邸學(xué)，王斐嫻，任聰，李峰*

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；

2.煙臺毓璜頂醫(yī)院，山東 煙臺 264099

鹿角始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，附于鹿茸項下，列為上品[1]。《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版收載為鹿科動物馬鹿Cervus elaphusLinnaeus 或 梅花鹿C.nipponTemminck 已骨化的角或鋸茸后翌年春季脫落的角基，分別習(xí)稱馬鹿角、梅花鹿角、鹿角脫盤[2]。鹿角作為傳統(tǒng)中藥，其性溫，味咸，歸腎、肝經(jīng)；具有溫腎陽、強筋骨、行血消腫的功效，用于腎陽不足、陽痿遺精、腰脊冷痛、陰疽瘡瘍、乳癰初起、瘀血腫痛[2-3]。

鹿角與鹿角脫盤為中藥鹿角藥材的不同藥用部位，文獻記載兩者的功效基本相同[2]，但是由于鹿角脫盤質(zhì)地更加堅硬，市場上多以鹿角脫盤粉銷售，且價格遠高于鹿角粉；現(xiàn)代研究表明鹿角脫盤與鹿角無論是化學(xué)成分還是藥效作用上尚有一定的差異[4-11]。為有效鑒別鹿角脫盤粉與鹿角粉，以及在兩者中混入鹿骨粉等現(xiàn)象，本研究從顯微結(jié)構(gòu)的角度，分別以表征其骨化程度的顯微特征骨陷窩長/短徑比和骨陷窩面積比為鑒定參數(shù)[12-13]，通過對比鹿角脫盤、鹿角及鹿骨的不同骨化程度部位中的顯微特征參數(shù)值，揭示三者顯微結(jié)構(gòu)上的差異，以期為鹿角脫盤粉與鹿角粉鑒定、闡釋鹿角脫盤與鹿角質(zhì)地差異的本質(zhì)奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 樣品

鹿角、鹿角脫盤、鹿骨藥材的來源、規(guī)格見表1，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為鹿角（Cervus elaphusLinnaeus orC.nipportTemminc）、鹿角脫盤（C.elaphusLinnaeus orCervus nipportTemminc）、鹿骨（C.nipportTemminc）正品藥材。

表1 鹿角與鹿角脫盤樣品來源

1.2 儀器

SL-BI-S-2 型普通光學(xué)顯微鏡、System Biologic Microscope BX-51、DP10 型顯微鏡數(shù)碼相機均購于奧林巴斯有限公司。

1.3 試藥

水合氯醛、稀甘油均為分析純，購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司；純凈水（娃哈哈股份有限公司）。

2 方法

2.1 顯微粉末制片

分別取干燥至恒重的10 批樣品粉末，過80 目篩。再取過篩后的粉末，按《中國藥典》2020 年版（四部）顯微鑒別法中藥材粉末的制片方法[14]，制成水合氯醛透化片15張。

2.2 顯微特征觀察

分別取各樣品透化片10 張，并置于光學(xué)顯微鏡下，對顯微結(jié)構(gòu)中的骨碎片及其骨陷窩形態(tài)、棕色塊及未骨化組織特征進行觀察，拍照，記錄。

2.3 顯微特征參數(shù)測量[15]

于40 倍物鏡下，應(yīng)用軟件Digital Camera Software[C-3.0W95E]分別測量其骨陷窩的長徑、短徑及其面積。并按公式（1）分別計算樣品中骨陷窩面積占骨碎片面積比，式中S1、S2......Sn為同一骨碎片上個骨陷窩面積，S片為骨碎片面積。

骨陷窩面積比＝（S1+S2+S3+...+Sn）/S片×100% （1）

3 結(jié)果

鹿角、鹿角脫盤及鹿骨中均可見骨組織中的骨疏質(zhì)碎片、骨密質(zhì)碎片及棕色塊等顯微結(jié)構(gòu)。在2種骨組織碎片中，以骨疏質(zhì)碎片上的骨陷窩特征最為突出，也是脊椎動物藥材顯微鑒定的主要特征，通常簡稱為骨碎片[16]；而骨密質(zhì)碎片則表面特征不明顯。

