牛結(jié)節(jié)性皮膚病的特點和防控概述

劉 艷, 徐春志, 張 海, 袁翠霞, 楊 源, 楊 峰, 藺俐仲

(1. 貴陽市動物疫病預(yù)防控制中心,貴州 貴陽 550081; 2. 貴陽市鄉(xiāng)村振興服務(wù)中心,貴州 貴陽 550081)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(Lumpy skin disease,LSD)又稱牛結(jié)節(jié)疹、牛疙瘩皮膚病,是由痘病毒科,山羊痘病毒屬的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(Lumpyskindiseasevirus,LSDV)引起的急性、亞急性接觸性傳染病。主要臨床表現(xiàn)為體溫升高,口咽部、乳房、生殖器、直腸黏膜等區(qū)域出現(xiàn)特征性結(jié)節(jié),常伴隨產(chǎn)奶量減少、不育、早期胚胎死亡和厭食等癥狀,對牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重危害。1929年,贊比亞最早報道了牛結(jié)節(jié)性皮膚病,隨后該病相繼在不同國家和地區(qū)發(fā)生,現(xiàn)已呈世界性流行,是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定必須通報的傳染病[1]。2019年8月,新疆維吾爾自治區(qū)伊犁自治州首次報道了我國牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情[2]。2022年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將其列為二類動物疫病,是我國進境動物檢疫的A類疫病[3,4]。

1 病原學(xué)

LSDV屬于痘病毒科(Poxviridae),山羊痘病毒屬(Capripoxvirus)。山羊痘病毒屬包含3種病毒,除了LSDV外,還有綿羊痘病毒(Sheeppoxvirus,SPV)和山羊痘病毒(Goatpoxvirus,GPV),3種病毒的核苷酸序列同源性達95%以上,血清學(xué)檢測方法無法鑒別[5]。LSDV為雙鏈DNA病毒,基因組大小151 kb,由中央編碼區(qū)和兩端長24 kb的倒置末端重復(fù)序列組成,編碼156個基因。與其他痘病毒相比,LSDV病毒粒子較小,為260～320 nm,有囊膜,遺傳變異少,目前僅發(fā)現(xiàn)1種血清型,代表毒株為南非分離的 Neethling 株[6]。LSDV較穩(wěn)定,在干燥的痂皮內(nèi)可存活1個月以上,對紫外線、強酸、強堿敏感,乙醚、苯酚、次氯酸鈉、甲醛等消毒劑有殺滅作用[7]。高溫也可使病毒滅活,55 ℃ 2 h或65 ℃ 30 min可使其失去活性。在低溫環(huán)境下可長時間存活,-90 ℃可存活10年,在感染的組織液中4 ℃可存活6個月[8]。

2 流行病學(xué)

各品種和年齡的牛對LSDV均易感,但發(fā)病率有較大差異(2%～45%),病死率低于10%。通常歐洲品種牛發(fā)病率高于亞洲、非洲品種牛,同品種中產(chǎn)奶量高的牛發(fā)病率高于產(chǎn)奶量低的牛[9]。該病呈季節(jié)性流行,主要集中在潮濕多雨季節(jié)。主要傳染源為病牛,傳播媒介包括硬蜱、廄螫蠅、埃及伊蚊等吸血節(jié)肢動物。有研究表明,病毒可隨硬蜱卵進入子一代蜱體內(nèi),經(jīng)歷變態(tài)發(fā)育階段,從而增加了土壤、植被污染的可能,使徹底清除環(huán)境中的LSDV難度加大,在雨季多發(fā)可能與雨季節(jié)肢動物活動頻繁有關(guān)[10]。該病自1929年首次在贊比亞發(fā)現(xiàn)以來,1980年蔓延至非洲大部分地區(qū),2012年在中東、巴爾干地區(qū)、南高加索、俄羅斯和歐洲部分地區(qū)迅速傳播,隨后向東蔓延至哈薩克斯坦及東南亞地區(qū),2019年8月傳入我國新疆地區(qū),隨后福建、江西、廣東、安徽、浙江相繼發(fā)生,成為危害我國養(yǎng)牛業(yè)的重大疫病之一[11]。

3 臨床癥狀及病理變化

該病在自然條件下潛伏期為2～5周,實驗室條件下潛伏期為7～14 d。按病程可分為3種形式:急性、亞急性、慢性。感染初期臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、消瘦、眼分泌物增多、產(chǎn)奶下降,發(fā)病2～3 d時皮膚開始出現(xiàn)結(jié)節(jié),隨后表現(xiàn)疼痛和充血的結(jié)節(jié)性病變,尤其是口吻、鼻孔、背部、腿部、陰囊、會陰、眼瞼、耳部、鼻黏膜、口腔黏膜及尾部。病情嚴(yán)重者全身皮膚出現(xiàn)大量略微隆起的堅硬結(jié)節(jié),累及皮下組織和肌肉組織,持續(xù)7～12 d,隨后發(fā)展為丘疹、水皰、膿皰,形成結(jié)痂,病灶愈合較慢,鼻孔、呼吸道、口腔和外陰黏膜出現(xiàn)損傷。2～3周后皮膚損傷加劇,出現(xiàn)壞死,病牛不適感增加,表現(xiàn)沉郁少動。皮膚病灶常會形成栓塞狀壞疽,脫落后皮膚上留下大面積潰瘍灶,這是1種特征性病變,潰瘍灶受到細(xì)菌和螺旋錐蠅的侵襲,進而導(dǎo)致敗血癥的發(fā)生[12,13]。該病可引發(fā)外生殖器損傷,急性感染期的懷孕母?？砂l(fā)生流產(chǎn),且導(dǎo)致不孕后遺癥[14]。組織病理學(xué)檢查可在角質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞的胞漿內(nèi)觀察到嗜酸性包涵體,棘突細(xì)胞內(nèi)有氣球樣變性;在病灶部位的皮下和真皮組織可見大量炎性細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞)浸潤;在某些病例中還可觀察到壞死性血管炎、淋巴管擴張、皮下肌肉組織凝固性壞死[15]。利用免疫組化方法可在真皮層結(jié)締組織的巨噬細(xì)胞中檢測到病毒顆粒[16]。

