肺炎支原體檢測方法的研究進(jìn)展

隆甜香

（平果市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 平果 534199）

支原體屬于一種體積介于細(xì)菌與病毒之間的微小微生物，其侵襲進(jìn)入人體后會(huì)在細(xì)胞中生存。從人體分離獲得的十多種支原體中，有五種是對(duì)人有致病性的支原體，其中就包括肺炎支原體。肺炎支原體感染是引起小兒肺炎的主要原因之一，被稱為肺炎支原體肺炎，屬于肺炎中比較常見的一種類型。在患者打噴嚏、咳嗽時(shí)，肺炎支原體會(huì)通過飛沫傳播而進(jìn)入到被感染者的呼吸道內(nèi)，從而引發(fā)呼吸道感染。對(duì)于肺炎支原體感染的治療，臨床需要結(jié)合患者的具體病癥采取對(duì)應(yīng)的治療措施，因此對(duì)臨床準(zhǔn)確診斷的依賴性相對(duì)較高。從目前來看，臨床上對(duì)于肺炎支原體的診斷要求較高，且診斷效果較差，在缺乏有效的診斷方式時(shí)很容易導(dǎo)致患者的病情加重，從而間接影響其遠(yuǎn)期預(yù)后。對(duì)此，探討肺炎支原體的檢測方法具有重要的意義。本文就肺炎支原體檢測方法的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為肺炎支原體肺炎的臨床診治提供參考。

1 肺炎支原體感染患者的表現(xiàn)

肺炎支原體屬于臨床上較為常見的感染性支原體，人對(duì)肺炎支原體普遍易感，特別是兒童。小兒由于心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟，因此容易感染肺炎支原體，且感染后表現(xiàn)較為復(fù)雜，同時(shí)很容易誘發(fā)各種肺臟內(nèi)外并發(fā)癥[1-2]。肺炎支原體感染患者主要表現(xiàn)為發(fā)熱、氣促、胸悶等。單純的肺炎支原體感染患者通常沒有典型的肺炎表現(xiàn)，但如果病癥涉及其他系統(tǒng)就會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的并發(fā)癥，比較常見的并發(fā)癥包括腦膜炎、心動(dòng)過緩、急性腎小球腎炎、多形性紅斑等[3-4]。此外，肺炎支原體感染患者的體溫也會(huì)出現(xiàn)明顯的變化，包括低熱、高熱等，同時(shí)發(fā)熱之前往往有畏寒癥狀[5-6]。整體來看，肺炎支原體感染患者因?yàn)槿狈μ禺愋缘呐R床表現(xiàn)，加之許多患者的前期表現(xiàn)與上呼吸道感染高度相似，因此通過觀察臨床癥狀直接進(jìn)行診斷有較高的難度，此時(shí)便需要結(jié)合其他的輔助檢查技術(shù)進(jìn)行鑒別診斷[7-8]。

2 肺炎支原體感染的影像學(xué)表現(xiàn)

近年來，影像學(xué)檢查技術(shù)在肺部感染性疾病診斷與治療中的應(yīng)用越來越普遍，包括X 線檢查、CT 檢查等。其中CT 檢查的分辨率和定性診斷的準(zhǔn)確性均明顯高于X 線檢查，在肺部感染性疾病的早期診斷中有較高的應(yīng)用價(jià)值[9-10]。有研究指出，相較于細(xì)菌性、病毒性肺炎患者，肺炎支原體肺炎患者的CT 影像學(xué)資料中可見雙下肺受累較多，但肺炎支原體肺炎與病毒性肺炎在間質(zhì)性增厚征象方面基本相同，此外支氣管壁厚度改變也是肺炎支原體肺炎的重要診斷依據(jù)以及與其他類型肺炎相鑒別的征象[11-12]。肺炎支原體肺炎的影像學(xué)表現(xiàn)相對(duì)復(fù)雜，除了上述特征外，還會(huì)涉及小葉中心結(jié)節(jié)，同時(shí)肺泡可出現(xiàn)腔內(nèi)滲出變化，這些表現(xiàn)可先后發(fā)生或同時(shí)發(fā)生[13-14]。有研究認(rèn)為，重癥肺炎支原體肺炎患者的CT 表現(xiàn)普遍為葉段實(shí)變，其與細(xì)菌性肺炎有著較高的相似性。相關(guān)研究指出，39% 的暴發(fā)性肺炎支原體肺炎患者的肺部影像學(xué)表現(xiàn)中存在葉段實(shí)變，其中有25% 的患者其唯一影像學(xué)表現(xiàn)即為葉段實(shí)變[15-16]。另外，影像學(xué)檢查技術(shù)還可以發(fā)現(xiàn)肺部病灶的范圍和形態(tài)表現(xiàn)，通過結(jié)合CT 檢查、流行病學(xué)判斷、臨床表現(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)室檢查等多種方法進(jìn)行判斷，可實(shí)現(xiàn)肺炎支原體感染的早期診斷與積極治療[17-18]。