3.1 骨碎片

鹿角中骨碎片較多，淡棕色或黃色，呈不規(guī)則形。骨碎片上有較多的骨陷窩，排列較密集，呈黑色，少見無色，大多為類圓形或類梭形；鹿角脫盤的骨碎片也為不規(guī)則形狀，呈淡黃色，其上骨陷窩排列較稀疏，呈無色或黑色，大多為長橢圓形或類梭形；鹿骨中主要為骨碎片結(jié)構(gòu)，其顏色為黃色，形狀不規(guī)則，骨碎片上有密集的骨陷窩，呈黑色，多為類圓形，有的邊緣骨小管較清晰，呈放射狀溝紋（圖1、圖2）。

圖1 鹿角、鹿角脫盤及鹿骨的骨碎片顯微特征

圖2 鹿角、鹿角脫盤及鹿骨的骨陷窩顯微特征

3.2 棕色塊

鹿角及鹿角脫盤樣品鏡下均可觀察有棕色塊，形狀不規(guī)則，大小不一。其中鹿角中棕色塊呈淡黃色，鹿角脫盤的則呈紅棕色（圖3），鹿骨中無棕色塊。

圖3 鹿角與鹿角脫盤中棕色塊顯微特征

3.3 骨密質(zhì)碎片

鹿角和鹿角脫盤樣品中尚可觀察到骨密質(zhì)碎片。其形態(tài)為不規(guī)則塊狀，呈淡黃色，表面具不規(guī)則的突起（圖4）?？傮w上比較，鹿角中骨密質(zhì)碎片較少，而鹿角脫盤中骨密質(zhì)碎片較多。

圖4 鹿角和鹿角脫盤中骨密質(zhì)碎片顯微特征

3.4 顯微特征參數(shù)

實驗結(jié)果顯示（表2），鹿角骨碎片鏡下觀察，其骨陷窩多為長條形，長/短徑比值為1.69～2，骨陷窩面積占骨碎片面積比為40.60%～61.77%；鹿角脫盤上的骨陷窩長/短徑比值為分別為2.04～2.38，面積比為35.04%～45.82%。因此，從骨陷窩的形態(tài)上，發(fā)現(xiàn)鹿角脫盤的骨陷窩形態(tài)比鹿角的骨陷窩形態(tài)偏長，且其骨陷窩面積比較鹿角的骨陷窩面積比偏小；鹿骨的骨陷窩長/短徑比值則為1.54，面積比為71.8%，即鹿骨的骨陷窩形態(tài)接近圓形，其面積比最大。

表2 鹿角、鹿角脫盤及鹿骨顯微特征參數(shù)測定結(jié)果（,n=30）

表2 鹿角、鹿角脫盤及鹿骨顯微特征參數(shù)測定結(jié)果（,n=30）

4 總結(jié)與討論

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為中藥鹿角均具有溫腎陽，強筋骨，行血消腫的功效，臨床用于腎陽不足、陽痿遺精、腰脊冷痛、陰疽瘡瘍、乳癰初起、瘀血腫痛等證[1]。從其功效與臨床應(yīng)用可以看出，其主要是“補腎健骨”和“行血消癰”2 個方面，這兩方面的作用本質(zhì)是其不同藥效物質(zhì)決定的，而不同藥效物質(zhì)又決定于其生物學(xué)結(jié)構(gòu)的差異。本研究通過比較鹿角脫盤、鹿角及鹿骨粉末顯微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，三者骨碎片中的骨陷窩形態(tài)（長/短徑比值）和骨陷窩面積比均具有明顯的差異性。同時由表2 可見，無論是梅花鹿還是馬鹿，其脫盤的骨陷窩形態(tài)（長/短徑比值）與骨陷窩面積比均相似，即表明其骨化程度接近，這與它們同為長新角前脫落相吻合；至于馬鹿角與梅花鹿角的差異，由于梅花鹿角樣品較少，且粉末藥材無法判定其生長年限，因此是否存在種間差異有待進一步研究。研究結(jié)果表明，表征其骨陷窩形態(tài)的骨陷窩長/短徑比值和骨化程度的骨陷窩面積比，可作為三者鑒定的重要顯微特征參數(shù)，并用于鑒別鹿角脫盤粉與鹿角粉及以鹿骨充偽等情況。

