處理得到的樣品呈破碎的片狀結(jié)構(gòu),這也與本試驗(yàn)結(jié)果一致。乳清表面的小孔是由于冷凍干燥時(shí)乳清中被凍結(jié)的水升華造成的[17]。

由于酪蛋白表面的靜電荷相互排斥,使酪蛋白聚集程度較低,僅能形成較短的酪蛋白膠束結(jié)構(gòu),而離心處理所得樣品酪蛋白去除率低,仍含有大量酪蛋白顆粒,乳清蛋白純度低,所以平均粒徑遠(yuǎn)低于酸處理法所得樣品,這與李子超等[18]的試驗(yàn)結(jié)果一致。王美玉等[19]研究發(fā)現(xiàn),有機(jī)溶劑對(duì)蛋白質(zhì)的疏水相互作用、氫鍵和靜電相互作用的穩(wěn)定性會(huì)產(chǎn)生一定影響,一些有機(jī)溶劑在低濃度條件下可以提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,但在高濃度條件時(shí),這些有機(jī)溶劑也會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。這是由于它們破壞了氨基酸非極性側(cè)鏈之間的疏水相互作用,同時(shí)增強(qiáng)靜電相互作用、改變蛋白質(zhì)天然結(jié)構(gòu)、促進(jìn)蛋白質(zhì)聚集。乙醇分級(jí)沉淀制備的樣品無(wú)法有效提取乳清蛋白,未去除的酪蛋白在乙醇的作用下形成較大聚集體,故平均粒徑大于離心處理。Zeta電位是衡量樣品長(zhǎng)期儲(chǔ)藏能力的一個(gè)重要指標(biāo)[20]。Zeta電位絕對(duì)值越大則說(shuō)明乳狀液液滴表面具有越多靜電荷,液滴間具有越大的靜電斥力和距離[21]。鹽酸、乙酸和檸檬酸法分離乳清的Zeta電位均顯著大于離心法和乙醇分級(jí)沉淀法得到的乳清,這可能是因?yàn)樗崽幚硎沟鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)展開,暴露了內(nèi)部帶負(fù)電荷的氨基酸殘基,導(dǎo)致Zeta電位的絕對(duì)值較高。此外,樣品Zeta電位絕對(duì)值在30 mV以上時(shí),樣品處于穩(wěn)定狀態(tài)。因此,本試驗(yàn)獲得的乳清具有良好的穩(wěn)定性。傅里葉紅外光譜分析表明,經(jīng)酸處理的樣品α-螺旋含量增加,顯示出明顯的吸收峰,可能是因?yàn)樗嵴T導(dǎo)α-螺旋結(jié)構(gòu)形成,這與HUANG等[22]的研究結(jié)果一致。乙酸酸性較弱,相比于鹽酸法提取乳清,經(jīng)乙酸法提取乳清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)變化較小。乙醇處理會(huì)使蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)中的β-折疊轉(zhuǎn)變?yōu)棣?螺旋和β-轉(zhuǎn)角,這2種結(jié)構(gòu)增加可以增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子的無(wú)序性和柔韌性[23],這與本試驗(yàn)結(jié)果相似。乳清中的蛋白是一種典型的球狀蛋白,游離巰基及其他功能基團(tuán)隱藏在其緊密的分子結(jié)構(gòu)內(nèi)部。乙酸法和檸檬酸法提取的乳清中游離巰基含量較低,可能是由于酸處理導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)舒展、暴露出隱藏的巰基形成二硫鍵,穩(wěn)定存在于溶液中。LIU等[24]提出二硫鍵在酸性環(huán)境中較穩(wěn)定,不易斷裂。乙醇分級(jí)沉淀法得到乳清的游離巰基含量高,可能是由于醇類極性低于水,加入蛋白溶液中會(huì)使溶液介電常數(shù)降低、分子間靜電相互作用增強(qiáng),削弱或破壞穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的非共價(jià)相互作用,改變蛋白質(zhì)的分子構(gòu)象,包裹在蛋白分子中的二硫鍵暴露之后又被重新包裹在變性的蛋白質(zhì)分子中,引起游離巰基含量增大[25]。

在5種羊奶乳清分離提取方法中,離心法乳清蛋白和酪蛋白的分離效果差,乙醇分級(jí)沉淀法不僅無(wú)法有效去除酪蛋白,且α-La和β-Lg損失較大。乙酸處理不僅有效的除去了大量酪蛋白、獲得了純度較高的乳清蛋白、α-La和β-Lg損失小,且對(duì)乳清蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)影響較弱,是一種有效、科學(xué)的羊奶乳清分離方法。