3 肺炎支原體的檢測方法

3.1 肺炎支原體培養(yǎng)分離

肺炎支原體的繁殖速度相對(duì)緩慢，一般1 ～6 h才會(huì)分裂一代。肺炎支原體的培養(yǎng)分離主要是采集鼻咽分泌物、痰液、肺泡灌洗液等作為標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)（基于SP4 培養(yǎng)基），于溫度37 ℃、濕度60% 的環(huán)境中在瓊脂內(nèi)加入CO2進(jìn)行培養(yǎng)[19-20]。這一培養(yǎng)方式是肺炎支原體應(yīng)用最為廣泛且最有效的培養(yǎng)方式。對(duì)于不同標(biāo)本的肺炎支原體培養(yǎng)而言，其陽性率有所差異，此時(shí)在培養(yǎng)過程中應(yīng)注重對(duì)培養(yǎng)基的形態(tài)、顏色進(jìn)行觀察。有研究對(duì)咽拭子和肺泡灌洗液的肺炎支原體培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測的陽性率可以達(dá)到86%，結(jié)果一致率能達(dá)到93.1%[21-22]，同時(shí)肺泡灌洗液的陽性率為65.5%，污染率為6.69%，咽拭子標(biāo)本的陽性率為51.7%，污染率為51.7%。整體來看，咽拭子屬于熒光PCR 定性檢測的重要標(biāo)本，但并不適用于病原體的定量檢測，而肺泡灌洗液則可以應(yīng)用于病原體的定量檢測中。臨床可以結(jié)合患者的耐受程度、標(biāo)本獲取的難度、疾病表現(xiàn)等選擇最佳的標(biāo)本，在留取標(biāo)本之后應(yīng)及時(shí)運(yùn)輸并進(jìn)行檢測，避免檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。

3.2 抗體檢測

人體在感染肺炎支原體后會(huì)出現(xiàn)特異性的抗體，主要包括免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）及免疫球蛋白A（IgA），其中尤以IgG、IgM 最為常見。血清IgM 抗體檢測臨床應(yīng)用較早，一般在感染肺炎支原體1 周后便可進(jìn)行檢測，10 ～30 d 時(shí)抗體滴度可以達(dá)到高峰，12 ～26 周就會(huì)消失。IgG 滴度在感染肺炎支原體1 個(gè)月左右會(huì)達(dá)到高峰，且持續(xù)時(shí)間較長[23-24]?？贵w檢測技術(shù)包括冷凝集試驗(yàn)、間接性血凝試驗(yàn)等。冷凝集試驗(yàn)是檢測肺炎支原體的非特異性方法，檢測時(shí)使用的冷凝集素屬于IgM 抗體，可以在0 ～5 ℃內(nèi)凝集紅細(xì)胞。有研究認(rèn)為，肺炎支原體感染患者可在10 d 左右冷凝集素滴度呈現(xiàn)1:32 的改變，并在6 周后逐漸恢復(fù)正常，冷凝集素滴度較高也證明了肺炎支原體感染的風(fēng)險(xiǎn)高。同時(shí)，受抗體滴度、巨噬細(xì)胞、免疫性疾病等多種因素的影響，導(dǎo)致冷凝集試驗(yàn)的特異性相對(duì)較低，診斷結(jié)果的可靠性一般。

3.3 分子診斷技術(shù)

分子診斷技術(shù)起源于20 世紀(jì)60 年代，其技術(shù)發(fā)展歷程主要經(jīng)歷了分子雜交技術(shù)、核酸測序技術(shù)、分子構(gòu)象技術(shù)以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)。整體來看，分子診斷技術(shù)在臨床應(yīng)用中具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確性及特異性[25]。以實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)為例，該技術(shù)的出現(xiàn)有效彌補(bǔ)了肺炎支原體肺炎等非典型肺炎病原體培養(yǎng)分離的困境。相較于傳統(tǒng)的病原體培養(yǎng)分離而言，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)的靈敏度、特異度及檢測效率均更高，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)肺炎支原體感染的準(zhǔn)確診斷。同時(shí)，多重定性PCR 與定量PCR 均可以實(shí)現(xiàn)對(duì)肺炎支原體的準(zhǔn)確檢測，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率明顯高于被動(dòng)凝集法，并且實(shí)時(shí)熒光定量PCR 的檢測結(jié)果與患者的疾病病程有直接的關(guān)聯(lián)。另外，肺炎支原體感染患者還普遍存在病毒或細(xì)菌感染的表現(xiàn)，很難實(shí)現(xiàn)區(qū)分與鑒別，此時(shí)就需要對(duì)PCR 的陽性結(jié)果進(jìn)行深入分析。

4 小結(jié)

肺炎支原體感染的臨床發(fā)病率一直處于較高的水平。由于肺炎支原體感染患者缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，因此難以實(shí)現(xiàn)快速診斷。另外，在影像學(xué)表現(xiàn)方面，肺炎支原體肺炎患者與細(xì)菌性、病毒性肺炎患者有時(shí)難以準(zhǔn)確區(qū)分，因此給臨床診斷和治療造成了一定的困難，不利于疾病的治療和轉(zhuǎn)歸，影響患者的預(yù)后。對(duì)此，探討肺炎支原體的檢測方法具有重要的意義。目前臨床上檢測肺炎支原體的方法有肺炎支原體培養(yǎng)分離、抗體檢測、分子診斷技術(shù)等。其中病原體培養(yǎng)分離是診斷肺炎支原體感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但存在耗時(shí)較長、費(fèi)用較高等問題，難以早期實(shí)現(xiàn)明確診斷，易延誤患者的治療。抗體檢測的敏感性和特異性一般，故臨床應(yīng)用具有一定的局限性。近年來，分子診斷技術(shù)在肺炎支原體感染的診斷中顯示出諸多優(yōu)勢，具有更高的檢測效率、靈敏度和特異性，可實(shí)現(xiàn)早期診斷，臨床應(yīng)用價(jià)值較高。