由哺乳動物角的形成可知[17]，鹿角為其皮膚的衍生物，系皮膚的真皮部分骨化而成（故鹿角屬骨質(zhì)角，即實角），而鹿角脫盤與鹿角兼具皮膚和骨的雙重特性，并隨其生長時期的不同此消彼長。從動物皮膚的角度分析，由于鹿角為其真皮發(fā)育形成，而真皮層的主要結(jié)構(gòu)是致密的結(jié)締組織，使動物的皮膚或是其衍生物（角）具有堅韌和彈性[17]，導(dǎo)致皮膚衍生初期的鹿角脫盤，較皮膚衍生發(fā)育期的鹿角具有更大的硬度和韌性，這與本研究中的鹿角脫盤的骨陷窩面積比較小，骨化程度較低，而鹿角的骨陷窩面積比較大，骨化程度較高的結(jié)果相吻合。此外，動物真皮結(jié)構(gòu)中還含有血管、神經(jīng)及色素細胞等，可維持其脫盤脫落后角的再生與生長（骨化）。對比鹿角與鹿角脫盤的顯微結(jié)構(gòu)，整體上鹿角脫盤樣品的棕色碎塊顏色偏紅，多呈紅棕色；而鹿角中的偏黃，多呈淺黃棕色，應(yīng)與鹿角脫盤更接近于皮膚，受血液供養(yǎng)較充足有關(guān)。同時依據(jù)脊椎動物骨骼結(jié)構(gòu)，骨質(zhì)角屬于皮性硬骨（或稱膜性硬骨），即在結(jié)締組織的基礎(chǔ)上直接由造骨細胞形成。其結(jié)構(gòu)中包含外層由骨板構(gòu)成的骨密質(zhì)和內(nèi)部由骨小梁（其上有骨陷窩和骨小管[16]）、骨髓質(zhì)部分組成的骨疏質(zhì)[17]；在骨形態(tài)學(xué)中，骨小梁面積是骨向分化的標志性指標[18]，即骨小梁面積增加，表明骨化程度增加。因此，表征骨疏質(zhì)的骨陷窩形態(tài)（長/短徑比值）和骨陷窩面積比，能夠表征鹿角脫盤到鹿角的不同骨化程度。也就是說，鹿角脫盤與鹿角不僅屬于不同的藥用部位，而且其骨化程度存在明顯差異性。從兩者生成機制與其顯微結(jié)構(gòu)上看，其堅硬的質(zhì)地與其骨化程度有關(guān)；隨著其骨化程度增加，即骨陷窩形狀由近圓形逐漸形成橢圓形或長條形、骨陷窩面積比增加，其硬度勢向降低。

本項目組前期研究表明，鹿角與鹿角脫盤不僅在顯微結(jié)構(gòu)上具有明顯的區(qū)別，兩者在化學(xué)成分上也存在一定的差異[11]。通過對其主要化學(xué)成分多糖、磷脂、蛋白質(zhì)與氨基酸、核苷、多胺等分析結(jié)果顯示，鹿角脫盤與鹿角在多糖、磷脂類成分上存在顯著性差異；而其他類成分的差異性較小。在差異性成分上，其總多糖含量鹿角脫盤顯著高于鹿角，表明隨著鹿角的骨化程度增加，其總多糖的含量降低，并且兩者在檢出的7 種單糖中，其構(gòu)成比例也明顯不同；而磷脂類成分中，其總磷脂及磷脂酰膽堿含量均為鹿角的高于鹿角脫盤，即隨骨化程度增加，磷脂類成分含量增加，這與脊椎動物硬骨的化學(xué)成分相一致（脊椎動物的硬骨內(nèi)含65%的無機鹽，其中絕大部分是磷酸鈣）[17]。在相似性成分上，鹿角與鹿角脫盤中的蛋白質(zhì)和水解氨基酸含量屬于動物藥材中含量較低的，應(yīng)與其為皮膚衍生物及骨化有關(guān)；小分子核苷類成分中，因其含量較低，兩者差異性較小；多胺類成分中的腐胺，兩者含量有差異（鹿角脫盤含量略高）但不顯著。這幾類成分均具有補益的作用，可見兩者的補益功效沒有顯著差異。從中藥鹿角臨床應(yīng)用的角度，若以補腎健骨作用為主，從有效物質(zhì)蛋白質(zhì)和氨基酸、核苷類成分等含量相似上分析，鹿角與鹿角脫盤兩者可同用；但如側(cè)重鹿角的活血消癰功效，則從其有效物質(zhì)多糖類成分含量差異的角度，鹿角與鹿角脫盤應(yīng)分開使用，以確保其臨床療效。