4 診斷

4.1 臨床診斷

根據(jù)病牛的臨床癥狀,結(jié)合發(fā)病季節(jié)和流行特點可進行初步診斷。當(dāng)病牛皮膚、口腔黏膜出現(xiàn)特征性結(jié)節(jié)病變,體溫升高、產(chǎn)奶量下降等臨床癥狀,且當(dāng)?shù)赜蠰SD流行的情況下,應(yīng)首先考慮LSD。該病與假性腫塊性皮膚病、蕁麻疹、鏈霉菌病(剛果嗜皮菌感染)、癬、皮下組織感染、光敏反應(yīng)、丘疹性口腔炎、口蹄疫、病毒性腹瀉、惡性卡他熱等疾病臨床癥狀有相似之處,應(yīng)進行鑒別診斷[17]。

4.2 實驗室診斷

LSD的實驗室診斷包括電子顯微鏡檢查、病毒分離鑒定(VI)、血清學(xué)試驗[血清中和試驗、瓊脂凝膠免疫擴散、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗、間接熒光抗體試驗(IFAT)]、分子生物學(xué)試驗[聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、熒光PCR、環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增(LAMP)]。病毒分離鑒定是診斷LSDV的金標(biāo)準(zhǔn),但耗時耗力,通常需數(shù)周才能在組織培養(yǎng)物或雞胚絨毛尿囊膜中分離出LSDV,在臨床檢測中并不常用[18]。PCR和熒光PCR方法是檢測皮膚樣品中LSDV最敏感的方法。Kasem S等[19]開發(fā)了診斷LSDV的PCR檢測方法:設(shè)計引物L(fēng)SDV-F(5’-AGTACAGTTAG TAGCGCAACC-3’)和LSDV-R(5’-GGGTGAAC TACAGCTAGGTATC-3’),擴增基因片段554 bp。擴增程序:95 ℃預(yù)變性10 min;95 ℃變性55 s,50 ℃退火55 s,72 ℃延伸90 s,共40個循環(huán);72 ℃延伸10 min。該方法可用于LSDV的特異性檢測。Wang H等[20]建立了鑒別綿羊痘病毒、山羊痘病毒、牛結(jié)節(jié)性皮膚病毒的多重?zé)晒釶CR檢測方法,具有良好的敏感性和特異性,可用于臨床診斷。伍子昂等[21]建立了針對LSDV的TaqMan實時熒光定量PCR方法,特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好,可用于臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

5 防疫及凈化

5.1 疫苗免疫

目前國內(nèi)尚無專用LSD疫苗生產(chǎn)的相關(guān)報道,國外已有LSD疫苗的研制報道。牛場要做好日常消毒工作,殺滅硬蜱、蚊、蠅等吸血節(jié)肢動物,疫區(qū)要及時為牛群接種疫苗。預(yù)防LSD的疫苗按毒株類型可分為同源疫苗和異源疫苗2大類。

5.1.1 同源疫苗

LSD減毒活疫苗(LSD Neethling strain)是目前效果較好的同源疫苗。2016—2017年LSD在歐洲東南部暴發(fā),當(dāng)?shù)夭捎肗eethling減毒活疫苗進行緊急免疫,使疫情得到了有效控制。該疫苗的效力已通過歐盟LSD參考實驗室認(rèn)證,但存在一定程度的不良反應(yīng),如在疫苗接種部位的局部或較大范圍出現(xiàn)小的皮膚結(jié)節(jié)、產(chǎn)奶量暫時降低等(臨床上稱為“Neethling反應(yīng)”)[22]。2022年印度開發(fā)了1種名為“Lumpi ProVacInd”的減毒活疫苗,保護力可持續(xù)至少1年,該疫苗的推出有望緩解印度LSD流行[23]。

5.1.2 異源疫苗

山羊痘病毒屬的不同病毒之間存在較高的抗原同源性,山羊痘疫苗和綿羊痘疫苗均可用于LSD的免疫預(yù)防,其中山羊痘疫苗已被哈薩克斯坦等多個國家選定為預(yù)防LSD的疫苗。與同源LSD減毒疫苗相比,山羊痘疫苗引起的副反應(yīng)更少,價格更低。土耳其、俄羅斯等國家采用減毒綿羊痘疫苗(RM65)進行LSD免疫,可提供有效的保護力,但可能存在潛在的未知風(fēng)險,已有研究證明高劑量的綿羊痘疫苗(RM65)可能引起牛全身性的皮膚損傷[22]。目前國內(nèi)普遍使用山羊痘疫苗(按照山羊的5倍劑量)進行LSD免疫預(yù)防,有效控制了該病在我國的蔓延[24]。

5.2 凈化

LSD在我國屬于外來疫病且危害嚴(yán)重,一旦發(fā)現(xiàn)該病應(yīng)及時上報疫情,按規(guī)定撲殺并銷毀疫點內(nèi)的所有發(fā)病和病原學(xué)陽性牛,并對所有病死牛、撲殺牛及其產(chǎn)品進行無害化處理,目前不建議對發(fā)病牛進行治療[24]。